PRRSV特异性肽对CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞IFN-γ、IL-10分泌的影响

【摘要】猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV）引起的猪的一种烈性传染病，现已成为我国规模化养猪场的主要疫病之一。PRRSV能够破坏猪的免疫系统，形成免疫抑制。PRRSV和CSFV的混合感染也很常见，增加了病死率并造成巨大的经济损失。二者的免疫发生相互关联，但机制不清。为了检测PRRSV特异性肽对细胞因子分泌的影响，本实验选取PRRSV、CSFV、PCV2以及PRV检测均为阴性的健康断奶仔猪20头。所有实验猪免疫CSF、PRRS疫苗，分别在PRRS免疫后的第14d和第28d，对所有实验猪前腔静脉采血分离淋巴细胞及血清。血清用于PRRSV及CSFV抗体的检测。淋巴细胞用含10%小牛血清的RPMI1640培养液在5%CO2，37℃条件下培养，并应用PRRSV-GP5（GP5aa96-104）、PRRSV-N-1（N-1aa106-114）以及PRRSV-N-2（N-2aa49-57）特异性肽分别在淋巴细胞培养的第24h和第72h刺激CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞，刺激12h后收集细胞培养上清，利用ELISA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IFN-γ及IL-10的水平。同时采用ELISA抗体检测试剂盒检测CSFV、PRRSV抗体，根据抗体检测结果，将实验猪分为4组，分别为CSFV-PRRSV抗体应答组、CSFV抗体应答PRRSV抗体不应答组、CSFV抗体不应答PRRSV抗体应答组以及CSFV-PRRSV抗体不应答组。分析比较不同免疫状态下，在GP5aa96-104、N-1aa106-114以及N-2aa49-57刺激后，淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ及IL-10的变化规律。结果显示，PRRS免疫第14d，在淋巴细胞培养24h时，加入GP5aa96-104肽刺激后，CSFV抗体应答PRRSV抗体不应答组中肽刺激组IFN-γ分泌量显著高于空白组IFN-γ分泌量（P<0.05），CSFV抗体不应答组中IFN-γ分泌量无明显差异（P>0.05），此时各组中IL-10分泌量肽刺激组均显著低于空白组（P<0.05）；加入N-1aa106-114肽刺激后，各组中肽刺激组与空白组相比IFN-γ分泌量均无显著差异（P＞0.05），但此时肽刺激组IL-10分泌量显著低于空白组IL-10分泌量（P<0.05）；加入N-2aa49-57肽刺激后，CSFV抗体应答PRRSV抗体不应答组中肽刺激组IFN-γ分泌量高于空白组，存在显著差异（P＜0.05），各组中加肽刺激后IL-10分泌量均显著降低（P＜0.05）。在淋巴细胞培养72h时，加入GP5aa96-104肽刺激后，各组中IFN-γ分泌量均无显著差异（P>0.05）；加入N-1aa106-114肽刺激后，各组中IFN-γ分泌量无显著差异（P＞0.05），但肽刺激组IL-10分泌量显著低于空白组IL-10分泌量（P<0.05）；加入N-2aa49-57肽刺激后，各组中肽刺激组IL-10分泌量与空白组相比显著降低（P<0.05）。PRRS免疫第28d，在淋巴细胞培养24h时，加入GP5aa96-104肽刺激后，CSFV抗体应答PRRSV抗体不应答组中肽刺激组IFN-γ分泌量显著高于空白组IFN-γ分泌量（P<0.05），各组中IL-10分泌量均差异不显著（P＞0.05）；加入N-1aa106-114肽刺激后，各组中肽刺激组IFN-γ分泌量与空白组相比显著升高（P<0.05），此时IL-10分泌量均差异不显著（P＞0.05）；加入N-2aa49-57肽刺激后，各组中IFN-γ分泌量与IL-10分泌量均无显著差异（P＞0.05）。在淋巴细胞培养72h时，加入N-1aa106-114肽刺激后，各组中肽刺激组IFN-γ分泌量与空白组相比差异均不显著（P>0.05），CSFV-PRRSV抗体应答组、CSFV抗体应答PRRSV抗体不应答组中，肽刺激组IL-10分泌量均显著低于空白组IL-10分泌量（P<0.05）；加入N-2aa49-57肽刺激后，各组中IFN-γ分泌量差异不显著（P>0.05），CSFV抗体不应答PRRSV抗体应答组中，肽刺激组IL-10分泌量与空白组相比显著降低（P<0.05）。结果表明，当CSFV抗体表达量增加时，机体对PRRSV能够产生较强的免疫应答。良好的CSF免疫状态有利于GP5aa96-104肽以及N-2aa49-57肽刺激外周血淋巴细胞分泌IFN-γ。GP5aa96-104肽、N-1aa106-114肽以及N-2aa49-57肽对IL-10的分泌均具有显著的抑制作用，提示我们GP5aa96-104肽、N-1aa106-114肽以及N-2aa49-57肽可能减弱PRRSV的复制、增强淋巴细胞的免疫应答，而N-1aa106-114肽在PRRS免疫28d时能够维持IFN-γ高水平表达，可能对免疫力的提高具有促进作用。
【作者】郎广平；
【导师】高英杰；
【作者基本信息】吉林大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】猪繁殖与呼吸综合征；PRRSV肽；IFN-γ；IL-10；

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