兔短链脂肪酸受体GPR41和GPR43基因的鉴定

兔短链脂肪酸受体GPR41和GPR43基因的鉴定

作者:师大云端图书馆 时间:2018-08-08 分类:硕士论文 喜欢:3493
师大云端图书馆

【摘要】短链脂肪酸,主要包括乙酸、丙酸和丁酸,主要由肠道微生物发酵没有被消化和不能被消化的碳水化合物生成。短链脂肪酸不仅是动物体内重要的能量来源(可提供牛60%-70%的能量需要,猪15%-24%的能量需要),而且是重要的信号分子,在很多生理过程中发挥重要的调节作用。2003年,有研究表明短链脂肪酸能够激活G蛋白偶联受体GPR41和GPR43,并且GPR41和GPR43与短链脂肪酸结合对机体代谢、免疫等功能具有潜在的调控作用。迄今,关于GPR41和GPR43的研究主要集中在人、大鼠和小鼠上,对于兔基因组中是否含有GPR41和GPR43基因及其结构、功能和组织表达情况尚未有研究报道。本研究,首先确定兔全基因组中是否含有与人和啮齿类动物GPR41和GPR43基因序列相似的基因。然后检测GPR41和GPR43基因是否在兔的各个组织中表达。若表达,通过巢式PCR法和蛋白印迹法分别在基因水平和蛋白水平检测兔各组织中GPR41和GPR43的表达情况。1利用BLAST和DNAMAN等进行序列分析运用BLAST对比兔的基因组与人、大鼠、小鼠、牛和山羊的GPR41基因和GPR43基因。结果表明:兔的基因组含有GPR41和GPR43基因,且兔GPR41基因序列与人大鼠、小鼠、牛、和羊的GPR41基因序列的相似性分别为84%、80%、81%、84%和84%;兔GPR43基因序列与人、大鼠、小鼠、牛和羊的GPR43基因序列的相似性分别为83%、85%、84%、79%和81%。氨基酸序列对比,结果表明:GPR41氨基酸序列与人、大鼠、小鼠、牛和羊的GPR41氨基酸序列的相似性分别为70%、75%、75%、74%和74%;GPR43氨基酸序列与人、大鼠、小鼠、牛和羊的GPR43氨基酸序列的相似性分别为79%、81%、82%、72%和73%。2巢式PCR检测兔各组织中GPR41和GPR43mRNA的表达采用巢式PCR技术,分别分析GPR41和GPR43基因在兔不同组织内]mRNA水平。结果表明:GPR41基因在除了下丘脑和垂体外的各组织中都有表达,在肝脏、结肠和脂肪组织中表达量较高;肌肉和心脏组织表达量较少。GPR43基因在各组织中均有表达,在下丘脑和脂肪组织中表达量较高;肌肉和肾上腺组织表达量较少。3蛋白印迹法检测兔各组织中GPR41和GPR43蛋白表达水平利用western-blot技术,分别检测兔不同组织中GPR41和GPR43蛋白的表达水平。结果表明:GPR41在除了下丘脑和垂体组织外的其他组织中均有表达,在肝脏组织中表达量较高,实验检测出的蛋白大小在55kD-70kD之间,大于GPR41目的蛋白39kD;GPR43在兔的组织中均有表达,在肌肉和肺组织中表达量较高,实验检测出的蛋白大小在55kD-70kD,大于GPR43目的蛋白43kD。
【作者】苏浩;
【导师】姚文;
【作者基本信息】南京农业大学,养殖,2013,硕士
【关键词】兔;GPR41;GPR43;mRNA表达;蛋白表达;

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