带鱼蛋白酶解制备抗氧化活性肽的研究

【摘要】人体内的自由基水平失衡会造成机体各种不可逆的氧化性损伤,加速机体的衰老并诱发各种疾病,外源性抗氧化剂可以帮助人体维持自由基的平衡。带鱼蛋白质含量丰富,营养价值极高,可作为制取抗氧化肽的优质原料。长期以来,带鱼由于加工技术水平和回收手段落后,造成资源利用率低、浪费严重等现象,同时由于大量营养成分流失,更造成了环境的污染。本文以带鱼为原料,优化带鱼蛋白的酶解条件,评价了酶解物的抗氧化特性,并采用多种分离技术方法对抗氧化肽进行分离纯化,为抗氧化肽的制备提供新途径。采用Alcalase2.4L酶解带鱼蛋白,通过可控酶解技术结合响应面试验分析,正交试验分析优化带鱼蛋白的酶解条件,制备出具有高抗氧化活性的酶解物。研究结果表明：酶解液清除DPPH自由基的最佳条件为酶解温度48℃,加酶量1.65%,酶解时间3.80h,水料比1：3,清除率达到60.13%；清除·OH自由基的最佳条件为酶解温度50℃,加酶量1.60%,酶解时间5.50h,料液比1：2,清除率为58.73%；还原力达最大值的反应条件为酶解温度50℃,加酶量2.00%,酶解时间5.00h,水料比1：6,A700nm达到3.13；清除ABTS+自由基的最佳条件为酶解温度50℃,加酶量0.60%,酶解时间120mmin,料液比1：20,清除率为69.58%；清除O2-·自由基的较优条件为加酶量3.20%,酶解温度50。C,酶解时间3.00h,料液比1：3,清除率为47.31%研究了Alcalase2.4L酶解带鱼蛋白的动力学模型。研究结果表明：在酶解温度50℃,pH8.0的条件下,酶解速率方程和水解度方程分别为：蛋白酶失活常数kd=57.410h-1。并验证该动力学模型具有很好的实际应用价值。采用离心超滤、离子交换层析、凝胶层析、RP-HPLC多步分离纯化带鱼抗氧化肽。得到抗氧化性最高的组分④-Ⅳ对DPPH自由基清除率为76.34%,比分离前提高了27%,表明分离纯化能明显提高带鱼抗氧化肽的抗氧化能力。
【作者】厉望；
【导师】靳挺；
【作者基本信息】浙江大学，制药工程，2013，硕士
【关键词】自由基；带鱼；抗氧化；动力学模型；分离纯化；

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