亚临界R134a萃取技术在水产品性激素多残留分析中的应用研究

【摘要】性激素属于同化激素，由于它具有较强的蛋白质同化作用，在上世纪曾被广泛的应用于动物养殖过程中。然而，部分性激素化学性质稳定，不易分解，容易在动物组织中形成蓄积和残留，人类如果长期食用含有这些性激素的动物组织，容易导致机体代谢紊乱、发育异常甚至诱发癌变。因此，欧盟自上世纪80年代开始就通过立法来限制或者禁止在动物养殖业中使用性激素。我国农业部也颁布了一系列的公告，对相关性激素作了明确规定和要求。但由于利益的驱使，目前水产养殖中仍然存在滥用和非法添加违禁性激素类药物的现象。所以，不断加强对水产品中性激素类药物的检测和评价对保障水产食品的安全仍然具有重要意义。样品前处理技术是性激素残留分析的关键。简单、快速、高效是未来样品前处理技术的发展趋势。而我国目前仍主要采用传统的溶剂萃取，液液分配，柱层析净化，前处理方法自动化程度低、提取净化的效率不高，速度慢，且环境污染严重。因此，开发选择性好、灵敏度高、快速高效、绿色环保的样品前处理技术是食品安全检测的重要内容。本文利用亚临界R134a萃取技术作为新型、高效的样品前处理技术，分别通过与液相色谱（HPLC）和气相色谱质谱（GC-MS）的离线联用对水产品中的几种性激素残留进行了检测分析，并对萃取工艺、纯化方法和检测条件进行了优化，主要结果如下：1、建立了亚临界R134a萃取-HPLC离线联用技术检测水产品中甲基睾酮、丙酸睾酮、醋酸甲羟孕酮残留的分析方法。首先，利用亚临界R134a萃取目标物，然后，目标萃取物经过冷冻过滤去脂和C18固相萃取柱净化后，进行HPLC分析。通过单因素实验对萃取条件进行了优化，获得了最佳的萃取工艺条件：萃取温度25℃，萃取压力4MPa，夹带剂甲醇用量6mL。在最优的萃取、纯化及检测条件下，通过空白样品加标回收试验来验证方法的准确度和检出限。结果表明，在20~100μg/kg的添加水平下，各目标物的平均回收率在75.4%~94.2%之间；RSD为5.1%~11.2%。方法的检出限为8.4~12.5μg/kg。2、建立了亚临界R134a萃取-GC-MS离线联用技术检测水产品中6种性激素残留的分析方法。首先，利用亚临界R134a萃取目标物，然后，目标萃取物经过冷冻过滤去脂，C18和NH2固相萃取柱联用净化后，用七氟丁酸酐衍生后进行GC-MS分析。在单因素实验的基础上，以己烯雌酚的为代表，通过响应曲面法对萃取工艺进行了优化，获得了最佳的萃取工艺条件：萃取压力4MPa、萃取温度26℃、夹带剂用量4.7mL。在最优的萃取、纯化及检测条件下，通过空白样品加标回收试验来确定方法的准确度和检出限。结果表明，在1~10μg/kg的添加水平下，6种性激素的平均回收率在70.5%~103.6%之间，RSD为2.1%~12.1%，方法的检出限为0.2~1μg/kg。3、在市售实际样品中未检出本论文所考察的几种性激素，本论文选择用添加目标物的饲料来投喂锦鲤，从而制得含目标物的阳性样品，并用来检验上述研究建立起来的分析方法的适用性。该方法从阳性样品中成功检测出己烯雌酚残留，平均残留量为13.8μg/kg。本论文建立了一种水产品中性激素多残留分析的样品前处理的新方法。该方法简单、快速、高效、选择性好且灵敏度高，在多组分痕量物质的残留分析检测中有比较广泛的应用前景。
【作者】卢杰；
【导师】韩玉谦；
【作者基本信息】中国海洋大学，水产品加工及贮藏工程，2014，硕士
【关键词】亚临界R134a；水产品；性激素残留；高效液相色谱(HPLC)；气相色谱-质谱（GC-MS）；

【参考文献】
[1]谭文安,李欣,薛劲松.基于敏捷供需链管理的新一代ERP系统架构研究[J].计算机工程与应用,2003,15:63-67.
[2]刘雪梅.联盟组合：价值实现及治理机制研究[D].西南财经大学,企业管理,2013,博士.
[3]吴梅钗.马来西亚森美兰州基孔肯雅热关节炎证候和生存质量相关性研究[D].广州中医药大学,中医临床基础,2013,硕士.
[4]高金玉.克孜尔石窟的本生壁画研究[D].南京艺术学院,美术学,2004,硕士.
[5]郭小菡.口译中的听力之困及应对策略分析[D].吉林大学,翻译（专业学位）,2013,硕士.
[6]纪芳芳.学科建设视野下的少数民族舞蹈文化传承[D].中国艺术研究院,舞蹈学,2013,硕士.
[7]夏明兴.建国以来历史课程标准的变革与历史高考的发展研究[D].湖南师范大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[8]陈明禄.金属表面硅烷化处理工作液的水解工艺与稳定性研究[D].重庆大学,化学工程与技术,2014,硕士.
[9]陈浩宇.基于稳定角的轮式装载机倾翻失稳规律研究[D].厦门大学,机械工程,2014,硕士.
[10]何彬,邱志家,许昌金.微波基频晶体振荡器抗震性能的研究[J].电讯技术.1992(02)
[11]肖鹏.土地整治对自然环境影响评价研究[D].云南财经大学,土地资源管理,2013,硕士.
[12]任娟.新形势下加强鄂尔多斯市直机关党员管理问题研究[D].内蒙古大学,公共管理,2014,硕士.
[13]彭天乾,欧光亚,方彬.分布式过程控制系统的高速计算机通讯网络[J].冶金自动化,1991,06:40-45+61.
[14]张姣.论马克思实践概念的形成[D].郑州大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[15]游福成,杨炳儒.知识发现状态空间统一模型及其应用[J].计算机工程,2005,19:35-37.
[16]张洲.集体建设用地流转价格评估方法应用研究[D].首都经济贸易大学,区域经济学,2014,硕士.
[17]李戎.充液功能梯度材料圆柱壳的振动及稳定性研究[D].河南科技大学,工程力学,2013,硕士.
[18]尹佳.幼儿教师职业倦怠、教学效能感、离职倾向及其相互关系研究[D].华中师范大学,学前教育学,2014,硕士.
[19]胡杨.《环球时报》中英文版对美国形象的构建[D].内蒙古大学,新闻与传播,2014,硕士.
[20]杨浩.波在Pekeris声波导中的传播快速计算研究[D].杭州师范大学,应用数学,2013,硕士.
[21]陈维杰.我国上市公司经理人股票期权激励效应实证研究[D].山东财经大学,企业管理,2012,硕士.
[22]王礼信,周俊荣.关于MRASLandau设计方法的一个注记[J].自动化学报,1987,03:229-231.
[23]朱敏.“风干—浸泡”循环作用下损伤砂岩力学特性研究[D].三峡大学,岩土工程,2013,硕士.
[24]裴小庆.我国慈善组织监管法制研究[D].华东师范大学,宪法学与行政法学,2013,硕士.
[25]杨勇.鞍钢矿山公司汽车管理信息系统设计与实现[D].大连理工大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[26]胥正川.基于关系数据库的XML数据存储、更新和检索[D].复旦大学,2003.
[27]石生探.重庆烟田杂草群落结构与化学防除技术[D].西南大学,农药学,2013,硕士.
[28]励雪,钟健,高建荣,韩亮,李郁锦,叶青.高手性纯度盐酸雷莫司琼的合成[J].浙江化工,2014,06:13-16+24.
[29]刘郡.辛伐他汀通过抑制转β分泌酶HEK293细胞RhoA/ROCK途径减少Aβ_(42)的生成[D].山东大学,神经病学,2013,硕士.
[30]刘文宝.ZnO与氧化石墨烯的制备及其复合材料光催化性能研究[D].兰州大学,2013.
[31]孙轶南.《无尽的鲸之颂歌》第十二章、第十三章翻译报告[D].内蒙古大学,翻译,2014,硕士.
[32]刘志恒.借鉴意大利语元音发音的汉语韵母声乐训练和演唱研究[D].武汉音乐学院,音乐,2014,硕士.
[33]李苏娟.战国时期楚漆器纹饰在平面设计中的应用研究[D].武汉纺织大学,设计艺术学,2014,硕士.
[34]袁强.兔眶距增宽手术模型的建立及眶周软组织扩张对眶内移影响的研究[D].第四军医大学,外科学,2004,硕士.
[35]林璐.我国劳务派遣制度的相关法律问题研究[D].辽宁师范大学,科学社会主义理论与国际共产主义运动,2011,硕士.
[36]张媛媛.巨变前后埃及穆斯林兄弟会的政治发展[D].上海外国语大学,阿拉伯语语言文学,2013,硕士.
[37]李晓亮.微电网中基于分布式电源改善电能质量的研究[D].北京交通大学,2014.
[38]佘林林.基于现场总线的高炉配料控制系统设计[J].冶金自动化,2003,05:72.
[39]李建,谢小荣,韩英铎.同步相量测量的若干关键问题[J].电力系统自动化,2005,01:45-48+76.
[40]邵颖颖.中国对美直接投资困境中的美国国内政治因素分析[D].中共中央党校,外交学,2013,硕士.
[41]李凡.AAC网络音频流的包层质量评价方法[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[42]吴昕燕.宁夏限制开发区耕地综合价值与农户行为关系研究[D].宁夏大学,人文地理学,2014,硕士.
[43]程泓超.阶段分析理论下我国政府网络危机公关策略研究[D].河北大学,新闻学,2014,硕士.
[44]毛仙国.台州民营经济创新发展中地方政府作用研究[D].华东理工大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[45]王倩.新农村生态体育的开发与管理研究[D].曲阜师范大学,体育人文社会学,2013,硕士.
[46]袁林松.基于DSP28335的光伏并网逆变器设计[D].北京交通大学,2013.
[47]胡莹璐.辐射加热GaN-MOCVD反应室温度场仿真与设计[D].西安电子科技大学,材料物理与化学,2012,硕士.
[48]李克娟.静磁场作用下的微生物腐蚀行为研究[D].华中科技大学,应用化学,2013,硕士.
[49]王子明,安佩君,甄文胜,康有元,张立军,王璇.柴达木盆地北缘复杂地区地震采集、处理方法[J].石油地球物理勘探,2002,S1:118-124+221.
[50]高超.基于T-S模型的加热炉炉温建模与控制[D].东北大学,控制理论与控制工程,2010,硕士.