莱菔硫烷的制备及其抗癌活性的研究

【摘要】莱菔硫烷是目前公认的防癌和抗癌效果最好的天然产物之一,是自然界存在的诱导Ⅱ型解毒酶能力最强的诱导物。随着研究的深入,人们发现莱菔硫烷不仅可以提高机体抗氧化的能力,而且还可以抑制并杀死癌细胞。考虑到莱菔硫烷在今后的癌症预防和治疗中必将发挥的积极作用,科研工作者们已经将其视为研究的热点。本文对国内十字花科植物中莱菔硫烷的含量进行了分析,研究不同水解条件对莱菔硫烷生成的影响,采用正相和反相制备液相色谱分离纯化莱菔硫烷,研究了莱菔硫烷对人肺腺癌细胞A2的体内外的抑制作用,以及不同条件对莱菔硫烷水溶液稳定性的影响。建立高效液相色谱(HPLC)的分析方法对国内十字花科植物中莱菔硫烷的含量进行了分析。该分析方法可以达到很好的分离效果,测定方法简便、快捷。结果表明,莱菔硫烷在植物中的含量变化很大,不同种属、不同品种以及同一植株的不同生长阶段、同一植株的不同部位含量都存在较大差异。通过研究发现,随着水解温度的提高,莱菔硫烷的生成受到抑制；莱菔硫烷生成的最适pH值为7.2,酸性、碱性条件均抑制莱菔硫烷的产生；EDTA对莱菔硫烷的生成几乎没有影响；Zn2+可以促进莱菔硫烷的产生从而提高其产量,随着Zn2+浓度的增加,莱菔硫烷含量有所提高,Zn2+很可能是硫代葡萄糖苷酶的辅基或辅因子,Zn2+的存在能在很大程度上提高硫代葡萄糖苷酶的活性；Cu2+,Fe2+,Fe3+,Ca2+,Mg2+金属离子抑制莱菔硫烷的形成；抗坏血酸的添加有利于促进莱菔硫烷的生成。采用固相萃取和反相制备型高效液相色谱分离纯化莱菔硫烷。与传统的液液萃取技术相比较,固相萃取技术可以获得较高的样品的含量和回收率,有机溶剂的消耗量也显著降低。在反相分析型高效液相色谱上对制备色谱条件进行初步的探索,选择流动相为30%的甲醇水溶液,柱温为常温(不高于30℃),pH值为中性的。在反相制备型高效液相色谱上优化参数,确定最佳流动相配比为27.5%的甲醇-水溶液,流速为12ml/min。当上样量为20mg时,莱菔硫烷的纯度最高可达99%,莱菔硫烷的纯度随着上样量的增加而下降。采用正相低压色谱技术分离纯化莱菔硫烷。用硅胶薄层层析法选择正相硅胶低压色谱的流动相,当选用正已烷-乙醇为5：5(V：V)的混合溶剂时,粗提物中的莱菔硫烷与其它杂质分离效果良好。分别采用等度洗脱和梯度洗脱优化正相硅胶低压色谱的分离参数。最终确定采用梯度洗脱模式分离纯化莱菔硫烷时,进样量控制在不高于0.5g莱菔硫烷的粗提物/60g硅胶,并且最优的流速应控制在10ml/min时,可获得更高的产品纯度。研究莱菔硫烷对人肺腺癌细胞A2的体内外抑制作用。莱菔硫烷对A2细胞处理24h的半数抑制浓度(IC50)为6.25μmol。延长处理时间或提高莱菔硫烷浓度可进一步增强莱菔硫烷的抑制作用。莱菔硫烷可引起明显的S期阻滞和A2癌细胞凋亡。腹腔注射莱菔硫烷50-75mg/kg体重,能减少A2细胞裸小鼠皮下异种移植瘤瘤重约50%。因此,莱菔硫烷在治疗肿瘤上可能有一定价值。莱菔硫烷的水溶液在高温下稳定性差,其在pH3.0环境中最为稳定,但不适宜在碱性环境中存放或使用。莱菔硫烷的水溶液对荧光光源的稳定性好。
【作者】梁浩；
【导师】袁其朋；
【作者基本信息】北京化工大学，生物化工，2007，博士
【关键词】莱菔硫烷；十字花科植物；水解条件；制备色谱；抗癌活性；稳定性；

【参考文献】
[1]张锦丽.基于图谱库的平面4和6自由度可分离运动链自动结构综合[D].燕山大学,控制工程,2014,硕士.
[2]张馨尹.大学生自我疏离感与网络成瘾、自尊、社会支持的关系研究[D].西南大学,应用心理学,2014,硕士.
[3]邱全明.启迪物流有限公司战略管理研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[4]靳亚忠.无土栽培菜心中的硝酸盐的调控及其机制的研究[D].广西大学,植物营养学,2004,硕士.
[5]张书瑜.辽宁省农村初中生物学科学探究活动实施现状的调查研究[D].沈阳师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[6]张佳.现代汉语时量词研究[D].辽宁大学,汉语言文字学,2012,硕士.
[7]付善春.地裂缝场地带筏板基础的框—剪结构的内力分析[D].长安大学,结构工程,2014,硕士.
[8]李博.Pt簇—石墨烯复合体的界面相互作用及电子结构[D].黑龙江大学,2014.
[9]张栓玲.食肉目动物鲜味受体基因（Taslrl）的分子进化研究[D].四川农业大学,动物遗传资源保护学,2012,硕士.
[10]李强.基于C/S模式的图书管理系统的开发[D].天津大学,软件工程,2013,硕士.
[11]熊海军,朱永利,张凡,王德文,时磊.基于行为树的IEC61850智能电子设备互操作性描述与验证[J].电力系统自动化,2013,24:66-71.
[12]王利政.企业核心竞争力结构模型及评价体系的研究[D].吉林大学,企业管理,2004,硕士.
[13]李晓亮.烟草热解产物中挥发性有机物与自由基成分形成机理研究[D].北京化工大学,化学,2013,硕士.
[14]翟学丽.高校毕业生公共就业服务体系完善研究[D].华中师范大学,公共管理,2013,硕士.
[15]王静.基于粒子采样的隐式曲面多边形化[D].济南大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[16]陈慧.基于J2EE的项目管理系统的研究与实现[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[17]李惠平.儿科医患会话研究[D].吉林大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[18]于月琴.浙江省战略性新兴产业综合发展评价和发展驱动因素分析[D].浙江工商大学,统计学,2013,硕士.
[19]宋舜波.智能低压无功补偿系统的设计[D].杭州电子科技大学,电路与系统,2013,硕士.
[20]梁爽.尿液miRNAs及蛋白质标志物在IgA肾病病情评估中的作用[D].中国人民解放军医学院,内科学,2013,硕士.
[21]武继雷.谢桥矿深井大断面沿空留巷顶板变形规律研究[D].安徽建筑大学,结构工程,2013,硕士.
[22]周昌松.基于管理信息系统的牵引变压器状态检修策略研究[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[23]岳廷明,王金海,王慧泉.融合加速度信息的动态心电EMD滤波算法[J].计算机工程与应用.
[24]程烨.PPARγ激动剂调控肾小管上皮细胞极性建立和迁移的机制研究[D].第二军医大学,内科学肾病（专业学位）,2013,硕士.
[25]方云飞,王宏琳.电子计算机数据处理入门[J].石油地球物理勘探,1980,S1:95-101.
[26]张曦.牡丹Ty1-copia类反转录转座子LTR序列的分离及其种质资源评价[D].河南科技大学,植物学,2013,硕士.
[27]杨德顺.遮挡情况下人脸跟踪算法的研究[D].湖南大学,计算机科学与技术,2011,硕士.
[28]郑桂彬.塞来昔布协同TRAIL在甲状腺髓样癌TT细胞中的凋亡诱导作用及相关机制[D].吉林大学,外科学,2014,硕士.
[29]韩雪青.济南公交移动电视传播内容的合理性研究[D].山东艺术学院,广播电视艺术学,2014,硕士.
[30]褚园园.紧急避险合法化根据研究[D].西南政法大学,刑法学（专业学位）,2012,硕士.
[31]王文艳.学术会话中言语反馈语的使用情况对比分析—一项基于语料库的研究[D].中国矿业大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[32]李伟.满足国Ⅳ/Ⅴ排放的SCR催化剂和尿素控制的研究[D].上海工程技术大学,车辆工程,2013,硕士.
[33]周志敏.制氧生产的自动变负荷控制[J].冶金自动化,1999,05:25-27+31.
[34]王树龙.抗肾小球基底膜病临床特点分析[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[35]席俊杰,吴中.基于高硅成分的锰对奥贝球铁性能的影响[J].冶金自动化,2003,06:68.
[36]俞志敏.基于L_q惩罚经验似然的变量选择[D].湖南师范大学,概率论与数理统计,2013,硕士.
[37]刘洋洋.面向注塑企业的车间生产调度技术研究[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[38]黄丕.我国政府雇员的养老保障研究[D].广西民族大学,社会保障,2013,硕士.
[39]孙燕.β-榄香烯逆转吉非替尼耐药的作用及机制研究[D].浙江中医药大学,肿瘤学,2014,硕士.
[40]赵强.盾构隧道开挖对群桩基础影响的数值模拟研究[D].大连理工大学,建筑与土木工程（专业学位）,2013,硕士.
[41]梁志闯.交通随机荷载作用下西安城墙结构动力响应分析[D].西安建筑科技大学,结构工程,2013,硕士.
[42]李万超.劳动争议举证责任案例研究[D].黑龙江大学,法律,2012,硕士.
[43]李晓东.长大结构最不利地震动特性与地震反应分析[D].哈尔滨工业大学,岩土工程,2013,硕士.
[44]李昭团.印度尼西亚公立高等学校法人化改革研究（1999年至2012年）[D].南京师范大学,高等教育学,2014,博士.
[45]朱洪生.转Bt基因棉对棉田主要害虫及其天敌种群消长的影响[D].湖南农业大学,作物栽培与耕作,2003,硕士.
[46]记者耿倩.高功率、高集成系统将远离散热困扰[N].科学导报,2014-08-22A01.
[47]徐飞民.面向精益供应链的L公司生产及物流体系构建[D].河北工业大学,工商管理,2013,硕士.
[48]刘慧.不同剂量小檗碱对酒精性心肌损伤大鼠的保护作用研究[D].湖南师范大学,内科学,2014,硕士.
[49]陈红梅.基于NURBS高阶面元法的SWATH兴波阻力计算[D].武汉理工大学,船舶与海洋结构物设计制造,2004,硕士.
[50]鹿院卫,杜文彬,吴玉庭,李小丽,马重芳.熔融盐单罐显热储热基本原理及自然对流传热规律[J].储能科学与技术.