拟南芥AtMAP4Kα2与AtMO25的克隆、表达、纯化及初步晶体学研究

【摘要】拟南芥AtMAP4Ks属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。AtMAP4K家族有10个成员,即：AtMAP4K1-10。它们的N末端是保守的激酶结构域,C端是二聚化结构域。它们包含一个共同的序列基序：TFVGTPxWMAPEV。拟南芥AtMAP4Ka2在哺乳动物中的同源蛋白是MST4。AtMAP4Ka2与MST4的序列同源性高达63%。MST4是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族中GCKⅢ亚家族成员之一,而GCKⅢ家族在拟南芥中的同源蛋白只有一个成员,即AtMAP4Ka2,因此,AtMAP4Ka2也称AtGCKⅢ。GCKⅢ激酶广泛参与细胞的生长、凋亡、细胞极化等重要生理活动。拟南芥AtMO25在哺乳动物的同源蛋白是M025。它们的序列同源性高达44%。拟南芥AtMO25的名字由此而来。哺乳动物中的M025是一个脚手架蛋白,作为GCKⅢ亚家族蛋白的接头蛋白促进其激酶活性。前人通过结构生物学的方法,解析了哺乳动物MST4与M025复合体的三维结晶结构,揭示了M025激活MST4的分子机制,即：M025通过介导MST4形成二聚体,从而MST4发生交互自磷酸化而被激活。本研究结果如下：1、TEV酶的纯化。AtMAP4Ka2、AtMO25与标签连接处含有TEV酶切位点,因此,TEV酶可用于AtMAP4Ka2、AtMO25标签的去除。2、AtMAP4Ka2的克隆、表达、纯化及初步晶体学研究。首先构建了AtMAP4Ka2的3个克隆片段,包括AtMAP4Ka2全长(1-690aa)、AtMAP4Ka2激酶结构域(1-290aa)和AtMAP4Ka2激酶结构域及WEF基序(1-338aa)。着重纯化并结晶了AtMAP4Ka2激酶结构域。最终获得AtMAP4Ka2激酶结构域的晶体衍射数据。AtMAP4Ka2激酶结构域的衍射分辨率为1.9A,属于空间群C2221,晶胞参数为a=55.27,b=82.93,c=133.15A。3、AtMO25的克隆、表达、纯化及初步晶体学研究。首先克隆了AtMO25全长；然后在16℃、0.4mMIPTG下诱导表达,并通过镍离子亲和层析、分子排阻层析,纯化了AtMO25全长。最后,对AtMO25全长进行了晶体的初筛。
【作者】申立强；
【导师】周志钦；
【作者基本信息】西南大学，植物学，2014，硕士
【关键词】拟南芥；AtMAP4Kα2；AtMO25；晶体学；

【参考文献】
[1]黄乐.急性白血病并发败血症的临床分析[D].遵义医学院,血液内科（专业学位）,2014,硕士.
[2]叶秀丽.论我国社区矫正制度及其完善[D].浙江海洋学院,农业推广（专业学位）,2013,硕士.
[3]樊长虹,陈卫东,席裕庚.未知环境下移动机器人安全路径规划的一种神经网络方法[J].自动化学报,2004,06:816-823.
[4]丛柏.建设监理对工程项目质量保证绩效的研究[D].大连理工大学,工商管理,2003,硕士.
[5]吴景梅.项目管理在大庆新华08项目规划及应用[D].东北石油大学,项目管理（专业学位）,2013,硕士.
[6]王晓慧.基于DMSP/OLS夜间灯光数据的中国近30年城镇扩展研究[D].南京大学,摄影测量与遥感,2013,硕士.
[7]梁美.企业知识型员工绩效管理研究[D].广西科技大学,企业管理,2013,硕士.
[8]夏恺.活血解毒方对晚期卵巢癌患者疗效及生活质量影响的研究[D].北京中医药大学,中医学,2014,硕士.
[9]郝晓鹏.民国时期上海总商会商品陈列所研究[D].华中师范大学,中国近代史,2013,硕士.
[10]黄剑,关治洪,王仲东.不确定网络控制系统具有H_∞性能界的鲁棒控制[J].控制与决策,2005,09:1002-1005+1011.
[11]张坤,王高煊,王晓俊,张莎莎,薛冬桦*.玉米秸秆木质素的提取及表征[J].食品科学.
[12]李霞.当归补血汤表征参数的建立[D].成都中医药大学,药剂学,2012,硕士.
[13]夏刚.开磷集团资源合理利用与可持续发展研究[D].中南大学,矿业工程,2004,硕士.
[14]任璇.个人性格与美国强势总统关系之探析[D].辽宁大学,世界史,2012,硕士.
[15]马放,张金凤,远立江,王微,王琴,王爱杰.复合型生物絮凝剂成分分析及其絮凝机理的研究[J].环境科学学报,2005,11:63-68.
[16]徐丹.德国大学理念发展研究：1810-1933[D].南京师范大学,教育史,2012,硕士.
[17]束洪春,田鑫萃,张广斌,刘可真,孙士云.±800kV直流输电线路故障定位的单端电压自然频率方法[J].中国电机工程学报,2011,25:104-111.
[18]崔健崑.益肾通络汤对慢性肾炎高血压的影响[D].黑龙江中医药大学,中医内科学,2004,硕士.
[19]吕金泽.中国绿色电子政府发展愿景与策略研究[D].吉林大学,行政管理,2013,硕士.
[20]张琳.魔芋低聚糖的制备及其性质研究[D].吉林大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[21]汪红萍.数据仓库技术在企业信息系统中的实现[J].江苏航空,2002,02:27-29.
[22]王空军,董树亭,胡昌浩,刘开昌,孙庆泉.我国1950s～1990s推广的玉米品种叶片光合特性演进规律研究[J].植物生态学报,2001,02:247-251.
[23]张峰振,吴超飞,胡芸,韦朝海.卤代有机污染物的光化学降解[J].化学进展,2014,06:1079-1098.
[24]陈佳.北京市网球消费者及其消费行为分析[D].北京体育大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[25]金磊.新世纪减灾的途径[J].上海市建设职工大学学报.2000(01)
[26]刘志周.木网壳半刚性节点连接受力性能研究[D].哈尔滨工业大学,结构工程,2013,硕士.
[27]邹伟.SPM对初生及哺乳期仔猪胃肠道功能早期发育影响的研究[D].江西农业大学,动物营养与饲料科学,2012,硕士.
[28]刘敏.侗族节奏型舞蹈研究[D].中国艺术研究院,舞蹈学,2013,硕士.
[29]龚炳铮.国际自控联(IFAC)第十一届世界大会[J].自动化学报,1991,01:121.
[30]马帅.HMGB1对骨髓间充质干细胞增殖及旁分泌效应的体外实验研究[D].遵义医学院,内科学,2013,硕士.
[31]熊强.猪徒手克隆技术的优化及Tet1在早期胚胎发育中的变化[D].南京农业大学,动物遗传育种与繁殖,2013,硕士.
[32]袁金花.南京市幼儿体育教学的开展现状调查与分析[D].南京体育学院,体育教学（专业学位）,2013,硕士.
[33]张玉国.我国高校竞技体育赛事资源优化配置研究[D].东北师范大学,体育教育训练学,2014,博士.
[34]沈伊辰.人工湿地不同工艺污染物去除特性及聚磷菌分布规律研究[D].西安建筑科技大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[35]李凤林,王承曙.反褶积滤波与数学规划[J].石油地球物理勘探,1988,06:643-649+698.
[36]王辉.论我国民间借贷机构的市场准入制度[D].安徽大学,法律,2012,硕士.
[37]贾佳丽.基于消费者视角的猪肉加工企业社会责任的实证研究[D].南京农业大学,产业经济学,2012,硕士.
[38]宋珊,陈建业.基于晶闸管的STATCOM原理和实现[J].电力系统自动化,2006,18:49-54.
[39]刘建胜.文档图象版面理解的研究[D].重庆大学,2002.
[40]程健,李先瑞.板式换热器及板式换热装置的应用原理及方法[J].中国建设信息(供热制冷专刊).2005(03)
[41]郭锡伟.甜菜M14品系pBI/Pbm/BvM14-MADSbox载体的构建及BvM14-CMO、BvM14-BADH盐胁迫应答分析[D].黑龙江大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[42]张龙家.基于模型的目标立体构建方法研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2014,硕士.
[43]张金淼,陈宝书,汪小将,刘军荣,杨小椿,杨锴.等旅行时面共反射面元叠加的应用研究[J].石油地球物理勘探,2011,06:881-889+1012+831.
[44]马彪.康德批判哲学体系中的上帝[D].华东师范大学,外国哲学,2014,博士.
[45]刘铭.我国公务员考录的公平性研究[D].南京师范大学,行政管理,2012,硕士.
[46]李菲.农药标准物质的纯化与研制[D].北京化工大学,化学,2013,硕士.
[47]岳诗雨,周玉娟,姚勇,薛敏.柱芳烃化学:从合成、主客体性质到自组装性能的研究进展[J].化学学报,2014,10:1053-1069.
[48]李帆.寻找教育独特的灵魂——写在2011年岁末的思考[J].人民教育,2012,01:15-19.
[49]任鹏刚,狄莹莹.石墨烯/多壁碳纳米管混合填充超高分子量聚乙烯导电复合材料的研究[A].中国化学会高分子学科委员会.2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C].中国化学会高分子学科委员会:,2011:1.
[50]王业震.牡荆油乳治疗慢性支气管炎的疗效观察[D].湖北中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.