油茶籽活性成分抗炎机理研究

【摘要】在我国,油茶具有悠久的栽培历史,其种子主要被用于生产油茶籽油和茶皂素,并有大量研究表明其生物活性和药理功能。炎症可以引起关节炎、心脑血管疾病、老年痴呆、癌症等多种疾病,是被广泛关注的公共卫生问题。本研究通过对油茶籽主要活性成分黄酮苷和皂素的分离制备研究,及其抗炎效果和机制的研究,取得了以下研究成果：1.回流提取、溶剂萃取联合半制备液相色谱分离制备油茶籽中的黄酮苷和皂素,得到四种黄酮苷和五种皂素,分别为山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基]-p-D-吡喃葡萄糖苷,山奈酚-3-O-p-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-7-O-a-L-吡喃鼠李糖苷,山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃木糖基-6-O-a-L-吡喃鼠李糖基]-p-D-吡喃葡萄糖苷和山奈酚-3-O-a-L–吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷；山茶皂素B1/B2或茶皂素H1、茶皂素F1、阿萨姆皂素F、阿萨姆皂素A/E或茶皂素G1和茶皂素A1。半制备HPLC分离黄酮苷和皂素的最优条件为：流动相A相(95%水+5%冰乙酸)：B相(乙腈)=65%：35%分离制得黄酮苷部分；流动相A相(95%水+5%冰乙酸)：B相(乙腈)=20%：80%分离制得皂素部分,流速为8ml/min,最大上样量为50mg。每次分离耗时1h以内,可制得纯度为98.58%的黄酮苷和75.01%的皂素,并建立了UPLC-MS鉴定黄酮苷和皂素的方法分别仅需10min,15min.2.建立脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导炎症的细胞模型,检测其一氧化氮(NO)积累量,发现黄酮苷和皂素均可显著抑制NO在细胞内的产量,说明两者均具有较好的抗炎效果。随之,检测了细胞内重要的促炎细胞因子：肿瘤坏死因子-a(Tumornecrosisfactor,TNF-a)、诱导型一氧化氮合成酶(Induciblenitricoxidesynthase,iNOS)、环氧合酶-2(Cycloxygenase-2,COX-2)和巨噬细胞炎症蛋白-1α(Macrophageinflammatoryprotein-1α,MIP-1α)在mRNA水平和iNOS、COX-2在蛋白水平的表达量,发现黄酮苷和皂素均可抑制其表达,说明黄酮苷和皂素抗炎效果的发挥与抑制这些细胞因子的表达有关。3.通过检测LPS诱导炎症的细胞模型中NO的积累量,发现油茶籽毛油和成品油均有较好的抗炎效果,由促炎因子TNF-α、INOS、COX-2和MIP-1α表达量的测定结果可知,油茶籽油的抗炎效果与抑制这些细胞因子的表达有关,这与油茶籽中黄酮苷和皂素的研究结果一致。并且,相同浓度的毛油与成品油相比,毛油的抗炎效果优于成品油。4.优化了测定油茶籽油挥发性成分的固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(SPME-GC-MS),其最佳前处理方式是萃取温度50℃,萃取时间60min,经GC-MS分析后毛油和成品油分别确定了31种和24种挥发性成分,并有16种共有成分,分别占两者挥发性成分总量的54.98%和70.23%。从挥发性成分的种类看,两种油茶籽油的烃类、醇类和酯类成分的相对含量差异不大,但其组成有所不同；而醛类、酮类、酸类等挥发性成分的相对含量差异较大,说明毛油的精制过程对其挥发性成分的种类和数量有较大影响。总之,本实验以油茶籽的活性成分为研究对象,分离制得油茶籽中的黄酮苷和皂素,并用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)鉴定其组成和结构。然后通过LPS诱导建立RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症模型,研究了油茶籽中总黄酮苷、总皂素及油茶籽油的抗炎效果,进一步测定炎症模型中TNF-α、iNOS.COX-2和MIP-1α的基因和蛋白表达量明确其抗炎的分子机理。此外,还优化了油茶籽油挥发性成分的测定方法,确定了其挥发性成分的组成和特点。
【作者】刘晓慧；
【导师】屠幼英；
【作者基本信息】浙江大学，茶学，2014，博士
【关键词】油茶；茶籽；黄酮；皂素；茶油；抗炎；

【参考文献】
[1]陈淼.交错降压式新型有源电力滤波器的研究[D].南京航空航天大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.
[2]赵传莉.两类神经元模型的动力学分析[D].华南理工大学,应用数学,2014,硕士.
[3]余晓俊.圈养獐（Hydropotes inermis）繁殖行为和粪便性激素水平变化及两者相关性研究[D].华东师范大学,生态学,2013,硕士.
[4]罗彦.企业智能过程中的数字化仓储物流[D].浙江理工大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[5]孙莹.我国信托业监管问题探究[D].吉林财经大学,经济法学,2014,硕士.
[6]李瑞.红龙电影主题公园人才发展战略研究[D].吉林大学,工商管理,2014,硕士.
[7]南春磊.马铃薯挖掘机挖掘铲电液仿形系统的试验研究[D].内蒙古农业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[8]李杰.数字化无模铸造精密成形机排砂系统研究[D].机械科学研究总院,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[9]沈海波,洪帆.语义Web及其应用[J].微计算机应用,2005,05:586-589.
[10]张天月.企业不同类型合法性不足行为对其利益相关者的影响差异机制研究[D].华东理工大学,企业管理,2013,硕士.
[11]张旭波,屈展,李小刚.高校图书馆管理的数据仓库技术研究[J].西安石油大学学报(自然科学版),2004,02:71-73+93.
[12]杨丽.母语（汉语）构思对外语（英语）写作的影响[D].山西大学,外国语言学与应用语言学,2004,硕士.
[13]杨一,高社生,胡高歌.基于敏感度方差重要性的RBF神经网络结构优化算法[J].控制与决策.
[14]阮仁良,黄长缨.苏州河水质黑臭评价方法和标准的探讨[J].上海水务.2002(03)
[15]樊驰.西南地区有机肥钾资源调查与利用评价[D].西南大学,植物营养学,2014,硕士.
[16]姜河.基于变形引擎的目标代码混淆方法设计与实现[D].西北大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[17]黄姒.艺术家的“尼采”灵魂[D].中央美术学院,油画,2013,硕士.
[18]王彦丽.基于多目标参数优化的超高强度硼钢板热成形性能研究[D].重庆大学,材料加工工程,2014,硕士.
[19]易昂.MAS应用于分布式数据挖掘的研究[D].长沙理工大学,2004.
[20]秦家年.客户关系资产评估与管理研究[D].西安理工大学,2005.
[21]邓阳杰.宫地嘉六文学作品中劳动者形象研究[D].华中师范大学,日语语言文学,2013,硕士.
[22]邹建明.大型地网接地技术的研究[D].浙江大学,电气工程,2003,硕士.
[23]曾菲圆.基于Petri网的路面损毁情况通行能力研究[D].西南交通大学,交通运输工程,2014,硕士.
[24]孟春光.“拍客”行为性质的法律分析[D].黑龙江大学,法律,2013,硕士.
[25]谢鸿斌.情绪对买卖双方交易中损失规避的影响[D].鲁东大学,应用心理（专业学位）,2013,硕士.
[26]卢慧娟.递增负荷至力竭运动对沈阳体育学院男性大学生唾液和血液乳酸、睾酮、皮质醇的影响及相关性研究[D].沈阳体育学院,运动人体科学,2013,硕士.
[27]巢阳.贸易发展促进货币国际化研究[D].宁波大学,国际贸易学,2013,硕士.
[28]杨文超.锂离子电池正极材料LiMnPO_4的合成研究[D].浙江理工大学,应用化学,2014,硕士.
[29]章蕾.移动新闻客户端用户评论赋权行为初探[D].厦门大学,传播学,2014,硕士.
[30]朱彦颖.英语电视新闻访谈的话语结构及互动模式分析[D].杭州电子科技大学,英语语言文学,2012,硕士.
[31]韩嫚嫚.高速公路违章停车自动检测系统研制[D].河南科技大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[32]张维谊.镰形扇头蜱唾液腺及其表达序列标签的研究[D].广西大学,预防兽医学,2004,硕士.
[33]王波.血浆高分子量激肽原在炎症性肠病发病中的作用及机制的初步研究[D].苏州大学,细胞生物学,2014,硕士.
[34]阎冰.工科专业人才网络教育培养模式研究[D].吉林大学,项目管理,2013,硕士.
[35]王文生.三氯乙烯生产技术改进研究[D].浙江工业大学,2012.
[36]王春然.环氧乳化沥青在粘层中的应用研究[D].长安大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[37]赵学平,王增连,石彦民.三角洲和水下扇的地震相分析[J].石油地球物理勘探,1981,02:51-60.
[38]马玉杰.精益生产在A公司的应用与研究[D].苏州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[39]李玥.糖尿病前期者基于互联网的健康管理研究[D].北京中医药大学,中医护理学,2013,硕士.
[40]左晶.自救行为立法化之评析[D].湖南师范大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[41]刘苗苗.延安时期青年政治认同及现代启示[D].北京交通大学,2015.
[42]孙欣,张庆灵,杨春雨,邵永运,苏湛.离散奇异时滞系统时滞依赖稳定性分析与镇定(英文)[J].自动化学报,2010,10:1477-1483.
[43]杜薇.确立中国式的辩诉交易制度[D].安徽大学,法律,2003,硕士.
[44]田丽娟.三部非裔美国文学作品中的身份认同解读[D].东北师范大学,比较文学与世界文学,2012,硕士.
[45]尹庆标.基于智能优化算法的微波吸波材料结构设计研究[D].南京邮电大学,电磁场与微波技术,2013,硕士.
[46]马霄.分数阶PI~λD~μ控制器数字实现及应用研究[D].河北大学,检测技术与自动化装置,2014,硕士.
[47]胡金辉.物联网网关关键技术的研究和实现方案[D].西安电子科技大学,电路与系统,2012,硕士.
[48]兰会晗.文化创意产业视角下的河南工业遗产旅游开发研究[D].河南科技大学,旅游管理,2013,硕士.
[49]蔡劲松.美国对外军事援助研究[D].中共中央党校,外交学,2014,博士.
[50]赵恒.数据挖掘中分类属性数据聚类研究[D].西安电子科技大学,电路与系统,2003,硕士.