EMT过程中microRNAs与靶基因CDH1相互作用实验研究

【摘要】癌症患者死亡的最主要原因是由于肿瘤细胞的转移并引起并发症。肿瘤细胞转移涉及细胞由上皮细胞转变成间质细胞过程(epithelial-mesenchymaltransition,EMT),CDH1:基因编码的E-钙粘蛋白在EMT中起关键的作用,且在上皮细胞中高表达。E-钙粘蛋白的下调或者缺失会降低细胞粘附的强度,导致细胞活动性的增加,从而导致癌细胞穿过基底膜入侵周围的组织。对肿瘤细胞中microRNAs(miRNAs)与靶基因CDH1相互作用研究,有助于人们了解相关疾病的发生过程,可以为临床医学提供一些治疗方向和途径。本文主要针对肿瘤HeLa细胞中EMT过程,开展了靶基因CDH1与miRNAs之间的相互作用机制研究,主要有以下三方面的工作和成果：(1)利用预测软件Targetscan,miRanda和PicTar,本文筛选出有可能调控靶基因CDH1的miRNAs。从中确定mir-23b,mir-92a,mir-340三个miRNAs作为具体的研究对象,同时作为本实验的对照,选取了有实验文献报道的mir-9作为参考。(2)利用分子生物实验的方法,首先,构建出mir-9,mir-23b,mir-92a和CDH1质粒,并转染到HeLa细胞(人类的肿瘤细胞)和293T细胞(人类正常上皮细胞)。其次,通过双荧光素酶检测实验,从RNA分子相互作用水平上,定量地测量了所选miRNAs对靶基因CDH1的作用；通过细胞划痕实验,从细胞水平上,研究了miRNAs对肿瘤细胞转移能力的影响。本文的实验数据表明：mir-23b,mir-92a的确能抑制CDH1基因的表达,从而增加了癌细胞的迁移能力。(3)通过与已有的miRNAs-与CDH1调控机制研究的比较,结合本文的实验结果,在肿瘤细胞EMT过程中,我们提出关于mir-23b,mir-92a调控肿瘤细胞迁移能力的一种可能的生物信号通路。
【作者】李明娟；
【导师】贾亚；
【作者基本信息】华中师范大学，理论物理，2014，硕士
【关键词】EMT；microRNA；CDH1；下调；转移；侵袭；HeLa；293T；

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