Rho/ROCK信号转导通路中关键蛋白在过度训练致大鼠急性肾损伤中的作用及山莨菪碱、法舒地尔干预的影响

【摘要】目的：在体育运动和军事训练中，可发生因过度训练而导致的急性肾损伤(overtraining-inducedacutekidneyinjury,OTIAKI)，其发病率呈逐年增高趋势，病死率较高，可达25%[1]，因此探讨其致病机制和防治措施具有重要的临床及军事意义。研究表明，Rho/ROCK信号通路可通过破坏细胞骨架、诱导细胞凋亡、激活炎症反应、介导血管平滑肌细胞收缩等多种作用导致急性肾损伤[2-5]，而其是否参与了OTIAKI的病理生理过程，尚未见文献报道。本研究通过大鼠游泳致力竭，建立大鼠过度训练致急性肾损伤模型，拟评价OTIAKI时大鼠肾组织Rho/ROCK信号转导通路中关键蛋白的表达变化及其意义，观察山莨菪碱、法舒地尔对其表达变化的影响，为临床研究提供参考。方法：(1)清洁级雄性SD大鼠54只，体重180~200g，随机分为4组：对照组(CN,n=6)、力竭组(ES,n=18)、山莨菪碱组(AD,n=12)和法舒地尔组(FA,n=18)。按大鼠力竭后即刻、6h和24h，ES组又分为ESI、ES6h和ES24h3个亚组(n=6)；AD组又分为AD6h和AD24h2个亚组(n=6)；FA组又分为FAI、FA6h和FA24h3个亚组(n=6)。CN组不进行力竭运动；ES组、AD组和FA组大鼠于力竭运动前20min分别腹腔注射灭菌注射用水2ml/kg、山莨菪碱10mg/kg和法舒地尔15mg/kg。采用大鼠无负重单次游泳至力竭法建立过度训练大鼠模型。(2)腹腔注射10%水合氯醛0.6ml/kg麻醉，腹正中切开，下腔静脉取血，采用全自动生化仪测定血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。摘取双肾，左肾放入冻存管置－80℃冰冻保存，待WesternBlotting检测肾组织ROCK-1的表达和肌球蛋白磷酸酶目标亚单位-1(MYPT1)的磷酸化水平。右肾纵向切开，置于4℃4％多聚甲醛中固定，制作石蜡切片，HE染色，光镜下观察肾组织病理变化。(3)统计学处理：采用SPSS13.0软件包进行统计学分析，正态分布的定量数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，P＜0.05为差异有统计学意义。结果：(1)CN组大鼠饮食正常，皮毛光滑亮泽，活动自如，反应灵敏。ES组大鼠力竭后全身颤动不止，精神萎靡，活动困难，无法站立，球结膜充血，对外界刺激反应迟钝；AD组和FA组大鼠力竭后，一般状况及精神情况均较ES组好。(2)肾功能结果：与CN组比较，ESI、ES6h组血清BUN、Cr升高，ES6h达高峰(P＜0.05)，ES24h组恢复到CN组水平(P＜0.05)；与ES同期亚组比较，AD6h组、FAI和FA6h组血清BUN、Cr降低(P＜0.05)，未恢复到CN组水平(P＜0.05)；AD24h和FA24h组恢复到CN组水平(P>0.05)。(3)肾组织病理结果：CN组肾组织无明显病理变化。ESI和ES6h组可见肾小管扩张，肾小管上皮细胞水肿；ES24h组可见肾小管明显扩张，肾小管上皮细胞刷状缘不规整、脱落。与ES同期亚组比较，AD和FA各亚组肾组织病理改变均有所减轻。(4)WesternBlotting法检测结果：与CN组比较，ES组ROCK-1和P-MYPT1表达上调，ES6h组表达最高(P＜0.05)；与ES同期亚组比较，AD组、FA组ROCK-1和P-MYPT1表达下调（P＜0.05）。结论：1过度训练致大鼠急性肾损伤时，肾组织ROCK-1和P-MYPT1表达增多，用Rho激酶特异性抑制剂法舒地尔预先干预后可逆转这种变化，提示Rho/ROCK信号通路可能在过度训练致大鼠肾损伤中发挥重要作用。2山莨菪碱可减少OTIAKI时肾组织ROCK-1和P-MYPT1的表达，提示山莨菪碱可通过部分抑制Rho/ROCK信号通路来减轻过度训练大鼠肾组织损伤，从而起到肾脏保护作用。3法舒地尔作为Rho激酶特异性抑制剂，对过度训练致急性肾损伤有保护作用，为OTIAKI的临床研究提供参考。
【作者】杜新芳；
【导师】吴广礼；
【作者基本信息】河北医科大学，内科学，2014，硕士
【关键词】过度训练；肾；Rho激酶；山莨菪碱；法舒地尔；

【参考文献】
[1]吴福朝,于洪川,袁波,韦穗.摄像机内参数自标定——理论与算法[J].自动化学报,1999,06:769-776.
[2]郑寇全,雷英杰,王睿,王艺菲.直觉模糊时间序列建模及应用[J].控制与决策,2013,10:1525-1530.
[3]陈莉莉.γ-谷氨酰转肽酶与代谢综合征各组分的相关性研究[D].山东大学,流行病与卫生统计学,2013,硕士.
[4]杨凯.追踪积分偏移法[J].石油地球物理勘探,1989,06:723-728+736.
[5]仇文军,孔英会,贾俊敏.一种火电厂生产实时数据的存储及显示系统[J].广东自动化与信息工程,2004,03:48-50.
[6]蒋渝,王蔚韬,张建高,何光辉.数据挖掘中的数据品质问题及其挖掘[J].计算机科学,2002,12:141-142.
[7]徐旭,梁艳春,时小虎,刘淑芬.基于输入输出回归神经网络的超声马达辨识和速度控制(英文)[J].自动化学报,2003,04:509-515.
[8]余玉华.基于哈特曼—夏克波前传感器的图像复原[D].浙江大学,光学工程,2013,硕士.
[9]陈楠.单相双逆变模式补偿器的设计[D].长春工业大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.
[10]柳彦平,王文杰,谈恒贵.数据挖掘空间聚类[J].计算机工程与应用,2005,35:173-176+196.
[11]赵佳琪.非自治动力系统中几个性质的研究[D].西北大学,基础数学,2013,硕士.
[12]权宏.红龙草的组织培养及发根农杆菌对红龙草的遗传转化研究[D].华南师范大学,植物学,2004,硕士.
[13]郑少萌.四种多肽的合成和分离纯化的基础研究[D].首都师范大学,分析化学,2014,硕士.
[14]谢佩儿（TsePuiYi）.香港地区行IVF-ET妇女之中医证候、体质分型与心理因素对妊娠率的影响[D].广州中医药大学,中医妇科学,2014,博士.
[15]王晨.亚低温对创伤性脑损伤患者免疫功能的影响[D].苏州大学,神经外科,2013,硕士.
[16]李若涵.股东代表诉讼制度的困境与完善[D].兰州大学,民法学（专业学位）,2013,硕士.
[17]项敏.新时期高校思想政治教育校内资源开发与配置研究[D].南通大学,思想政治教育,2010,硕士.
[18]黄文.私营企业发展问题及对策[D].华东师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2003,硕士.
[19]董延龙.地震作用下高铁的车桥耦合振动分析[D].华中科技大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[20]郑卫峰.H型高血压与老年女性冠心病的关系研究[D].郑州大学,内科学（专业学位）,2013,硕士.
[21]赵效阳.石墨烯/氮化硼层状复合材料的理论研究[D].山东大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[22]蒋开军.湖南部分柑桔野生资源及栽培品种的RAPD分析[D].湖南农业大学,果树学,2004,硕士.
[23]董军启.板翅式换热器传热特性研究[D].大连海事大学,轮机工程,2004,硕士.
[24]蔡蓉,饶维,张朝晖.石墨烯修饰四溴双酚S印迹电化学传感器研究[J].化学通报,2013,10:923-928.
[25]沈沉,黄少伟,陈颖.未来电网的快速建模与仿真方法初探[J].电力系统自动化,2011,10:8-15+29.
[26]杨阳.郊野公园乡土景观表达与营造的研究[D].东北农业大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[27]张松艳.基于遗传算法的FlowShop调度的研究与应用[D].浙江工业大学,2009.
[28]杨晓龙.镍黄铁矿和黄铜矿微生物浸出差异性研究[D].北京有色金属研究总院,矿物加工工程,2013,硕士.
[29]李浩.水射流渐进成型系统研究[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2013,硕士.
[30]龚志辉.基于遗传算法的矩形件优化排样系统研究[D].湖南大学,机械设计及理论,2003,硕士.
[31]杜建伟.检察机关直接受理案件的侦查相关问题探析[D].苏州大学,法律,2003,硕士.
[32]赵君,单琬斐,夏心贝,王旗.以碳粉为负极材料制备锂离子电池及电池性能测试[J].大学物理实验,2013,05:6-8.
[33]路慧敏.Ⅲ族氮化物量子阱光电子学特性和应用的研究[D].北京交通大学,2011.
[34]薛会会.公司治理、税收负担与公司劳动雇佣[D].河南财经政法大学,会计学,2013,硕士.
[35]陈明.无线传感器网络协作通信技术的能量效率研究[D].南京邮电大学,电路与系统,2013,硕士.
[36]姜玲.城市交通出行时间波动性的价值评估研究[D].南京理工大学,交通信息工程与控制,2013,硕士.
[37]张晶.晋唐绘画色彩观演变研究[D].华东师范大学,美术学,2002,硕士.
[38]陶蕾.美国基础教育问责制度研究[D].西南大学,比较教育学,2013,硕士.
[39]王元荪.专利公告摘报[J].商品混凝土,2014,10:14-15.
[40]王夫歌,秦勇,程晓卿,高旭东,邢宗义.基于GAHP的铁路大雪灾害风险模糊综合评估[J].铁道标准设计,2015,07:55-60.
[41]解学军,张大雷.基于径向基函数网络的非线性离散时间系统的自适应控制[J].自动化学报,2000,03:414-418.
[42]杨诚诚.局域网环境下TCP/IP协议栈实时性改进[D].哈尔滨工业大学,计算机技术,2013,硕士.
[43]王佳佳.苏南地区都市休闲度假型观光农业园景观规划设计方法初探[D].苏州大学,园林植物与观赏园艺,2014,硕士.
[44]孔寰宇.儒道文化中心理卫生思想初探[D].黑龙江中医药大学,中医医史文献,2014,硕士.
[45]万红军.东亚国际秩序的变迁与琉球问题[D].华中师范大学,国际关系史,2013,硕士.
[46]连云.我国离婚经济帮助制度研究[D].大连海事大学,民商法,2014,硕士.
[47]吴正朋,刘思峰,崔立志,米传民,王建玲.基于单调函数的新弱化缓冲算子研究[J].控制与决策,2009,07:1055-1058.
[48]万安琪.当代中国的政治合法性问题研究[D].山西师范大学,政治学理论,2014,硕士.
[49]郝兴东.CFRP系杆拱桥的受力性能研究[D].长安大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[50]姜璐.息差宽幅下的银行盈利模式现状及改进研究[D].河北大学,会计学,2014,硕士.