深黄被孢霉高产ARA差异基因的筛选及功能基因的定量研究

深黄被孢霉高产ARA差异基因的筛选及功能基因的定量研究

作者:师大云端图书馆 时间:2016-11-19 分类:硕士论文 喜欢:1442
师大云端图书馆

【摘要】花生四烯酸(ArachidonicAcid,ARA)是人体重要的不饱和脂肪酸,具有独特的生物活性和保健功能。有人将其列为生长因子,目前ARA通常和其他不饱和脂肪酸相互作用,制成用于预防和治疗皮炎、高血压、湿疹,脑血栓、冠心病、动脉硬化等心脑血管疾病的软胶囊。此外,ARA的代谢衍生物也具有很强的生物活性,因此ARA涉及婴幼儿、成人食品、药品、化妆品等多个领域,并有着巨大的应用价值和前景。ARA目前主要从动物组织中提取,但是因其含量非常的贫乏、资源有限,利用这些动物组织资源制备的ARA价格昂贵,不能满足人们的需求。霉菌发酵法生产ARA的技术弊端是存在不良菌气的味道,并且油脂中ARA占总脂肪酸的百分比较低。因此本研究从深黄被孢霉生物合成ARA的功能基因入手,筛选出与ARA高产性能相关的功能性基因,并对差异表达基因准确定量,从分子水平及代谢机理方面双向研究,进一步解决发酵法生产中的缺陷,取得结果如下:利用反向斑点杂交技术鉴定差异表达基因,剔除建立的cDNA文库中的假阳性克隆,获得真正的差异表达基因。随机抽取200个阳性克隆,经进一步鉴定,168条为真正阳性克隆并进行测序,选取同源性高于60%的基因进行序列分析,共获得50条表达序列标签(EST),经过同源性比对后得到48条明确基因名称和功能的已知ESTs,2条未知新的ESTs,经生物信息学分析后,48个已知ESTs的功能分别归类于蛋白转运、酶的生物活性、能量代谢、代谢途径、转录调控等几个方面。本研究将阳性转化子接入PDA培养基中,利用实时荧光定量PCR技术检测筛选出的差异表达功能基因的mRNA表达水平。根据聚类分析结果对影响脂肪酸合成的酶类的8个基因即基因细胞色素C、△5-脱饱和酶、COA必需辅酶、脂肪酸延长酶、脂肪酸去饱和酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、延长因子3、△6-脱饱和酶及一个未知基因ODEUG进行验证,表明该9个基因在高产菌株中表达量均显著增加。
【作者】姜楠;
【导师】于长青;
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学,食品科学,2014,硕士
【关键词】深黄被孢霉;花生四烯酸;斑点杂交;荧光定量PCR;差异基因;

【参考文献】
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