一定浓度血清通过提高自噬促进人OA软骨细胞存活

【摘要】目的：欧凯疗法(Orthokine)是一种通过自体条件血清关节腔内注射治疗骨性关节炎(OA)的新型治疗方法。本文旨在明确不同浓度血清对人OA软骨细胞自噬作用的影响以及其对人OA软骨细胞的保护作用,并探讨一定浓度血清促进人OA软骨细胞存活的相关机制,为欧凯疗法提供一定的理论依据。方法：1、在OA患者全膝关节置换术的术中取关节软骨,分离培养人OA软骨细胞,并以甲苯胺蓝及免疫组化法进行细胞鉴定。2、WesternBlotting法检测0%、1%、5%、10%、20%五种浓度血清培养的人OA软骨细胞细胞外基质相关蛋白(Aggrecan、Ⅱ型胶原、TIMP、MMP13)的表达。3、WesternBlotting法检测上述浓度血清培养的人OA软骨细胞自噬相关分子(LC3B、Beclinl)的表达水平及能量通路(AMPK通路)的激活水平,MDC染色鉴定自噬溶酶体表达量。4、WesternBlotting检测上述浓度血清培养的人OA软骨细胞增殖相关蛋白(pS6、PCNA)及抗凋亡蛋白(Bcl2)的表达水平,CCK8法鉴定上述浓度血清培养的人OA软骨细胞的存活率。5、WesternBlotting法检测上述浓度血清培养的人OA软骨细胞mTOR通路及AKT通路的激活情况,雷帕霉素和LY294002分别抑制人OA软骨细胞的mTOR和AKT通路后,施以或不施以5%浓度血清,WesternBlotting检测其自噬相关分子、增殖相关蛋白、抗凋亡蛋白和软骨基质代谢相关蛋白。结果：1、5%浓度血清对人OA软骨细胞基质具有明显的保护作用。2、5%浓度血清可以诱导人OA软骨细胞自噬作用的发生。3、伴随自噬活动的增强,5%浓度血清同时也可以促进人OA软骨细胞的存活,并抑制其凋亡。4、mTOR和AKT两条通路参与了5%浓度血清诱导的人OA软骨细胞的自噬活动以及其细胞增殖与凋亡的调节,然而在5%血清环境下对OA软骨细胞施以雷帕霉素或LY294002并不能进一步影响软骨基质相关蛋白的表达。结论：5%浓度血清可通过诱导人OA软骨细胞自噬对其细胞基质产生保护作用,并产生一定的抗凋亡作用,从而促进细胞的存活。这种作用受到mTOR和AKT两条通路的调节。相对于mTOR或AKT信号通路的抑制剂,5%浓度血清是更佳的软骨细胞保护剂。
【作者】张同恩；
【导师】夏春；
【作者基本信息】厦门大学，外科学，2014，硕士
【关键词】骨性关节炎；血清；自噬；

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