慢病毒介导RNA干扰对慢性粒细胞白血病增殖的影响

【摘要】目的：通过慢病毒载体介导靶向bcr/abl融合基因的体外的RNA干扰作用,研究其对K562细胞增殖活性的影响。为后续研究以及临床治疗提供依据。方法：通过4质粒共转293T细胞,包装携带干扰片段的慢病毒,通过慢病毒转染K562细胞,把干扰片段整合到K562细胞基因组中,达到持续治疗的效果。利用反转录PCR及Westernblotting验证RNAi对融合基因bcr/abl以及其编码的P210蛋白的影响。采用CCK-8法、软琼脂细胞集落形成实验检、细胞周期检测、和BrdU掺入实验检测RNA干扰对K562细胞的影响。通过小鼠成瘤实验检查细胞体内成瘤能力。结果：Real-timePCR及Westernblotting实验结果显示：B/A1、B/A2、B/A3实验组细胞与空白组细胞相比较bcr/ablmRNA表达和P210bcr/abl蛋白表达有明显的降低,而阴性对照组与空白组相比变化不大。CCK-8实验显示：阴性对照GFP组培养后24h和48h与空白组相比变化不大,而实验组B/A1、B/A2和B/A3组均对K562细胞的增殖有明显的抑制作用。软琼脂细胞集落形成实验与空白组相比,阴性对照组几乎没有影响,B/A1组、B/A2组、和B/A3组抑制率分别为空白组的44.3%、30.1%和34.7%。慢病毒介导bcr/abl基因RNAi实验组与对照组相比K562细胞中bcr/abl和P210bcr/abl融合蛋白表达明显下调,增殖率降至对照组的46.4%、41.5%和33.0%。细胞周期检测结果显示：B/A1组、B/A2组和B/A3组G0/G1细胞明显多于空白对照组,阴性对照组和空白组没有明显的差别。BrdU掺入实验结果显示：B/A1组、B/A2组、和B/A3组BrdU掺入细胞的阳性细胞率明显低于空白组。B/A1组体小鼠体内成瘤能力明显低于对照GFP组。结论：慢病毒载体介导靶向bcr/abl融合基因的体外的RNA干扰,可明显的抑制K562细胞的增殖,有望成为治疗慢性粒细胞白血病的有效方法。
【作者】潘彦鹏；
【导师】郝新宝；曹献英；
【作者基本信息】海南大学，生物化工，2014，硕士
【关键词】慢病毒；bcr/abl基因；P210bcr/abl；增殖；

【参考文献】
[1]王永平.鄂尔多斯市东胜区中学教师专业素质发展状况与建议[D].内蒙古师范大学,教育管理（专业学位）,2013,硕士.
[2]赵颖.丹东地区地震活动特征研究及震后趋势快速判定平台建立[D].吉林大学,固体地球物理学,2013,硕士.
[3]黄朝明.征地过程中的利益分配研究[D].中国农业大学,土地资源管理,2004,硕士.
[4]苗菲菲.北方某冶选尾矿库周边水体污染对生物的毒害效应研究[D].内蒙古科技大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[5]高少武,赵波,祝树云,罗国安,贺振华.余弦函数自适应法识别与消除单频干扰[J].石油地球物理勘探,2011,01:64-69+164+170.
[6]齐国富.EPON技术在住宅小区通信接入中的设计与实现[D].西安科技大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[7]张玉.制药企业社会责任报告信息披露研究[D].浙江工商大学,会计（专业学位）,2014,硕士.
[8]丁楠.一种嵌入式电力通信管理机的研究与系统设计[D].湖南大学,软件工程,2010,硕士.
[9]刘建华,刘国买,杨荣华,胡文瑜.粒子群算法的交互性与随机性分析[J].自动化学报,2012,09:1471-1484.
[10]王秀芹.煤矿机械用点线啮合齿轮传动设计及失效分析研究[D].河北科技大学,机械工程,2013,硕士.
[11]朱莹雯.组织激肽释放酶8在宫内感染脑白质损伤仔鼠海马及血清中的表达[D].苏州大学,儿科学,2013,硕士.
[12]侯洁.基于系统动力学的我国煤炭资源供需系统研究[D].中国矿业大学,工程管理,2014,硕士.
[13]代世光.基于灰色—变权理论的铁路隧道施工安全风险识别与评价[D].西南交通大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[14]刘深.《赵柏岩诗集》校注[D].广西大学,汉语言文字学,2004,硕士.
[15]田星昱.我国巨灾再保险及证券化应用研究[D].云南财经大学,数量经济学,2014,硕士.
[16]田冬英.两栖可变形机器人控制系统与自主越障研究[D].沈阳理工大学,模式识别与智能系统,2013,硕士.
[17]曹永娜.中国外汇储备与房地产价格关系的实证研究[D].山东大学,金融学,2013,硕士.
[18]赵学利.基于ComGIS的高速公路机电养护管理系统[D].河北科技大学,计算机技术,2014,硕士.
[19]苏林萍.基于数据挖掘技术的电子商务模式研究[D].华北电力大学（北京）,计算机应用技术,2003,硕士.
[20]刘国权.基于ZigBee无线网络的吊钩偏摆远程监测系统[D].广东工业大学,精密仪器及机械,2014,硕士.
[21]李健.UMTS中基于视频内容的选择性ARQ方法[D].南京邮电大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[22]刘殿雄.土地政策参与宏观调控的指数验证分析[D].首都经济贸易大学,区域经济学,2014,硕士.
[23]夏玮.民航事故分析决策支持系统的研究与实现[D].辽宁工程技术大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[24]杜薇.急性冠脉综合征预后证候与SIRS回顾性病例关系研究[D].北京中医药大学,中西医结合临床,2014,硕士.
[25]丁刚.创业投资与物联网产业创新绩效研究[D].南京理工大学,金融学,2013,硕士.
[26]姜红桥.Barton骨折术后运用经方续骨活血汤的疗效观察[D].湖北中医药大学,中医骨伤科学（专业学位）,2013,硕士.
[27]张常乐.北京私家园林路径空间量化研究[D].南京农业大学,城市规划与设计,2012,硕士.
[28]曹云斌.GaX（X=F，Cl，Br）分子势能函数和光谱性质的研究[D].鲁东大学,原子与分子物理,2013,硕士.
[29]赵诚.美国多德—弗兰克法案解读[D].复旦大学,民商法,2012,硕士.
[30]吴平.我国生育权法律制度研究[D].上海社会科学院,民商法学,2012,硕士.
[31]徐怀宝,刘继山.准噶尔盆地东部速度异常原因分析[J].石油地球物理勘探,2002,S1:160-163.
[32]宋赛花.梁启超的逻辑——方法论思想述评[D].华东师范大学,逻辑学,2001,硕士.
[33]张剑飞.贝叶斯网络学习方法和算法研究[D].东北师范大学,2005.
[34]施海燕,柴珺芳,孙国君,单伟光.政府引导下的产学研合作共生机理[J].经营与管理,2012,09:131-133.
[35]檀倩.论编造、故意传播虚假恐怖信息罪[D].河北师范大学,刑法学,2013,硕士.
[36]欧阳新枝.具有偏好信息的多阶段风险投资的决策分析[D].西安电子科技大学,运筹学与控制论,2012,硕士.
[37]郭勇诚.我国劳动教养制度的改革与完善[D].华东师范大学,宪法学与行政法学,2013,硕士.
[38]袁晓娟.基于有效教学的课堂教学行为研究—数学课堂观察[D].东北师范大学,数学课程与教学论,2012,硕士.
[39]吴国浩.掺杂锐钛矿相TiO_2的第一性原理研究[D].河北大学,微电子学与固体电子学,2014,硕士.
[40]宋小姣.白居易诗歌联合式复音词研究[D].西北大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[41]孙改霞.赵柏岩文集校注[D].广西大学,汉语言文字学,2004,硕士.
[42]汝岩,陈朋,金峰.一种超宽阻带共面混合桥电磁带隙新结构[J].吉林大学学报(信息科学版),2014,02:151-157.
[43]吴方明.基于知识库的渗透测试评估方法研究与实现[D].吉林大学,网络与信息安全,2014,硕士.
[44]梅轩.社会文化视阈下的英语教学对阅读成绩影响的研究[D].大连海事大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[45]张月.关于it-凸性相关问题的研究[D].河北师范大学,基础数学,2014,硕士.
[46]赵利强.不同种类砧木嫁接对西瓜生长发育和果实品质的影响[D].华中农业大学,设施园艺,2014,硕士.
[47]陈明晶.基于J2EE技术架构的分析型CRM系统的设计与实现[D].浙江工业大学,2003.
[48]吴凡.论软腭与歌唱发声之关系[D].武汉音乐学院,音乐与舞蹈学,2013,硕士.
[49]马春野.AT2受体在脑缺血再灌注中的作用及其机制的研究[D].大连医科大学,内科学,2014,博士.
[50]江海波.视网膜色素变性T17M视紫红质突变诱导细胞死亡的机制研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.