线粒体D-环单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤的患病风险及预后关系的研究

【摘要】目的：多种肿瘤细胞中线粒体D-环已成为多态性研究热点，但与恶性淋巴瘤的相关研究却很少。本实验通过研究线粒体D-环（D-loop区）单核苷酸多态性（SNPs），探究其与非霍奇金淋巴瘤的患病风险及预后的相关性。方法：1收集2001年1月和2004年1月之间在河北医科大学省四院血液内科接受治疗的河北省内133名汉族NHL患者血液样本，同时也收集了河北省内159名汉族健康人的血液样本作为对照。所有病人临床资料相对完善。2应用GENMED全血线粒体DNA萃取试剂盒提取非霍奇金淋巴瘤患者及健康人的线粒体DNA，提取后将其置于-80℃恒温冰箱中保存备用。3PCR扩增线粒体D-loop区目的基因，上游引物为5’-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3’（核苷酸16190–16209位点），下游引物为5’-GCTTTGAGGAGGTAAGCTAC-3’（核苷酸602–583位点），扩增的目的片段长度为982-bp，PCR的具体参数参照PCR预混试剂盒说明，将PCR产物纯化测序，测序使用美国ABIPRISMGeneticAnalyzer3100序列分析仪，同一标本采用双向重复测序，随后检测血标本线粒体DNAD-loop区单核苷酸多态性。4通过电话对患者进行随访，计算其10年生存率，同时分析与患者临床特征的关系。参照基因数据库AC000021号数据，从已经完成的NHL患者线粒体D-Loop区的982bp序列中找出单核苷酸多态性位点，对不同SNPs位点与患者10年生存率的关系进行分析。5统计分析：应用χ2检验对SNP位点显示频率进行分析；采用KaPlan-Meier法绘制出生存曲线，应用Log-Rank检验进行组间比较；使用COX比例风险回归模型分析进行多因素生存分析，并以相对危险度和95%可信区间（95%CI）来表示。所有数据结果应用SPSS18.0统计软件进行分析，P＜0.05，认为差别具有统计学意义。结果：1在随访的133例患者中（54例弥漫型大B细胞淋巴瘤、41例T细胞淋巴瘤、38个其他类型的非霍奇金淋巴瘤），共计91位非霍奇金淋巴瘤患者具有10年随访数据，其中32个诊断为DLBCL，33个TCL和26个其他类型的非霍奇金淋巴瘤。2在NHL组和对照组的长为982bp线粒体D环区中共发现140个单核苷酸多态性位点，其中有26个SNPs，其等位基因频率>5%，可用来分析罹患肿瘤风险。3应用χ2检验在对单个SNPs进行分析时，在NHL患者中发现73A/G，263A/G和315C/Cinsert这三个多态性位点P值均<0.05，差别有统计学意义。200A/G多态位点在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的P值<0.05，差别有统计学意义。16362C/T和249Del/AP值均<0.05，差别有统计学意义。4对不同的性别及年龄（以60岁为界）NHL患者的10年生存率进行比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；对不同的疾病分期及IPI评分NHL患者的10年生存率进行比较，差异有统计学意义（P<0.05）。5根据所找出的26个SNPs位点，绘制生存曲线，通过Log-Rank检验，发现146C/T、309Cinsert/C、315Cinsert/C、199C/T、16304C/T多肽位点与NHL的生存期有关。通过COX比例风险回归模型分析这些核苷酸位点及临床特征与NHL患者10年生存率的关系，结果发现16304C/T位点是NHL患者的预后独立预测因子，基型为16304C的非霍奇金淋巴瘤患者的生存长度明显短于基因型为16304T的患者（OR0.513；95%CI0.266-0.989；P=0.046）。结论：1线粒体DNAD-loop区是一个高度多态性区域。273A/G、263A/G、315C/Cinsert多态位点与非霍奇金淋巴瘤的患病风险相关，携带73G、263G、315Cinsert等位基因可增加患非霍奇金淋巴瘤的风险。3200A/G多肽位点特别与弥漫大B细胞淋巴瘤风险相关，携带200G等位基因可增加患弥漫大B细胞淋巴瘤的风险。416362C/T和249Del/A多态位点与T细胞淋巴瘤的患病风险相关，携带16362T和249A等位基因可增加患T细胞淋巴瘤的风险。5146C/T、309Cinsert/C、315Cinsert/C、199C/T、16304C/T多肽位点及疾病分期、IPI评分与NHL患者10年生存率相关。16304位点可作为NHL患者预后独立的预测因子。
【作者】宋姣杰；
【导师】刁兰萍；
【作者基本信息】河北医科大学，内科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】非霍奇金淋巴瘤；D-环；单核苷酸多态性；线粒体DNA；预后；

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