大黄鱼标志技术研究及耐低温性状相关SSR标记筛选

【摘要】大黄鱼是我国重要的海洋经济鱼类，由于酷渔滥捕，大黄鱼资源严重枯竭，已到了濒临灭绝的地步，目前我国大黄鱼种质面临着生长变缓，抵抗力变差，耐受性变弱，个体变小和性成熟提早等各种种质退化的问题，大黄鱼在浙江地区无法自然过冬对浙江大黄鱼养殖业造成致命打击，大黄鱼种质资源改良选育迫在眉睫。本研究通过群体选育方法，以岱衢洋大黄鱼幼鱼（耐低温品系F2代储备亲鱼）为研究对象，初步探索了荧光和PIT两种传统标志技术对大黄鱼生长状况的影响，得到了较优标志方法。另一方面，对耐低温品系F2代储备亲鱼进行人工低温胁迫实验，初步筛选出F2代大黄鱼耐低温群体，利用微卫星标记技术，对低温耐受群体和非耐受群体进行遗传多样性比较分析，并筛选出1个与耐低温性状相关的微卫星标记位点。通过传统标志技术和现代化基因标记技术手段的结合研究，为耐低温品系后续的大黄鱼群体选育及培育研究提供了较优的标志方法和高效的分子标记检测手段。主要研究内容及成果如下：1、大黄鱼VIE与PIT标志的初步研究群体选育目标群体较多，在群体数量较多时（大于两个群体），标志技术的使用不仅可有效保证选育外界环境一致，保证选育结果的有效性，还可以减少所使用的养殖设施和人工成本，降低选育工作强度，提高效率。2013年4月，通过对样本大黄鱼进行VIE标和PIT标处理，每组400尾，设置空白对照组（无标志、400尾），共3组1200尾大黄鱼。结果显示：VIE与PIT对大黄鱼的体重、体长生长状况影响均无显著差异（P>0.05）。而在成活率的比较中，VIE比PIT标志表现结果好且差异显著（P<0.05），两者脱标率均较低且无显著差异（P>0.05）。VIE标志对大黄鱼的存活生长影响比PIT小，前者操作简易、成本较低，仅不到后者12.5%，因此，本试验后期工作均采用VIE标记大黄鱼。2、遗传多样性分析及耐低温性状相关SSR标记的筛选2013年1月对3000余尾体长9.2~11.5cm岱衢洋大黄鱼幼鱼进行人工低温胁迫实验,以低温耐受组和非低温耐受组2个F2代群体各50个个体为研究对象，分析了群体耐低温性状的遗传差异。结果显示：13个微卫星标记位点在2个岱衢洋大黄鱼群体中共检测到109个等位基因，观测等位基因85个，平均有效等位基因6.49个，观测杂合度0.89，平均期望杂合度0.85，2个群体的平均多态信息含量值为0.81，全部为高度多态，表明13个微卫星位点在所选育的岱衢洋大黄鱼群体中均表现出较高的多态性，群体的遗传多样性比较丰富，可以作为良好的育种材料。耐低温性状相关微卫星标记的研究显示，标记LYC0015在两组样品中共扩增出5个等位基因(片段大小分别为112、110、108、106和104bp),其中LYC0015112bp等位基因在低温耐受组的出现频率达48%,而在正常对照组中的频率为零，表明该等位基因对岱衢洋大黄鱼温度特性较为敏感，可能与某种耐低温基因存在一定的连锁关系，这一结果可以为岱衢洋大黄鱼今后耐低温群体的选育研究提供基础资料。本研究对研究所培育的耐寒和非耐寒群体遗传多样性SSR分析结果表明，2个大黄鱼养殖群体的多态信息含量整体水平较高（PIC＞0.5），多态性丰富，具有良好的选育潜力。通过对13个微卫星标记的筛选，进一步验证了LYC0015位点与大黄鱼耐低温性状相关的研究结论。
【作者】王惠儒；
【导师】罗海忠；宋伟华；
【作者基本信息】浙江海洋学院，养殖（专业学位），2014，硕士
【关键词】大黄鱼；耐低温；标志技术；微卫星标记；遗传多样性；

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