Gadd45α对滋养细胞功能的调控及其在子痫前期发病中的作用机制研究

【摘要】目的：检测生长阻滞和DNA损伤45α（GrowtharrestandDNAdamage45alpha，Gadd45α）在正常早孕期绒毛组织、蜕膜组织的表达和定位；研究Gadd45α在调控人滋养细胞迁移和侵袭中的作用和可能的机制；采用缺氧复氧体外构建绒毛外滋养细胞的氧化应激损伤模型，探讨Gadd45α及其下游信号通路p38MAPK在滋养细胞功能损伤和子痫前期发病中的可能作用，进一步明确相关分子机制，为子痫前期的治疗提供新的靶点和理论依据。方法：（1）免疫组化法检测Gadd45α蛋白在人类早孕期绒毛和蜕膜组织中的表达和定位。(2)通过转染慢病毒颗粒，干扰绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo和早孕绒毛外植体的Gadd45α基因表达。(3)采用PCR和westernblotting检测干扰效率。(4)Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验检测干扰Gadd45α对HTR8/SVneo细胞迁移和侵袭能力的影响。(5)采用早孕绒毛外植体培养模型研究Gadd45α对绒毛外滋养细胞外生性迁移的影响。(6)明胶酶谱法检测外植体和细胞培养上清液中MMPs的活性，westernblotting检测MMPs的组织抑制因子TIMPs的蛋白表达水平。(7)体外通过缺氧复氧构建绒毛外滋养细胞氧化应激损伤模型，检测细胞内活性氧的含量、细胞凋亡率，及绒毛外滋养细胞体外迁移、侵袭及管腔成型的能力及细胞培养上清液中MMPs的活性和sFlt-1&sEng的分泌，并观察干扰Gadd45α基因及阻断其经典下游信号通路p38MAPK对缺氧/复氧所致的绒毛外滋养细胞生物学功能的影响，进一步明确Gadd45α调控滋养细胞功能在子痫前期发病中的作用及可能机制。结果：（1）正常早孕期绒毛组织和蜕膜组织中均有Gadd45α蛋白表达，在绒毛组织主要定位于滋养细胞柱和合体滋养细胞；在蜕膜组织的腺上皮细胞和EVT中高表达，蜕膜间质细胞低表达。Gadd45α的表达在早孕期各孕周间无统计学差异。（2）敲减Gadd45α可以促进绒毛外滋养细胞迁移和侵袭能力，而对细胞增殖和凋亡无明显影响。（3）Gadd45α抑制滋养细胞的迁移和侵袭可能是通过降低MMP2和MMP9的活性，增加TIMP1和2的表达来实现的。（4）缺氧/复氧处理可以导致绒毛外滋养细胞迁移、侵袭和管腔形成能力下降，同时HTR8/SVneo细胞中Gadd45α的表达上调、p38MAPK磷酸化增加，伴有上清液中MMPs活性的下降及sFlt-1&sEng的分泌增加，为研究Gadd45α参与子痫前期发病的机制研究提供了简便、可靠的体外模型。（5）转染慢病毒干扰Gadd45α的基因表达和p38MAPK特异性的抑制剂SB203580阻断p38信号通路均可以有效地促进缺氧/复氧损伤所致的绒毛外滋养细胞的体外迁移/侵袭和管腔成型能力，减少抗血管生成因子sFlt-1&sEng的分泌，这可能是通过调控MMP2和MMP9的活性、减少氧化应激来实现的。结论：(1)Gadd45α作为一个负性调节因子在滋养细胞侵袭和早期胎盘发育过程中发挥着重要的作用，这可能是通过直接或间接地调控基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的活性来实现的。(2)在绒毛外滋养细胞中存在着这样一条信号通路：氧化应激损伤—Gadd45α↑—p38MAPK磷酸化↑—滋养细胞功能损伤和sFlt-1&sEng的分泌↑，证实了Gadd45α通过p38MAPK信号通路参与子痫前期胎盘形成过程中的滋养细胞侵袭和血管重铸。(3)Gadd45α的RNAi和p38MAPK特异性抑制剂SB253580可促进H/R下滋养细胞的迁移、侵袭能力及血管生成能力，从而改善子痫前期胎盘浅着床和螺旋动脉重铸异常情况，为子痫前期的治疗提供了新的思路。
【作者】刘西茹；
【导师】漆洪波；
【作者基本信息】重庆医科大学，妇产科学，2014，博士
【关键词】Gadd45α；绒毛外滋养细胞；迁移/侵袭；p38MAPK；子痫前期；

【参考文献】
[1]张天俊.基于知识管理的特色专题数据库的建设[J].图书情报工作,2002,09:11-13+36.
[2]樊世杰,熊小龙,郑毅雄,黄凌娜,昂健.EBV相关恶性肿瘤的新病毒靶向性治疗研究进展[J].肿瘤,2014,02:180-186.
[3]佟柏楠.原发性炎症性脉络膜毛细血管病变的临床特征分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[4]姜英霞.中国城镇职工社会养老保险基金未来收支缺口的精算预测[D].山东财经大学,数量经济学,2013,硕士.
[5]齐立文.速滑滑行数据测量分析系统的设计与实现[D].哈尔滨工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[6]王菊红.我国调查性报道侵权问题研究[D].西南政法大学,新闻学,2012,硕士.
[7]窦聪.智能公交中基于RFSN的防碰撞算法与路由协议研究[D].兰州理工大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[8]邢志华.进化论在近代中国社会早期传播的文化背景研究[D].华东师范大学,科学哲学,2001,硕士.
[9]李冰.从“文化转向”看《鹿鼎记》英译本中武侠文化意象的传递[D].海南大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[10]周艳.中小学生手指自伤行为的现状与干预研究[D].宁波大学,教育管理（专业学位）,2014,硕士.
[11]王颖华.考生管理信息系统的设计与开发[D].重庆大学,2004.
[12]王冬冬.胜任力模型视角下的大学生“村官”培训方式研究[D].华中师范大学,行政管理,2012,硕士.
[13]陈胖胖.亲子关系确定的法律思考[D].宁波大学,民商法学,2013,硕士.
[14]赵宝辉.超支化聚合物合成、表征及其对聚氯乙烯改性研究[D].河北大学,高分子化学与物理,2003,硕士.
[15]张菊.浅析佛教美学对中国绘画的影响[D].云南师范大学,美术学,2013,硕士.
[16]李彩娟.基于第二代测序的大鳞副泥鳅微卫星分子标记的开发与应用[D].苏州大学,水生生物学,2014,硕士.
[17]本报记者何良海　通讯员李丽常.常州市武进区举办“科技创新推进月”活动[N].中国信息报,2012-07-11005.
[18]刘国海,戴先中.具有不确定负载的交流电机自适应后推控制方法[J].控制与决策,2001,06:947-949+953.
[19]韩雪.石家庄市大气颗粒物（PM_(10)/PM_(2.5)）对肺炎住院影响的病例交叉研究[D].河北医科大学,内科学,2014,硕士.
[20]关新平,彭海朋,范正平,李丽香.基于分散反馈控制的时滞混沌大系统[J].控制与决策,2001,04:404-409.
[21]董士延.抚顺市新北方污水处理厂扩建工程项目质量控制研究[D].吉林大学,项目管理,2013,硕士.
[22]刘晓丽.泸州老窖公司与山西汾酒公司财务对比分析研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[23]阮梦凡.司法证明中的概率理论研究[D].南京大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[24]杜鹃.城市化进程中绿色基础设施的弹性规划途经研究[D].西南大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[25]詹松.磨损磨粒的计算机识别分析系统研究[D].合肥工业大学,机械电子工程,2004,硕士.
[26]王邦军.中国软件企业管理创新研究[D].武汉理工大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[27]程云英.邢台机械轧辊有限公司口译实践报告[D].河北师范大学,翻译,2014,硕士.
[28]董溪坤.基于分流原理的高压直流断路器开断能力研究[D].新疆大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[29]莫鸿强.遗传算法搜索能力和编码方式研究[D].华南理工大学,2001.
[30]宋亚辉.城市电动汽车充电设施布局规划研究[D].北京交通大学,2011.
[31]高强.小麦矮化腥黑穗病菌（Tilletia controversa K(?)hn）的分子检测[D].湖南农业大学,植物病理学,2004,硕士.
[32]宋海燕.新型纳米复合材料修饰电极的构建及用于过氧化氢的电催化研究[D].南昌大学,2014.
[33]徐桂成.模糊神经网络控制算法在协调控制系统中的应用[D].华北电力大学（河北）,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[34]黄炳蓉.民用航空行政处罚自由裁量权行使研究[D].南京航空航天大学,宪法学与行政法学,2013,硕士.
[35]和柳,庄孔韶.农民合作社的组织文化研究[J].思想战线,2015,01:9-13.
[36]陈勃红,郝培锋,张薇.配电网自动化—变结构耗散网络新算法[J].控制与决策,2003,01:116-119.
[37]陈勇.基于多元统计分析的生产过程故障诊断研究[D].浙江大学,2003.
[38]张颖.河北省城乡基本公共服务均等化研究[D].河北经贸大学,财政学,2012,硕士.
[39]李蒙.我国信访制度的演变及创新[D].中国地质大学（北京）,公共管理,2013,硕士.
[40]隋瑶.汉语与韩国语新词对比研究[D].东北师范大学,语言学及应用语言学,2012,硕士.
[41]范春楠.吉林省森林植被碳估算及其分布特征[D].东北林业大学,生态学,2014,博士.
[42]张学武.卢氏绿壳蛋鸡蛋壳腺中胆绿素时空变化及鸡蛋品质的变化[D].河南农业大学,基础兽医学,2012,硕士.
[43]韩笑.海南酒店从业人员跨文化交际能力调查[D].海南大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[44]刘聪.G&D会展公司绩效考核改进研究[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[45]张俊玲.工程投资项目风险分析及评价研究[D].河北工业大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[46]王政国,张明珠,孙丽杰.ICP—AES氢化法连续测定核电等产品材料中砷锡锑[J].一重技术.2001(Z1)
[47]段宇宙.中国A股市场β系数配对交易策略研究[D].哈尔滨工业大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[48]黄丽宁.广西服务型海事建设研究[D].大连海事大学,公共管理,2012,硕士.
[49]曹孝振.歌舞厅室内设计的几个问题[J].室内设计与装修.1995(02)
[50]丁然.胃癌原发灶和淋巴结转移灶HER2表达的临床意义[D].福建医科大学,病理学与病理生理学,2014,硕士.