Sfmbt2基因第十内含子携带的microRNA-466a-3p作为重要的转录后调节因子调节小鼠OREBP/Nfat5的表达并影响小鼠的渗透调节和尿液浓缩机制

Sfmbt2基因第十内含子携带的microRNA-466a-3p作为重要的转录后调节因子调节小鼠OREBP/Nfat5的表达并影响小鼠的渗透调节和尿液浓缩机制

作者:师大云端图书馆 时间:2020-03-18 分类:硕士论文 喜欢:4212
师大云端图书馆

【摘要】miR-466a-3p以及一大组它们的近亲miRNAs来源于小鼠第二号染色体、Sfmbt2基因第十内含子所携带的miRNA基因簇(又被称为2号染色体miRNA基因簇,即C2MC),对渗透胁迫非常敏感。C2MCmiRNAs序列具有高度保守性,许多-3pmiRNAs的序列儿乎完全一样。生物信息学分析和我们的前期研究显不,C2MCmiRNAs可能在肾细胞中参与渗透应激调控转录因子OREBP/Nfat5的转录后调控。因而本研究对miR-466a-3p以及其近亲miRNAs在OREBP/Nfat5表达和小鼠肾细胞和组织高渗应激调控,尿液浓缩机制的影响进行了探究。通过对mIMCD3细胞AVP暴露处理和对雄性8-10周龄FVB野生型(WT)小鼠禁水处理,分析细胞中或是肾内髓质中miR-466(a/b/c/e/p)-3p和miR-200b的表达。在小鼠mIMCD3细胞中过表达或抑制miR-466a-3p,分析OREBP/Nfat5表达变化和miR-466a-3p对靶基因的调控作用。通过real-timeRT-PCR检测miR-466a,OREBP/Nfat5,AQP1-3,UtA2等渗透调节相关基因在miR-466a转基因小鼠肾脏中表达情况。收集雄性8-10周龄WT与两个品系的miR-466a转基因小鼠24小时期间的水摄入量和尿液排出量数据,收集尿液,分析尿液渗透压。通过HE染色观察肾脏组织形态的变化。结果显示,在]nIMCD3细胞AVP暴露处理后miR-466(a/b/c/e/p)-3p和miR-200b的表达量均下降;小鼠禁水8h-16h间,miR-466(a/b/c/e/p)-3p和miR-200b的表达量持续下降,而禁水24h后均恢复至正常水平,在mIMCD3细胞中过表达miR-466-3p显著抑制OREBP/Nfat5的表达,抑制miR-466-3p则会显著上调OREBP/Nfat5的表达。荧光素酶报告基因系统分析表明,miR-466a-3p对OREBP/Nfat5的抑制是通过与mRNA3’端非编码区的相互作用而实现的。在两个品系的miR-466a转基因小鼠中,OREBP/Nfat5,AQP1-3,UtA2等渗透调节相关基因均出现显著下调,小鼠也出现了多饮水和多尿的表现型。HE染色结果显示,与WT小鼠相比,两个品系的miR-466a转基因小鼠髓质均出现了异常的组织形态。以上实验结果说明,在小鼠中:niR-466a-3p和它的一些同源miRNA作为转录后调节因子通过参与Nfat5信号通路,进而影响小鼠肾脏渗透调控和尿液浓缩机制。
【作者】刘梦;
【导师】杨云青;
【作者基本信息】厦门大学,细胞生物学,2014,硕士
【关键词】miR-466a-3p;OREBP/TonEBP/Nfat5;渗透调节;尿液浓缩机制;Sfmbt2基因第十内含子miRNA基因簇(2号染色体miRNA基因簇);抗利尿激素;

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