O-(2-异丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺类农药多残留免疫分析技术研究

【摘要】本研究根据O-(2-异丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺类有机磷农药的公共结构,以O-甲基硫代磷酰二氯、水杨酸异丙酯和γ-氨基丁酸为原料,合成了相应的通用半抗原。通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成了相应的免疫原和包被原。用免疫原免疫小鼠,通过常规方法融合、筛选,最终获得了一株杂交瘤细胞6B5/E3。此细胞株分泌的抗体亚型为IgG1,轻链为K型,亲和常数为4.64×107L/mol。此单克隆抗体对水胺硫磷、甲基异柳磷和乙基异柳磷有明显的识别作用,对其它农药则不识别。以杂交瘤细胞株6B5/E3所分泌的单克隆抗体为基础,通过对检测体系中封闭物、离子强度、pH值等影响因子进行研究,建立了O-(2-异丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺类农药多残留的ELISA检测体系。在此优化的检测体系下,分别建立了三种农药(水胺硫磷、甲基异柳磷和乙基异柳磷)的ELISA标准曲线。以Logit(B/Bo)为纵坐标,农药浓度的对数值为横坐标,进行转化,分别得到了三个线性方程。水胺硫磷的线性方程为y=-2.1313x+2.9175,相关系数R2达0.9908,I50为23.39ng/ml,最低检测限为12.19ng/ml,在土壤、纯水和大米中的平均添加回收率分别为112.86%、103.54%和104.81%。甲基异柳磷的线性方程为y=-1.9333x+3.5754,相关系数R2达0.9938,I50为70.79ng/ml,最低检测限为34.51ng/ml,在土壤、纯水和大米中的平均添加回收率分别为105.63%、107.84%和101.85%。乙基异柳磷的线性方程为y=-1.2001x+2.1553,相关系数R2达0.9796,I50为62.52ng/ml,最低检测限为19.68ng/ml,在土壤、纯水和大米中的平均添加回收率分别为100.54%、91.63%和102.27%。本研究获得了O-(2-异丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺类农药的单克隆抗体,为检测这类农药提供了理论依据,也为这类农药的快速检测提供了很好的方法,为农药检测试剂盒的开发提供了条件。
【作者】秦娜；
【导师】刘凤权；
【作者基本信息】南京农业大学，植物病理学，2010，硕士
【关键词】有机磷农药；酶联免疫吸附试验；单克隆抗体；多残留检测；

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