钙离子及水解酶在HIV-1 Vpu对宿主限制因子Tetherin拮抗过程中的作用研究

钙离子及水解酶在HIV-1 Vpu对宿主限制因子Tetherin拮抗过程中的作用研究

作者:师大云端图书馆 时间:2017-12-17 分类:参考文献 喜欢:2166
师大云端图书馆

【摘要】Tetherin(BST2,CD317)是一类天然宿主限制因子,可由干扰素α诱导表达。Tetherin具有广谱的抗病毒功能,能够抑制多种包膜病毒从宿主细胞中释放,而此功能依赖于其特定的拓扑和空间结构。Tetherin是一种II型膜蛋白,其整体结构由N端胞浆区(CT)、单次穿膜螺旋区(TM)、胞外螺旋区,C端糖基磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidylinositol,GPI)锚定区构成。为了拮抗Tetherin对病毒释放的束缚作用,HIV-1通过编码Vpu蛋白帮助新生病毒粒子顺利脱逃。Vpu是HIV-1特有的I型膜蛋白,包含一段较短的胞外区,一段由α单股螺旋穿膜区,一段双股α螺旋胞内区。HIV-1Vpu对宿主限制因子Tetherin的拮抗作用对于HIV-1新生病毒粒子的顺利出芽和释放十分重要,但其通过何种机制拮抗Tetherin的作用尚不明确。这几年国际上对此问题的报道是逐步深化的,开始主要集中在Vpu对Tetherin的降解作用,随后进展为对Tetherin细胞表面定位的下调作用,但进一步的研究表明这二者都不是最主要的作用,Vpu对Tetherin的拮抗机制仍有待进一步阐明。Vpu的同源寡聚体能够形成弱选择性钾离子通道,同时也有报道其可能干扰细胞的背景钾离子通道TASK的功能,但这类通道活性是否在促进释放和拮抗Tetherin方面具有作用仍不明确。Vpu具有离子通道活性,暗示其对细胞的膜电位以及胞内外的某些重要离子(如钙离子)的平衡可能有潜在影响。而Tetherin的物理系留作用使得我们和其他研究者们猜想Vpu可能通过激活某种形式的水解酶的活力来对Tetherin进行切割从而促进病毒释放。本论文在以上三个方面做了初步的探索性研究,为该研究领域提供了新思路。本论文首先探究了Vpu的存在是否影响细胞内钙离子的浓度以及这种变化是否与Vpu自身的离子通道活性相关。我们在瞬时转染或稳定转染Vpu的细胞中利用钙荧光探针Fluo-4AM标记细胞内的钙离子,通过流式细胞术和倒置荧光显微镜镜检两种手段均检测到Vpu对细胞内钙离子浓度具有上调作用。其次,本论文研究了细胞内钙浓度的变化是否会影响Vpu对Tetherin的拮抗作用,以及这一过程中是否有电压依赖钙离子通道的参与。荧光定量PCR结果显示,293T细胞和Hela细胞均能够内源性表达L型钙离子通道和T型钙离子通道相关亚基。利用RNA干扰和使用拮抗剂阻断钙通道等方法检测了VDCC对病毒释放的影响,结果表明,Vpu对Tetherin的拮抗作用可能与T型VDCC相关。此外,通过流式细胞术发现VDCC并不参与Vpu对细胞表面Tetherin表达量的下调过程。这些实验结果暗示Vpu可能通过T型VDCC调控细胞内钙离子浓度,而钙离子可能通过某些需要进一步研究的其他机制,如阻止Tetherin定位于病毒出芽位点或者激活某些水解酶类的方式,来拮抗Tetherin的功能。此外,本论文探讨了一些可能作用于Tetherin的水解酶是否参与Vpu拮抗Tetherin过程。通过添加不同水解酶抑制剂的方法检测各类水解酶对HIV-1病毒释放的影响,证实了Vpu对Tetherin的拮抗作用与磷脂酶C、磷脂酶D和MMP不具有直接相关性,但MMP可能促进HIV-1病毒释放。我们还发现Tetherin存在潜在的弗林蛋白酶作用位点,但通过对该位点进行点突变,观察到Tetherin突变体的蛋白条带没有发生迁移现象,我们基本排除了弗林蛋白酶作用于Tetherin的可能性。通过以上实验,我们对这些可能参与Vpu拮抗Tetherin过程的调控分子进行了尝试性摸索。这些实验结果帮助我们对Vpu与Tetherin的相互作用机制有了更深入的了解,为我们今后的探索方向提供一定的借鉴。在未来我们将设计更精细的实验深入研究Vpu引起的胞浆钙浓度的提升是否能够调控Vpu对Tetherin的拮抗过程,以及T型VDCC在这个过程中所发挥的作用。此外,初步探究Vpu对Tetherin的拮抗作用是否与膜曲率变化相关。通过这些探索性实验,尝试发现钙离子与Vpu/Tetherin作用途径的潜在关联并揭示一条新的依赖钙离子的Vpu对Tetherin的拮抗途径。
【作者】朱迎紫;
【导师】于湘晖;吴嘉昕;
【作者基本信息】吉林大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士
【关键词】HIV-1;Tetherin;Vpu;拮抗作用;钙离子;VDCC;水解酶;膜曲率;

【参考文献】
[1]吴蓝波.我国公务员养老金制度改革探析[D].中国政法大学,法律,2013,硕士.
[2]刘先宝,蒲朝霞,余蕾,冯燕,何伟,林剑靖,胡泼,王建安,葛均波.经导管二尖瓣夹合术的临床结果介绍[J].中国介入心脏病学杂志,2014,07:448-451.
[3]张忆雪.酶法制磷脂酰丝氨酸[D].北京化工大学,微生物与生化药学,2013,硕士.
[4]吕鹏.数据仓库技术在南京地税综合信息系统中的研究与应用[D].东北大学,计算机应用技术,2010,硕士.
[5]周程.广告双关语的语境顺应性研究[D].湖南工业大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[6]秦英林.电能质量扰动的自动识别和时刻定位研究[D].山东大学,2010.
[7]田月香.A热电厂员工培训问题及对策研究[D].黑龙江大学,工商管理,2013,硕士.
[8]张凌霞.V-LINE(中国)客户关系管理研究[D].北京交通大学,工商管理(专业学位),2013,硕士.
[9]尹秀华.PD模型大鼠神经细胞程序性凋亡通路研究及坏死性凋亡初探[D].苏州大学,免疫学,2014,硕士.
[10]朱显妍.房产市场周期性波动对商业银行个人房贷违约风险影响的研究[D].湖南师范大学,企业管理,2014,硕士.
[11]王志勤,万屹,魏贵明.3G技术试验及标准研究进展介绍[J].电信网技术.2003(09)
[12]刘静.数据仓库在零售业商业智能系统的应用[D].江苏科技大学,模式识别与智能系统,2014,硕士.
[13]刘凯璇.解析施光南艺术歌曲的美学特征与个性化演绎[D].西南交通大学,艺术学,2014,硕士.
[14]林华.双吲哚甲烷类化合物以及有机小分子催化的手性胺类化合物的合成[D].复旦大学,有机化学,2012,博士.
[15]马懿莉.江西省新型城镇化建设研究[D].华中师范大学,科学技术哲学,2014,硕士.
[16]龙山.证券投资基金绩效评价方法与实证研究[D].湖南大学,管理科学与工程,2003,硕士.
[17]巩敦卫,张建化,郭一楠.一类不确定性网络控制系统的滑模控制器设计[J].控制与决策,2006,10:1197-1200.
[18]黄浣清.学困生小组工作服务方案设计[D].华中师范大学,社会工作,2014,硕士.
[19]米阳,黄建雄,李文林.多输入离散时滞系统的变结构控制设计[J].控制与决策,2006,12:1425-1428.
[20]刘庆强.基于Agent的环保信息智能服务系统的研究与实现[D].大庆石油学院,计算机应用技术,2004,硕士.
[21]曾繁坤.中央苏区时期廉政文化建设中的舆论宣传研究[D].南昌航空大学,马克思主义发展史,2012,硕士.
[22]历娜.中国制造企业实施精益创新的理论与对策研究[D].吉林大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[23]刘权,官建成.基于Hamming神经网络的R&D项目中止决策方法[J].自动化学报,2002,02:279-283.
[24]安宸.我国货币政策和房地产价格关系的实证研究[D].湘潭大学,金融学,2011,硕士.
[25]麻旭妍.基于MFCC的不良音频检测的研究[D].兰州大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[26]黄伟.公路边坡工程地质灾害危险性评估方法研究[D].重庆交通大学,道路与铁道工程,2012,硕士.
[27]刘丽文.麦弗逊悬架侧载螺旋弹簧计算机辅助设计[D].燕山大学,重型装备设计理论及其数字化技术,2014,硕士.
[28]李想.基于Flex的煤层气经济评价辅助决策平台设计与实现[D].中国矿业大学,地图学与地理信息系统,2014,硕士.
[29]姚玉莹.水稻核心种质抗倒特性及其主要农艺性状的全基因组关联分析[D].华中农业大学,作物栽培学与耕作学,2014,硕士.
[30]王遵彤,纪德法,乔非,吴启迪.基于MAS技术的电梯群控系统建模及agent协商机制与梯群调度算法[J].控制与决策,2007,10:1184-1188.
[31]李瑞斌.基于CORBA的软件部署与管理系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[32]宋怀思.教会学校与花梨岭社区[D].湖北民族学院,民族学,2013,硕士.
[33]朱佳佳.视网膜微血管改变与脑微出血的相关性分析[D].南方医科大学,神经病学,2012,硕士.
[34]段芬芳.立体图像视觉失真和显著计算模型及其图像质量评价应用[D].宁波大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[35]张绪仙.双交叉限制燃烧控制系统[J].冶金自动化,1984,04:8-13.
[36]杨斌.基于PLC的泡沫沥青试验机控制系统研究[D].长安大学,机械电子工程,2014,硕士.
[37]裴忠民,邓志东,徐硕,许潇.一种基于N-最优阶次序列的无线传感器网络节点定位方法[J].自动化学报,2010,02:199-207.
[38]肖隆庚.EDI技术处理重金属废水的试验研究[D].广东工业大学,环境工程,2014,硕士.
[39]佟国峰,蒋昭炎,叶柠,徐心和.大场景三维重建中多核并行捆集调整算法[J].控制与决策,2013,09:1403-1408.
[40]许琳.英语语言中的性别歧视现象探析[D].西安电子科技大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[41]占自涛.铁钻工夹持拧卸机构研究与机液联合仿真分析[D].吉林大学,机械电子工程,2014,硕士.
[42]褚衍昌,许家梁.关于潜在信息资源及其挖掘利用的探讨[J].图书馆工作与研究,2003,06:61-62.
[43]刘云侠.微波辅助法合成荧光碳点及其光学性质的研究[D].兰州大学,物理化学,2014,硕士.
[44]安勇.利用地震波组特征的精细相干扫描方法[J].石油地球物理勘探,2009,04:406-408+528+379-380.
[45]单蕊,卞爱飞,於文辉,曲赞.利用叠前全波形反演进行储层预测[J].石油地球物理勘探,2011,04:629-633+667+498.
[46]杜文.框支短肢剪力墙斜柱转换结构设计研究[D].重庆大学,建筑与土木工程(专业学位),2014,硕士.
[47]戴欣.乳腺癌组织中PIK3CA、KRAS及BRAF基因突变热点区域的序列分析[D].淮北师范大学,植物学,2014,硕士.
[48]陈福增.L公司互联网智能电视研发项目质量管理研究与实践[D].首都经济贸易大学,工商管理(专业学位),2014,硕士.
[49]陈雪波,李小华.反馈控制器降阶的约束与聚集方法[J].控制与决策,2000,02:169-172.
[50]吴艳青.中国传统文化元素在房地产广告中的应用[D].中南民族大学,传播学,2013,硕士.

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