深黄被孢霉高产ARA菌株差异表达基因对ARA合成的影响研究

【摘要】花生四烯酸是一种人体必须的不饱和脂肪酸，具有广泛的生物活性和重要的营养作用。其传统的制备方法成本较高、提取率低，微生物发酵法生产花生四烯酸可降低成本、提高产量。通过抑制消减杂交技术构建不同花生四烯酸产量的深黄被孢霉消减cDNA文库，采用反向斑点杂交技术对该文库进行差异表达基因的筛选和鉴定，获得差异表达基因△5、△6-脱饱和酶及未知基因UG1，其中△5、△6-脱饱和酶是花生四烯酸合成途径上的关键酶，评价这些差异表达基因与花生四烯酸产量的关系，可进一步确立该基因在花生四烯酸生物合成中的作用。本研究的目的是构建RNA干扰载体抑制深黄被孢霉高产ARA菌株差异表达基因△5、△6-脱饱和酶及未知基因(UG1)的表达，探寻这些差异表达基因表达量与高产ARA性能之间的相互关系。方法：分别构建针对深黄被孢霉△5、△6-脱饱和酶及未知基因(UG1)的RNAi载体，通过PEG/CaCl2原生质体转化法将构建的载体转入到深黄被孢霉高产ARA的菌株进行RNA干扰，利用realtime-PCR方法分别检测深黄被孢霉△5、△6-脱饱和酶及未知基因(UG1)在转录水平的变化，气相色谱法检测花生四烯酸的产量。结果：本研究成功构建了△5、△6-脱饱和酶基因及UG1的RNAi载体，获得了RNAi载体转化的深黄被孢霉菌株；通过realtime-PCR检测结果表明成功的降低了目的基因的表达。结论：实验结果表明△5、△6-脱饱和酶基因mRNA表达量与深黄被孢霉产ARA的量呈一定的正相关关系，其中△5-脱饱和酶基因mRNA表达量对ARA的产量有更明显的影响；未知基因(UG1)mRNA表达量对ARA的产量没有明显的影响。
【作者】常园园；
【导师】于长青；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，食品科学，2014，硕士
【关键词】深黄被孢霉；花生四烯酸；△5-脱饱和酶；△6-脱饱和酶；未知基因（UG1）；RAN干扰；

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