应用碱基淬灭探针法检测α-1抗胰蛋白酶基因342Glu→Lys突变

【摘要】目的：利用碱基淬灭探针技术建立检测编码α-1抗胰蛋白酶基因342Glu→Lys突变位点的新型诊断方法。方法：（1）方法学构建：引物、探针设计，探针3’端标记6-羧基荧光素，同时构建2个载体作为阳性对照模板，分别代表两种可能的纯合子基因型，即野生型（342Glu/Glu）和纯合突变型（342Lys/Lys）。收集338例病人全血标本，离心柱法抽提基因组DNA，PCR扩增目的产物，应用熔解曲线对结果进行分析判断。（2）方法学优化：优化PCR反应条件并检测方法的准确性和灵敏性。结果：熔解曲线分析结果显示纯合突变型（342Lys/Lys）和野生型（342Glu/Glu）分别在41.38±0.90°C及48.64±1.33°C处出现单一熔解谷；人工构建的杂合子（342Glu/Lys）在41.38±0.90°C及48.64±1.33°C处均出现熔解谷。338例病人标本均在48.64±1.33°C处出现熔解谷，与野生型阳性对照结果一致，即所有标本基因型均为342Glu/Glu。灵敏性分析结果显示模板DNA量在103拷贝时也可以看到明显的熔解谷。Kappa检验显示该方法的检测结果与DNA测序法所得结果完全一致（K=1，P=0.000）。结论：本研究所建立的方法准确、简单、经济，适合大规模对α-1抗胰蛋白酶基因342Glu→Lys突变的分型诊断。
【作者】秦莉；
【导师】罗光华；
【作者基本信息】苏州大学，临床检验诊断学，2014，硕士
【关键词】单核苷酸多态性；α-1抗胰蛋白酶缺陷病；PiZ型突变；

【参考文献】
[1]梁峰.LED前雾灯设计研究[D].南京理工大学,车辆工程,2013,硕士.
[2]冯遵安.高温超导磁体应变的光纤探测与数值模拟[D].中国科学院研究生院（电工研究所）,电工理论与新技术,2004,硕士.
[3]高璇.基于神经网络的故障诊断研究[D].东北大学,控制理论与控制工程,2010,硕士.
[4]高洁.创业板市场上市公司成长性的研究[D].首都经济贸易大学,应用统计（专业学位）,2013,硕士.
[5]王珍.实时系统的运行时验证研究[D].华中师范大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[6]陈春元,杜国萍,吴铿.喷枪形式对煤粉燃烧率影响的研究[J].炼铁.2003(02)
[7]章辉.基于芯能级X射线谱学的碳纳米材料电子结构研究[D].苏州大学,2013.
[8]黄发阳.压电式送料器驱动电源设计与速度控制研究[D].哈尔滨工业大学,控制工程,2013,硕士.
[9]王胜.改革以来西部地区财政支农投入问题及对策研究[D].西南农业大学,农业经济管理,2003,硕士.
[10]李锦文.基于网络模式的复杂三维集装箱问题求解方法研究[D].兰州理工大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[11]赵盼盼.电压模式PFM升压DC-DC转换器设计[D].哈尔滨工业大学,微电子学与固体电子学,2014,硕士.
[12]朱杰.股指期货交易对现货市场波动性的影响[D].南京大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[13]刘冲.中国外汇储备结构优化研究[D].山东财经大学,金融学,2014,硕士.
[14]甘琼.网络语中谐音表达的认知语义研究[D].湖南师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[15]高淑英.晋商银行员工培训问题研究[D].山西财经大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[16]朱祥磊.社区综合服务中心在社区建设过程中的角色定位研究[D].吉林大学,社会工作,2013,硕士.
[17]孙露.计及侧风的某跑车高速气动稳定性研究[D].湖南大学,车辆工程,2011,硕士.
[18]孙墨寒.高光谱数据误差估计及降维方法研究[D].中国地质大学（北京）,测绘工程,2013,硕士.
[19]李萍.互联网对国际民商事管辖权的冲击及对策研究[D].华东政法学院,法律,2004,硕士.
[20]张静.海顿清唱剧《四季》的音乐学分析[D].天津音乐学院,音乐学,2013,硕士.
[21]王伟.铁路网抗毁性分析与研究[D].北京交通大学,2011.
[22]吕慧.二氧化钛基复合光催化剂的制备及其性能研究[D].华东理工大学,2014.
[23]陈继中,莫明道,朱忠宽.用有限带宽反射波波形分析法进行储层横向预测[J].石油地球物理勘探,1993,01:73-83+126.
[24]陈峰,翟庆生,王子甲.社会力行人仿真模型的分子动力学方法实现[J].系统工程理论与实践,2014,04:1003-1010.
[25]张吴钰.从认知角度谈《诗经》词汇翻译[D].华东师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[26]林纯宽.流量表检定装置的数据处理方法与技术研究[D].杭州电子科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[27]王旭.基于CompactRIO的桥梁健康监测数据采集传输系统研究与设计[D].长安大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[28]唐兴.劣质数据库上查询优化关键技术的研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[29]冯传亮.高速旋转火箭弹[D].中北大学,测试计量技术及仪器,2014,硕士.
[30]刘向杰,柴天佑,刘红波.动力锅炉燃烧系统的模糊控制策略[J].自动化学报,1998,04:104-108.
[31]姜晓艳.304不锈钢冷轧带钢板形问题的数值模拟[D].内蒙古科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[32]李凯.巴戟天对心肌缺血再灌注损伤的保护作用[D].辽宁医学院,外科学,2012,硕士.
[33]张千.论我国食品安全监管中的信息公开制度[D].华中科技大学,法律,2013,硕士.
[34]饶磊.既判力视野下我国民事再审程序之重塑[D].华中师范大学,法律,2014,硕士.
[35]王辉.我国地方政府行政许可的现状、问题与对策[D].湘潭大学,公共管理,2011,硕士.
[36]李倩,李洪光.复合纳米碳材料的制备及其在肿瘤治疗中的应用[A].中国化学会.中国化学会第三届全国生物物理化学会议暨国际华人生物物理化学发展论坛论文摘要集[C].中国化学会:,2014:1.
[37]焦健.规整表面纳米银粒子的制备及迁移特性研究[D].中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）,物理化学,2003,硕士.
[38]徐吉芳.小学音乐鉴赏教学实践研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[39]李宇杰,王梦恕,徐会杰,张元.地铁矿山法区间隧道病害分级标准及补强对策[J].都市快轨交通,2014,01:86-89.
[40]吴蝉.氧化铁纳米粒子对玉米生理效应的影响和吸收、转运机制的研究[D].武汉理工大学,2014.
[41]竹洪涛.一种基于SIP和WebRTC的实时可视对讲方案设计[D].西南交通大学,计算机技术,2013,硕士.
[42]许瑾瑾.冠心病合并糖尿病患者血清sLR11水平变化及其与冠脉病变的关系[D].郑州大学,心血管内科,2013,硕士.
[43]卓柳迎.构建诚信为本的现代企业文化[D].福建师范大学,社会学,2004,硕士.
[44]李鹏.采用层间隔震的车辆段上盖剪力墙结构的抗震性能研究[D].北京建筑大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[45]杨连乔,冯伟,王浪,张建华.铜基石墨烯的CVD法制备工艺参数研究[J].华中科技大学学报(自然科学版),2014,10:5-9.
[46]刘金玉.浦城县发展生态有机烟叶的探索与研究[D].福建农林大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[47]焦韦蓉.恒牙列骨性安氏Ⅲ类错（牙合）正畸治疗前后颅面部结构变化的临床研究[D].广西医科大学,口腔正畸学（专业学位）,2013,硕士.
[48]宋开山,张柏,王宗明,刘殿伟,刘焕军.基于小波分析的大豆叶绿素a含量高光谱反演模型[J].植物生态学报,2008,01:152-160.
[49]李丽.就业力的内涵、结构及对大学生就业的影响研究[D].山东财经大学,企业管理,2012,硕士.
[50]李瑛.临时名量词及其对外汉语教学策略研究[D].湖南大学,汉语国际教育,2013,硕士.