肉制品和饲料中鸭源性成分PCR鉴别方法标准化研究

【摘要】最近据媒体报道及相关职能部门反映鸭肉制成“涮羊肉和烤羊肉”现象很严重。针对此状况，很多部门诸如工商、药监和质监等部门需要对市场中可疑样品进行检测，迫切需要建立该方面相关标准，为肉制品中掺假鉴定及责任追查提供标准依据。另一方面，处于监管和国家层面动物疫病控制的大局，各国普遍禁止动物源性成分在某些动物源性饲料，特别是反刍动物饲料中使用，因此需要建立该方面检测方法标准。在本研究中，根据鸭特异性基因细胞色素C氧化酶III（COIII）基因序列，设计普通PCR特异引物及荧光定量PCR引物及探针，分别建立肉制品和动物源性饲料中鸭源性成分检测的普通PCR和实时荧光PCR两种检测方法。在肉制品鸭源性成分检测研究中，对所设计引物进行特异性预测及实际检验，PCR扩增结果表明所应用引物与常见畜禽物种包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉间无同源性，引物具有较大特异性。在对市售肉卷、肉板中鸭源性成分实际检测中，均能对其掺有的鸭源性成分有效检测，与市场调查结果一致。另外，采用50mg/kg羊肉DNA溶液对鸭肉DNA进行稀释，结果表明：较大浓度羊肉DNA的存在不影响鸭肉灵敏度测试，灵敏度可达0.1μg/kg，能够满足实际检测需要。另外，肉制品由于加工等工艺原因，DNA会受到影响，特别是加热时DNA片段会变短，因此，引物设计时所要扩增的目的片段要求较短。本研究中设计的引物所扩增的目的片段较短（201bp），适于对加工的肉制品中添加的鸭源性成分进行检测。对烤鸭、鸭脖、鸭翅、鸭肠制品和鸭舌、鸭爪、鸭酱进行实际样品测试，均能够有效检测出鸭源性成分。结果表明，建立的普通PCR方法和荧光定量PCR方法均能快速、有效检测出样品中的鸭源性成分，方法快速、准确、灵敏度高、特异性强。在对动物源性饲料中鸭源性成分检测方法研究中，以掺有鸭骨粉的骨粉饲料、鸭血饲料、水解羽毛粉和未掺有鸭骨粉的水产预混料、葵花饼粉动物饲料分别进行普通PCR检测和荧光定量PCR检测，结果表明该方法能够有效检测出骨粉饲料、鸭血饲料和水解羽毛粉中鸭源性成分，而水产预混料、葵花饼粉未检出鸭源性成分。在灵敏度试验中，当鸭成分含量在100%、10%、1%、0.1%时有扩增条带，最低检出限为0.01%，灵敏度能够满足实际检测需要。结果表明，建立的普通PCR方法和荧光定量PCR方法均能对样品中的鸭源性成分进行检测，方法快速、准确、灵敏度高，能够满足实际检测需要。
【作者】康文欣；
【导师】高朝辉；
【作者基本信息】吉林大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】肉制品；动物源性饲料；普通PCR；荧光定量PCR；检测；

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