外阴阴道念珠菌菌种分型，药敏分析及耐药基因ERG11突变的研究

【摘要】外阴阴道假丝酵母菌病菌种分型及药敏研究目的:由念珠菌引起的临床感染菌株进行分离培养鉴定,研究长春外阴阴道念珠菌临床分离株的流行病学特点,监测其对常见抗真菌药物的耐药性，为临床合理用药提供依据。方法:将收集来的阴道分泌物用沙堡氏琼脂培养基培养,分离纯化菌株,挑取典型菌落,制成菌悬液后,用CHROMagar显色培养基进行菌株鉴定，同时挑取典型菌落按照美国国家临床试验标准化研究所(CLSI)推荐的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案第二版》(M27-A2)方案测定212株白色假丝酵母菌对氟康唑，伊曲康唑，两性霉素B及伏立康唑四种抗真菌药物的敏感性。结果:2013年2月-2013年10月共分离出302株假丝酵母菌,其中RVVC组92株,VVC组210株,其中，白假丝酵母菌212，占70.2%；光滑假丝酵母菌28株，占9.27%；热带假丝酵母菌22株，占7.28%；克柔假丝酵母菌14株，占4.64%；近平滑假丝酵母菌13株，占4.3%其他菌种为3株，占0.99%，混合9株，占2.98%。其中RVVC组92株中有53株为白色假丝酵母菌,占57.6%(53/92)，非白色假丝酵母菌42.4%;VVC组210株中有159株为白色假丝酵母菌,占75.7%(159/210),非白色假丝酵母菌24.3%。RVVC组非白色假丝酵母菌所占比例与VVC组差异有统计学意义(P<.005),RVVC组非白色假丝酵母菌比例高。212株白色假丝酵母菌中，氟康唑耐药株为18株，耐药率为8.49%；氟康唑剂量依赖敏感株12株，占5.66%，；敏感株182株，敏感率为85.84%。伊曲康唑耐药株为8株，耐药率为3.78%；伊曲康唑剂量依赖敏感株4株，占1.89%；敏感株200株，敏感率为94.34%。两性霉素B耐药株为5株，耐药率为2.36%；两性霉素B剂量依赖敏感株3株，占1.42%；敏感株204株，敏感率为96.23%。伏立康唑耐药株为9株，耐药率为4.24%；伏立康唑剂量依赖敏感株4株，占1.89%；敏感株199株，敏感率为93.87%。结论：1.白色念珠菌仍是VVC，RVVC的主要致病菌,RVVC组病人非白色假丝酵母菌比例高于VVC组,非白色假丝酵母菌中以光滑假丝酵母菌比例最高。2.假丝酵母菌对两性霉素B的敏感性最高,唑类药物中以伊曲康唑敏感性最高,氟康唑耐药性最高,RVVC组假丝酵母菌对氟康唑的敏感率明显低于VVC组。唑类耐药白假丝酵母菌ERG11基因突变分析目的:分析白念珠菌对唑类耐药临床分离株ERG11的基因突变，并探讨与耐药的关系。方法:采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)公布的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案6(M一27方案)测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑，两性霉素，伏立康唑的MIC,选择白假丝酵母菌耐药株(FLZ＞64ug/m1,ITZ＞lug/m1，两性霉素＞4，伏立康唑＞4)和敏感对照株(FLZMIC《8ug/ml,ITZMIC《0.125ug/m1，两性霉素MIC《1ug/ml,伏立康唑MIC《1ug/ml。纯培养扩增目的菌株,提取其基因组DNA，利用DNAPrimer软件辅助设计一对PCR引物，以提取的目的DNA为模板,扩增ERGll基因全序列,扩增后的PCR产物经纯化后测序,将测序结果与GenBank中己知标准序列(X13296)进行比较分析。结果:电泳图像显示,获得PCR产物大小与预期结果一致，测序结果表明,成功获得了白色念珠菌耐药株ERG11基因全序列，与GenBank中标准株(X13296)序列比较表明,耐药株都存在错义突变和无义；共有50个碱基突变位点,其中,有24个位点是无义突变，与以往报道相同的突变位点有12个,F72L，Dll6E，All4S，Y132H，E266D，V4371，G465S，K128T，Y257H，G448E，K342R和G464S,而其余14个位点D288G，G234V，T123I，N168S，K344E，R523G，A317T，I333T，T285A，K90R，N237D，R523G，S24I，E260G未见报道。结论:耐唑类抗真菌药物的白色念珠菌ERGll基因具有错义突变，某些突变可能与药物抗性相关联，其中14个新发现的突变位点在其耐药性中的意义尚不明确，需进一步研究。
【作者】黄丽华；
【导师】向梅；
【作者基本信息】吉林大学，妇产科学，2014，硕士
【关键词】复发性念珠菌阴道炎；假丝酵母菌；敏感性实验；白色假丝酵母菌；ERG11基因；唑类耐药性；突变；

【参考文献】
[1]宋志强.江苏省蔬菜根结线虫的分布调查、种类鉴定及定量检测技术研究[D].南京农业大学,植物病理学,2013,硕士.
[2]邝小磊,聂玉强.基于PLC的蒸汽凝结水全封闭自动回收控制系统[J].中国农机化.2003(04)
[3]刘海生.产品概念设计可拓进化方法研究[D].浙江工业大学,2003.
[4]王宏达.企业利益相关者效绩评价指标体系研究[D].沈阳工业大学,会计学,2003,硕士.
[5]刘鹏.基于分形理论的内斜行星齿轮表面形貌及其刚度模型研究[D].合肥工业大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[6]智佳军.新型低成本LED平板灯的研究[D].华侨大学,电子科学与技术,2013,硕士.
[7]张勇来.石墨烯/二氧化钛复合物的制备、修饰及其储锂性能研究[D].重庆大学,材料科学与工程,2014,硕士.
[8]麻常辉,薛禹胜,王小英,朱寰.基于静态和动态安全风险的输电规划(二)计及注入功率的不确定性[J].电力系统自动化,2006,14:10-13+61.
[9]宁辽逸,吴文传,张伯明.运行风险评估中的变压器时变停运模型(一)基于运行工况的变压器内部潜伏性故障的故障率估计方法[J].电力系统自动化,2010,15:9-13+95.
[10]贾惠.RXTe_3的合成与热电性能[D].杭州电子科技大学,物理电子学,2014,硕士.
[11]陶学文.试论高校课堂教学的病理性症状及其诊治对策[D].湖南师范大学,高等教育学,2004,硕士.
[12]牛丽霞.房地产上市公司股权结构与公司绩效的实证研究[D].石家庄经济学院,企业管理,2014,硕士.
[13]黄金凤,冼燕萍,郭新东,杜志峰,朱桃玉,罗海英.出口鳗鱼中溴氰菊酯残留量的气相色谱分析[J].现代食品科技.2008(07)
[14]张蓉蓉.对科技性文章在Google翻译工具上翻译结果的研究[D].四川外国语大学,法语语言文学,2013,硕士.
[15]谭平.快递企业ERP实施规划研究[D].云南财经大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[16]王铮.初中口语交际教学研究[D].渤海大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[17]业宁,董逸生,张爱珍.现代信息数据的挖掘与发展[J].南京林业大学学报(自然科学版),2003,03:79-83.
[18]邢可欣.面向任务的资源自适应WSN嵌入式操作系统设计与实现[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[19]王泽黎.细胞微囊化缓释LeftyA用于肺纤维化模型的治疗研究[D].哈尔滨工业大学,生物医学工程,2013,硕士.
[20]姚翔.伺服压力机控制软件柔性数据交互框架的研究[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[21]赵琛琛.对企业合并报表编报理论的探析[D].首都经济贸易大学,会计学,2013,硕士.
[22]吕柯.“农民工”市民化的意义和途径[D].中共中央党校,社会学,2004,硕士.
[23]鲁龙.甘蔗果酒发酵特性及工艺研究[D].西南大学,食品科学,2014,硕士.
[24]杜秋红.UFST公司V系列新产品营销策略研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[25]薛峰,王亮,谢夏寅,朱正风,孟屹华.变压器区内故障并联补偿电容器谐波电流对差动保护的影响[J].电力系统自动化,2015,08:159-163.
[26]苗立仁.大连电信电子商务系统的规划与设计[D].大连理工大学,计算机科学与技术,2003,硕士.
[27]陈敬敬.板材封边机仿形修边系统的研究与开发[D].广东工业大学,机械工程,2014,硕士.
[28]钱翔.闭环供应链中设施选址、生产批量和定价问题的研究[D].清华大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[29]张永芳.自组装石墨烯薄膜与纳米介孔铂/石墨烯薄膜过氧化氢传感器[D].郑州大学,2013.
[30]刘天野.矿用综合保护器在用测试技术研究[D].中北大学,2014.
[31]王晓丽.AC=BD在Backlund变换中的应用及偏微分方程解的完备性[D].大连理工大学,计算数学,2004,硕士.
[32]顾海萍,姚志远,张桃香,汪海珍,吴建军,徐建明.SherlockMIS系统鉴定土壤中大肠杆菌O157∶H7的研究[J].土壤学报,2014,01:200-205.
[33]肖盈莹.四元数相对运动模型建立及其在空间制导中的应用[D].哈尔滨工业大学,飞行器设计,2014,硕士.
[34]殷海燕.黑龙江北部浅成低温热液金矿岩浆岩及其与成矿关系[D].中国地质大学（北京）,地球化学,2014,硕士.
[35]范勇.基于分形理论和GIS的沱江曲流分形研究[D].西南大学,自然地理学,2013,硕士.
[36]程金磊.新型压电式人工中耳作动器的设计及实验[D].上海交通大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[37]张春丽.我国上市公司对外担保约束机制构建研究[D].山东财经大学,会计学,2012,硕士.
[38]曹诲.La-Fe-Si合金凝固过程中相关系和枝晶生长动力学研究[D].东北大学,材料学,2010,硕士.
[39]李孟刚.河南浚县农村文化建设存在的问题及对策研究[D].华中师范大学,农村与区域发展,2014,硕士.
[40]曹亦清,沈培德,陈健凡,任珠芳,姜卫星.大秦线C61运煤敞车改进问题的探讨[J].铁道机车车辆.1996(02)
[41]杨菲.基于数字传播视野下的初中生媒介素养教育课程研究[D].东北师范大学,教育技术学,2012,硕士.
[42]齐丽丽.新型材料薄窄板结构的动力学行为分析[D].湖南大学,固体力学,2013,硕士.
[43]郭晓慧.生物质热裂解装置中流态化规律与进料技术的研究[D].北京林业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[44]谢逢,罗立民,田雪芹,胡刚.基于知识的人脑三维医学图象自动分析显示系统[J].自动化学报,1997,04:66-71.
[45]袁月逃.以雷州半岛为轴的环北部湾区域开发中政府合作机制研究[D].广东海洋大学,行政管理,2013,硕士.
[46]高远.TNFR_1基因沉默对氧氟沙星和麻保沙星诱导的幼龄犬软骨细胞早期凋亡的影响[D].华中农业大学,临床兽医学,2014,硕士.
[47]黄赛楠.热加工处理转Bt水稻基因的降解及其检测研究[D].沈阳师范大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[48]郎敬彬,李士学,郎占清,黄春生.用定量静压技术改造德国DKZ四米立车[J].一重技术.2000(04)
[49]郭薇.纳米半导体材料对新型薄膜太阳能电池性能影响的研究[D].大连理工大学,2013.
[50]周于凯.基于CPM数据传输系统的实现[D].西安电子科技大学,电子与通信工程,2011,硕士.