第一部分 异基因造血干细胞移植后CD4+T细胞免疫重建特征及与侵袭性真菌感染关系的研究 第二部分 异基因造血干细胞移植后肠道急性移植物抗宿主病危险因素分析

【摘要】研究背景：异基因造血干细胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation,allo-HSCT)后存在免疫重建(immunereconstitution,IR)延迟,尤其CD4+辅助T细胞(Thelpercells,Th)重建缓慢,是移植后感染、复发、继发肿瘤等疾病的重要原因。侵袭性真菌感染(invasivefungalinfections,IFI)是移植后患者死亡的重要原因之一。目前研究表明CD4+辅助T细胞中几个主要亚群T17细胞(Thelper17)、Thl细胞(Thelper1)、Th2细胞(Thelper2)、调节性T细胞(regulatoryTcells,Treg)在机体对真菌感染的免疫应答中发挥不同作用,T17、Thl细胞主要发挥抗真菌作用,而Th2、Treg则在机体抗真菌免疫中发挥免疫抑制作用,不利于感染的控制。在异造血干细胞移植后这些CD4+T细胞亚群的重建特征目前研究较少,它们在移植后IFI的发生中是否发挥作用,目前未见报道。目的：研究异基因造血干细胞移植后3个月内CD4+T细胞及其各个亚群的免疫重建特征；观察各个亚群与IFI的关系,探讨它们在IFI中的作用。方法：收集我院干细胞移植中心自2013年7月至2014年3月进行allo-HSCT后14天、1个月、2个月、3个月检测的62例患者152次的外周血标本,以26名供者作为健康对照组(healthycontrols,HC)。应用流式细胞术检测CD4+T细胞各个亚群T17、Th1、Th2、Treg的比例,应用实时定量PCR(realtimePCR,RT-PCR)方法检测Th17、Th1、Th2、Treg的特异转录因子维甲酸相关孤儿核受体(retinoicacid-relatedorphanreceptoryt,RORγyt)、T-bet(TboxexpressedinTcells)、转录因子GATA结合蛋白-3(GATAbindingprotein-3,GATA3),叉状头／翅膀状螺旋转录因子(forkhead/wingedhelixtranscriptionfactorP3,FoxP3)的mRNA表达量,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Thl类细胞因子干扰素-γ(interferon-y,IFN-γ、Th2类细胞因子白介素6(interleukin6,IL-6)、白介素10(interleukin10,IL-10、Treg分泌的细胞因子转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)血浆浓度的变化。首先分析影响移植后淋巴细胞亚群重建的影响因素,据此对组内患者进一步分亚组。通过比较移植后1、2、3月份患者各个指标与健康对照组的差别、不同月份间CD4+T细胞各个亚群相关指标的动态变化,观察其免疫重建特征。应用Logistic回归分析观察CD4+T细胞亚群与IFI的关系,探讨其在IFI发生中的作用。结果：1、移植后免疫重建的影响因素的研究移植后1个月CD3+细胞数与受者年龄与有关(β=-0.308,P)=0.039)。移植后1个月CD4+T细胞数与既往有无急性移植物抗宿主病(acutegraft-versus-hostdisease,aGVHD)(p=-0.355,P=0.017),供者类型(p=-0.427,P=0.046)、受者年龄(p=-0.365,P=0.009)有关。移植后2个月CD3+细胞数与预处理是否含抗胸腺细胞球蛋白(antithymocyteglobulin,ATG)(β=-0.387,P=0.021)有关。移植后3个月CD4+T细胞数与预处理是否应用ATG(β=-0.387,P=0.043)有关。2、移植后不同月份患者各个指标与健康对照组的比较(1)CD3+细胞数在移植后1月患者[(559.93±323.27)×106/L,P=0.000]低于健康对照组[(1311.55±363.68)×106/L],在移植后2月未应用ATG预处理组[(1463.62±900.71)×106/L]与健康对照组[(1311.55±363.68)×106/L]无差别(P=0.661),而应用ATG预处理组[(798.33±602.58)×106/L]低于健康对照组(P=0.001),亦低于未应用ATG预处理组(P=0.002)在移植后3月患者与健康对照组无差别。CD4+T细胞数在在移植后1个月四个亚组SD-nonGVHD,SD-GVHD、URD-nonGVHD、URD-GVHD患者均低于健康对照组,在移植后2月患者[(458.40±364.47)×106/L]低于健康对照组[(971.91±336.10)×106/L](P=0.000),在移植后3月应用ATG预处理组[(300.73±224.75)X106/L,P=0.000]与未应用ATG预处理组[(537.70±221.88)×106/L,P=0.000]均低于健康对照组[(71.91±336.10)×106/L],而两组间无差别(P=0.057)。CD8+T细胞数在移植后1月患者[(252.13±184.72)×106/L,P=0.004]低于健康对照组[(339.64±122.52)×106/L],而在移植后2月[(763.30±576.59)×106/L,P=0.003]、3月[(633.45±397.71)×106/L,P)=0.002]患者均高于健康对照组。Thl7、Th1、Th2、Treg细胞数在移植后1月、2月、3月患者均低于健康对照组(P<0.05)。(2)Th17细胞占CD4+T细胞的比例在移植后1月、2月、3月患者均低于健康对照组(P<0.05)。Thl细胞比例在移植后1月、2月患者与健康对照组无差异,在移植后3月患者[(28.54±14.69)%,P=0.034]高于健康对照组[(20.74±10.26)%]。Th2细胞比例在移植后1月患者[(0.22±0.20)%,P=0.009]低于健康对照组[(0.50±0.57)%],在移植后2月、3月患者与健康对照组无差异。Treg细胞比例在移植后1月、2月、3月患者与健康对照组均无差异。(3)转录因子RORγt、GATA3、FoxP3mRNA表达量在移植后1月、2月、3月均低于健康对照组(P<0.05)。T-betmRNA表达量在移植后1月(0.3111±0.3513,P=0.000)、3月(0.4666±0.3960,P=0.045)患者均低于健康对照组(0.7279±0.5477),移植后2月患者与健康对照组无差异。(4)IFN-γ浓度在移植后1月、2月、3月患者与健康对照组无差异。IL-6、IL-10浓度在移植后1月、2月、3月患者均高于健康对照组(P<0.05)。TGF-β浓度在移植后1月、2月、3月患者均低于健康对照组(P<0.05)。3、动态监测CD4+T细胞亚群相关指标变化的结果(1)Th17细胞数在移植后1月[(2.49±2.16)×106/L]低于移植后3月[(3.95±2.91)×106/L](JP=0.017),1月与2月、2月与3月无差别。Thl细胞数在移植后1月[(78.88±88.89)×106/L]低于移植后3月[(139.52±84.08)×106/L](P=0.042),1月与2月、2月与3月无差别。Th2、Treg细胞数在移植后1、2、3月之间比较均无差别。(2)Th17、Th1、Th2、Treg占CD4+T细胞的比例在移植后1、2、3月之间比较均无差别。(3)RORγt、T-bet、GATA3、FoxP3mRNA表达量在移植后1、2、3月之间比较均无差别。(4)IFN-γ、IL-10、TGF-β浓度在移植后1、2、3月之间比较均无差别。IL-6浓度在移植后1月[(4.17±4.80)pg/ml]低于移植后3月[(13.87±10.36)pg/ml](P=0.005),移植后1月与2月、2月与3月比较无差别。4、CD4+T细胞亚群与IFI的相关性(1)59例129次患者纳入本研究,其中12例(20.3%)患者发生IFI,其中临床诊断1例,病原菌为曲霉菌,拟诊11例。(2)Th17细胞数与IFI的发生相关(OR=0.176,P=0.005),而Th1、Th2、Tre胞数与IFI的发生无关。(3)RORγt、T-bet、GATA3、FoxP3的mRNA表达量与IFI的发生无关。(4)IFN-γ、IL-6、IL-10、TGF-β的浓度均与IFI的发生无关。结论：1、allo-HSCT后CD4+T细胞及其各个亚群Th17、Th1、Th2、Treg均存在免疫重建延迟,而CD8+T细胞恢复较快。2、allo-HSCT后CD4+T细胞向Th17细胞的分化明显受抑。3、Th17细胞是allo-HSCT后IFI发生的保护因素。目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生的危险因素。方法回顾性总结2004年1月至2012年9月进行allo-HSCT的533例(534例次)患者临床资料,应用Logistic回归分析供受者人类白细胞抗原(HLA)配型是否相合、患者年龄、供者年龄、供受者性别关系、供受者亲缘关系、干细胞来源、预处理含或不含全身放射治疗(TBI)、LA位点等因素与不同程度肠道aGVHD的关系。结果123例(23.0%)发生肠道aGVHD,其中1级86例(16.1%),2～4级37例(6.9%)。多因素分析显示供受者HLA配型不合(OR=2.519,P=0.002)、供者年龄增大(OR=1.034,P=0.002)、女性供者男性受者(OR=1.840,P=0.008)是发生肠道aGVHD的危险因素,HLA-B38(OR=0.256,P=0.032)是其保护因素；供受者HLA配型不合(OR=2.799,P=0.011)\供者年龄增大(OR=1.045,P=0.012)、HLA-A1(OR=4.157,P=0.002)、A30(OR=3.143,P=0.005)是发生2～4级肠道aGVHD的危险因素。结论肠道aGVHD的发生及严重程度与供受者HLA配型是否相合、供者年龄、供受者性别关系及某些HLA位点相关。
【作者】燕法红；
【导师】韩明哲；
【作者基本信息】北京协和医学院，内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】CD4+T细胞；免疫重建；侵袭性真菌感染；异基因造血干细胞移植；造血干细胞移植；异基因；移植物抗宿主病；肠道；急性；危险因素；

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