绿豆渣ACE抑制肽的制备、鉴定及其模拟移动床色谱分离技术研究

【摘要】为了充分利用绿豆蛋白资源，增加绿豆加工产品附加值，本课题以绿豆淀粉加工副产物绿豆渣为实验原料，经预处理后采用酶解技术制备绿豆渣ACE（AngiotensinConvertingEnzyme）抑制肽，并利用分离纯化技术和生物质谱技术对降血压肽进行了纯化和鉴定，最后通过模拟移动床色谱技术进行产业化分离高活性降血压肽。主要研究内容和结论如下。（1）通过超微粉碎、有机溶剂萃取、酶解等处理技术，打破原料致密的结构，去除其中的淀粉、脂类等可能影响到肽的制备与纯化的物质。在酶的筛选试验中，以酶解产物ACE抑制率和水解度为指标选出最佳水解用酶为Alcalase2.4L碱性蛋白酶。（2）选择底物浓度、pH、温度和加酶量[E]:[S]为单因素，并且确定4种因素的参数值进行正交试验，以ACE抑制率为评价指标，确定酶法水解制备绿豆渣ACE抑制肽的最优工艺条件。研究结果表明，pH8.0，温度50℃，底物浓度9%，加酶量[E]：[S]1.5:100,可得到最大ACE抑制率为75.68%。（3）产物纯化过程首先分别采用截留分子质量5000u、3000u和1000u超滤膜进行分级分离，得到分子量1000-3000u之间的组分进行大孔树脂分离，得到肽的ACE抑制率80.5%。树脂分离产物再经制备型RP-HPLC（反相高效液相色潽）分离，得到ACE抑制率为89.5%的高活性ACE抑制肽。对RP-HPLC分离高活性产物进行序列测定，串联质谱联用测定结果经搜库显示有三个肽序列匹配率最高，序列分别为：FLVNPDDNENL、FLVNPDDNENLRII、KDNVISEIPTEVLDL。（4）根据肽纯度、收率两个角度分析的试验结果，模拟移动床的数据模型和相关理论结合单因素试验，确定进样浓度为14mg/mL，进样流速、水洗1流速、醇洗流速、水洗2流速的值分别定为：14.0mL/min，21.0mL/min，12.0mL/min，26.0mL/min为最佳。利用人工胃液、人工肠液进行体外模拟试验，试验结果表明，高活性绿豆渣ACE抑制肽能够耐受人工胃液、人工肠液的作用，有较强的稳定性并且其降血压功能较好。
【作者】李庆波；
【导师】曹龙奎；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，农产品加工及贮藏工程，2014，硕士
【关键词】绿豆渣；降血压肽；ACE抑制率；模拟移动床色谱分离；

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