【摘要】目的：构建慢病毒介导的能够稳定沉默卵巢癌SKOV3细胞中RhoC基因的干扰载体,观察其对卵巢癌SKOV3细胞内RhoC基因表达的抑制作用。材料和方法：将产生RhoCmiRNA分子的携带绿色荧光蛋白（GFP）的重组慢病毒感染卵巢癌SKOV3细胞后，用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞系。应用荧光定量PCR法检测SKOV3细胞中的RhoCmRNA。结果：成功构建了特异性干扰载体,将其转染SKOV3细胞 […]

【摘要】目的：研究特异性HER2-shRNA慢病毒载体体外感染乳腺癌细胞SKBR-3后人表皮生长因子受体2（HER2）基因的沉默对肿瘤细胞生物学行为的影响，并通过体内移植瘤实验研究靶向沉默HER2基因后对肿瘤的基因治疗作用以及SPECT显像活体评价RNA干扰（RNAinterference，RNAi）效能的可行性，初步探索SPECT分子影像技术在基因治疗领域的应用前景。方法：①利用本实验室保存的有 […]

【摘要】自Mattioli等于1988年首次对猪卵母细胞体外成熟(IVM)研究以来,在许多研究人员的努力下,虽然猪卵母细胞IVM体系得到了较大的改进和优化,但是IVM效果依然较差。影响卵母细胞IVM效果的因素有许多,如：IVM基础培养液的成分；IVM培养液中的添加成分：激素及其浓度、细胞因子、卵泡液、抗氧化物质及维生素等；采取卵子的卵泡直径大小；卵母细胞周围包裹卵丘细胞的有无及数量多少；成熟培养时 […]

【摘要】比格犬广泛应用于国家二类以上新药研发，但比格犬在繁殖方面出现了不发情、发情不孕、休情期长、窝产仔数减少等现象，为了探讨该犬繁殖性能降低的机理，本研究对ERβ剪切异构体的蛋白定位及其生物学功能进行研究。通过构建ERβ剪切异构体重组真核表达载体，瞬时转染HEK293T细胞，检测目的蛋白在体外细胞表达及定位情况；建立稳定表达ERβ剪切异构体细胞系；构建针对目的基因慢病毒介导RNA干涉表达载体，利 […]

【摘要】基因治疗和转基因研究中,利用定点整合酶有效地将目的基因位点特异性地整合到细胞基因组中,可以使目的基因获得安全和长期的表达。ΦC31整合酶作为一个来源于链霉菌噬菌体的位点特异性整合酶,近年来它被广泛应用于基因治疗和转基因研究中,但是和病毒载体相比,它存在一个效率较低的问题。来源于HIV的慢病毒载体系统为目前最广泛使用的整合性病毒基因载体,但是HIV整合酶介导的随机整合构成其基因治疗应用安全性 […]

【摘要】第一部分过表达GDF-5基因大鼠脂肪干细胞构建的条件探索和筛选目的：探索慢病毒介导过表达GDF-5基因大鼠脂肪干细胞(ASCs)的构建条件和纯度筛选。方法：取大鼠腹股沟脂肪垫组织,采用Ⅰ型胶原酶消化贴壁培养方法分离培养大鼠ASCs。倒置相差显微镜观察培养细胞的形态学,CCK-8法测定细胞生长曲线,流式细胞仪进行细胞表型鉴定。制备带GDF-5/GFP嵌合基因的慢病毒载体系统,探索不同感染复数 […]

【摘要】青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化是手术失败的最主要原因。失败的滤过性手术的滤过泡结膜上皮下有异常增厚的致密胶原纤维结缔组织,伴有成纤维细胞的活跃增生,阻塞滤过道,从而失去房水引流功能。目前手术中经常联合使用的抗代谢药物,如五氟脲嘧啶(5-FU),丝裂霉素(mitomycin,MMC)等,虽然可以减少术后滤过道瘢痕形成,提高手术的成功率,但其抗代谢作用也可导致一系列术后低眼压、滤过泡渗漏等并发症, […]

【摘要】研究目的：磷酸二酯酶(phosphodiesterases,PDEs)是体内唯一负责水解第二信使环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的酶类。磷酸二酯酶4(phosphodiesterases4,PDE4)是PDEs家族成员之一,PDE4抑制剂的研究主要集中在呼吸系统和中枢神经系统疾病上,在临床上主要用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘及银屑病。近年来,越来越多的研究表明,P […]

【摘要】第一部分稳定表达绿色荧光蛋白的McA-RH7777细胞株的建立及生物学特性评价目的：构建稳定表达绿色荧光蛋白的McA-RH7777细胞株,并对其生物学特性进行评价。方法：通过对慢病毒载体包装,将携带增强型绿色荧光蛋白(enhancegreenfluores-centprotein,EGFP)的慢病毒转染McA-RH7777细胞株,并进行筛选和单克隆化,构建出表达绿色荧光蛋白的单克隆细胞株： […]

【摘要】乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均居全世界女性肿瘤首位。约有30%的患者即便在疾病早期治疗，最终仍会复发、转移。在诊断时即发生转移的患者，常规的治疗通常最初能够有效的控制疾病的发展，但随着时间的发展，大多数患者最终会病情恶化。为了减少病死率，研发新的治疗策略，这就需要我们充分掌握乳腺癌细胞的分子生物学特点。研究发现肿瘤细胞中存在着一小部分干细胞样的细胞，这部分细胞具有自我更新 […]