蛋白激酶C抑制剂TAM对人脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制研究

蛋白激酶C抑制剂TAM对人脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制研究

作者:师大云端图书馆 时间:2018-04-03 分类:参考文献 喜欢:2384
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【摘要】目的探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂他莫昔芬(tamoxifen,TAM)联合X射线对人脑胶质瘤A172和U251细胞生长、细胞周期、凋亡和放射敏感性的影响及其机制,构建人脑胶质瘤裸鼠原位瘤,在体内验证TAM的放射增敏作用。方法(一)体外实验1、MTT法检测不同TAM浓度、不同处理时间脑胶质瘤A172、U251细胞的增殖变化;2、划痕实验观察脑胶质瘤A172、U251细胞的迁移能力;3、克隆形成实验检测TAM对脑胶质瘤A172、U251细胞的放射敏感性的影响;4、流式细胞仪测定TAM联合X射线对脑胶质瘤A172、U251细胞的周期分布和细胞凋亡的影响;5、western-blot法检测细胞内蛋白表达水平的变化。(二)体内实验:构建裸鼠脑胶质瘤原位模型,将成瘤的裸鼠随机分为对照组、放疗组、TAM组、放疗+TAM组,每组5只。MRI评估原位瘤裸鼠肿瘤体积大小,处死裸鼠取瘤组织,免疫组化检测瘤组织中与凋亡相关的蛋白Bad的变化。结果(一)体外实验:1、TAM可显著抑制人脑胶质瘤A172、U251细胞的增殖,当TAM浓度为10μmol/L时,A172细胞的存活率为95.1%,U251细胞的存活率为93.9%,且与对照组相比无统计学意义,因此后续实验研究选择10μmol/L药物浓度作为实验浓度。2、细胞划痕实验显示TAM联合X射线可显著抑制人脑胶质瘤A172、U251细胞的迁移能力。3、TAM联合X射线照射作用脑胶质瘤细胞时,细胞克隆存活率随照射剂量的增加而减少(p<0.01),多靶单击模型拟合剂量存活曲线,A172细胞单纯照射组的平均致死剂量(D0)和准阈剂量(Dq)分别2.46Gy和2.97Gy,照射+TAM组的D0和Dq分别为1.97Gy和2.80Gy,A172细胞的放射增敏比(SER)为1.25;U251细胞单纯照射组的D0和Dq分别为2.60Gy和0.91Gy,照射+TAM组的D0和Dq分别为1.78Gy和1.34Gy,U251细胞的放射增敏比(SER)为1.46。4、TAM联合X射线使人脑胶质瘤A172、U251细胞发生G2/M期阻滞且不可逆转。5、TAM联合X射线可显著增加人脑胶质瘤A172、U251细胞的凋亡率(p<0.01)。6、western-blot结果显示,TAM联合X射线作用脑胶质瘤A172、U251细胞能显著抑制PKCι和Cdk7的活性,周期蛋白cyclinB1的表达减少,而凋亡蛋白Bad的表达明显增加,caspase3的活性增加,PARP的活性降低。(二)体内试验:1、构建原位脑胶质瘤A172细胞的荷瘤鼠模型,MRI检查结果显示照射+TAM组肿瘤体积比其他实验组肿瘤体积明显小,免疫组化显示照射+TAM组肿瘤组织Bad表达增高。结论(1)TAM能明显抑制人脑胶质瘤A172和U251细胞的增殖,呈浓度和作用时间依赖性;(2)TAM联合X射线能显著抑制人脑胶质瘤A172和U251细胞的迁移能力,TAM能增加人脑胶质瘤A172和U251细胞的放射敏感性(;3)TAM联合X射线可显著增加脑胶质瘤A172和U251细胞的G2/M期阻滞,促进脑胶质瘤细胞的凋亡;(4)TAM能够通过抑制PKCι的活性增加脑胶质瘤A172和U251细胞的辐射敏感性。同时TAM能够通过抑制Cdk7的活性进而降低G2/M期相关蛋白cyclinB1的表达,导致G2/M期的阻滞增加,凋亡蛋白Bad的升高,增加caspase3活性并降低PARP的活性,增强X射线诱导的凋亡作用。(5)TAM联合X射线能有效抑制肿瘤生长。
【作者】杨磊;
【导师】刘芬菊;
【作者基本信息】苏州大学,放射医学,2014,硕士
【关键词】TAM;人脑胶质瘤细胞;放射增敏;PCKι;G2/M;期阻滞;凋亡;

【参考文献】
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