AKt-YAP信号通路在谷氨酰胺饥饿诱导Hela细胞凋亡过程中的作用研究

【摘要】目的：研究谷氨酰胺(glutamine,Gln)饥饿对细胞生长及活力的影响,探讨Akt-YAP(proteinkinaseB-Yes-associatedprotein)信号通路在Gln调节细胞凋亡过程中的作用机制。方法：以体外培养的Hela细胞作为实验对象。首先用不同浓度胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)和Gln(10%FBS+4mMGln、10%FBS+Gln-Free、FBS-Free+4mMGln、FBS-Free+Gln-Free)分别培养Hela细胞24h和48h,细胞计数法检测细胞的增殖情况；不同浓度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mM)培养Hela细胞24h,CCK-8检测细胞活性,Westernblot检测Bax蛋白的表达；不同浓度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mM)或Gln4mM、Gln0mM和Akt抑制剂LY29400240μM+Gln4mM分别培养Hela细胞24h,Westernblot检测pAkt和Bax蛋白的表达；不同浓度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mM)培养Hela细胞24h,Westernblot检测pYAP和YAP蛋白的表达；利用siRNA干扰Hela细胞YAP蛋白的表达,Gln4mM或0mM分别培养正常细胞或转染后的细胞24h,Westernblot检测Bax蛋白的表达；分别用Gln4mM、Gln0mM和Akt抑制剂LY29400240μM+Gln4mM培养细胞24h,Westernblot检测pYAP蛋白及胞浆和胞核YAP蛋白的表达。结果：不论是否添加FBS,不含Gln的培养基细胞生长速度缓慢,细胞数量显著降低(P<0.05)；低浓度Gln(0.5、0.1、0mM)组细胞活性明显下降(P<0.05),Bax表达增加；随着Gln浓度的降低pAkt表达降低,Gln饥饿和Akt抑制剂均增加了Bax蛋白的表达；随着Gln浓度的降低pYAP表达降低,利用siRNA干扰YAP蛋白的表达降低了Gln饥饿诱导的Bax蛋白的表达；Gln饥饿和Akt抑制剂均降低了pYAP蛋白的表达,增加了核内YAP蛋白的表达。结论：Gln饥饿抑制了Hela细胞的生长及细胞活性,诱导了Hela细胞凋亡；Akt-YAP信号通路参与了Gln饥饿诱导的Hela细胞的凋亡
【作者】齐梦迭；
【导师】王学敏；
【作者基本信息】苏州大学，麻醉学，2014，硕士
【关键词】谷氨酰胺；凋亡；蛋白激酶B；Yes相关蛋白；

【参考文献】
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