连接蛋白40、43基因表达水平对绒山羊毛囊生长发育相关基因表达的影响

【摘要】细胞间隙连接(gapjunction)由若干连接蛋白构成,在毛囊生长发育的细胞信号转导过程中起到十分重要的作用。在之前的研究中发现,通过高通量转录组测序方法得到的绒山羊皮肤毛囊静息期和生长期差异表达的基因中,连接蛋白40(Connexin40,Cx40)和连接蛋白43(Connexin43,Cx43)的表达存在明显差异。本研究选取Cx40和Cx43基因作为研究对象,探讨两种基因是否在绒山羊毛囊生长发育中起到重要的调控作用,从而为进一步研究绒山羊毛囊生长发育的基因调控系统提供实验依据。本研究成功分离得到了绒山羊初级毛乳头细胞、次级毛乳头细胞和表皮细胞,并分析了这3种细胞中Cx40和Cx43基因的表达情况；同时,通过进一步对绒山羊皮肤进行检测发现,Cx40和Cx43基因在绒山羊皮肤毛囊生长期转录表达水平显著高于静息期。通过RT-PCR技术成功克隆了Cx40和Cx43基因的CDS序列；将两段序列分别插入到了真核表达载体pIRES2-EGFP中,成功构建了pIRES2-EGFP-Cx40载体和pIRES2-EGFP-Cx43载体；将上述两种载体通过脂质体转染的方法对绒山羊初级毛乳头细胞、次级毛乳头细胞、表皮细胞进行转染,得到6种转基因细胞系,实现了Cx40和Cx43基因在3种细胞中的过表达。通过qPCR对6种转基因细胞系参与绒山羊毛囊生长发育的相关基因进行转录水平检测比较发现：(1)VEGF基因转录表达水平：转Cx40基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的0.84、0.14b和0.57a倍,转Cx43基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的0.81、0.18a和0.62a倍(a：P<0.05,b：P<0.01)。(2)IGF-1基因转录表达水平：转Cx40基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的4.02b、1.8a和1.91a倍,转Cx43基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的4.27b、1.93a和1.42a倍(a：P<0.05,b：P<0.01)。(3)β-catenin基因转录表达水平：转Cx40基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的2.19a、1.13和5.05b倍,转Cx43基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的1.32、1.12和2.46a倍(a：P<0.05,b：P<0.01)。(4)HIF-1α基因转录表达水平：转Cx40基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的0.51a、0.46a和0.72倍,转Cx43基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的0.52a、0.54a和0.56a倍(a：P<0.05)。(5)胸腺素β4基因转录表达水平：转Cx40基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的1.08、0.74和1.23倍,转Cx43基因初、次级毛乳头细胞系和表皮细胞系的相对表达量分别是非转基因细胞系的1.13、0.67a和0.87倍(a：P<0.05)。上述结果提示,在绒山羊初级毛乳头细胞、次级毛乳头细胞、表皮细胞中,Cx40和Cx43基因的过表达对VEGF和HIF-1α基因转录表达整体上有抑制其表达的趋势,因此Cx40和Cx43基因对这2个基因可能起到负调控作用；对IGF-1和β-catenin基因转录表达整体上有促进其表达的趋势,因此Cx40和Cx43基因对这2个基因可能起到正调控作用；对胸腺素β4基因转录表达整体上作用不显著。然而Cx40和Cx43基因对这些参与绒山羊毛囊生长发育的相关基因调控的具体机制仍需进一步研究。
【作者】戴柏；
【导师】刘东军；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】绒山羊；连接蛋白40；连接蛋白43；毛囊；实时荧光定量PCR；

【参考文献】
[1]周军.论数据仓库技术在竞争情报业务中的应用[J].情报资料工作,2004,S1:142-144.
[2]高亚楠.基于GIS的城市社区家庭通勤交通碳排放热点分析[D].长安大学,交通工程,2013,硕士.
[3]黄杏仪.选择性注意加工机制上聋哑生和正常生的比较研究[D].华南师范大学,基础心理学,2004,硕士.
[4]林仕明.论滇西地区铁路建设路基工程技术管理方法[D].西南交通大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[5]方明磊.双目视觉测量的数字散斑相关匹配方法研究[D].吉林大学,机械工程,2014,硕士.
[6]冯士云.胸腺瘤中PTEN、Ki-67及EGFR的表达情况及其相关性研究[D].吉林大学,外科学,2013,硕士.
[7]翟玉斌.秸秆—污泥吸附剂的制备及其特性研究[D].华中科技大学,环境工程,2013,硕士.
[8]高荣伟.程开甲:中国“核司令”的科技人生[J].红广角,2014,03:26-28.
[9]李一平.《挪威的森林》中的拟声词拟态词的翻译[D].长春工业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[10]陈安亮,徐曦,韩铁成.HPC及其在桥梁中的应用优势[J].混凝土世界,2015,03:80-83.
[11]许来俊.苜蓿再生体系的建立与转化体系的条件探索[D].河南农业大学,草业科学,2012,硕士.
[12]杨向荣,宋擒豹,沈钧毅.入侵检测技术研究与系统设计[J].计算机工程与应用,2001,16:1-4.
[13]赵陈同.计算生物学开拓现代生物技术研究的未来[J].江苏科技信息,2005,10:11-12.
[14]姜吉刚.中国扁蜂科系统分类及生物地理研究[D].中南林学院,森林保护学,2004,硕士.
[15]庄飞能.当代中国乡村社会个体化与乡土重建[D].华中师范大学,政治社会学,2014,硕士.
[16]陈颐.我国大学科技园的建设与发展研究[D].福州大学,社会学,2004,硕士.
[17]王爱梅.磁县农业土地适度规模经营问题研究[D].河北大学,政治经济学,2014,硕士.
[18]康文杰.基于传感器网络的精细农作物监测系统开发及路由算法研究[D].东北大学,计算机软件与理论,2010,硕士.
[19]余瑞金.IGF-1、CD34在结直肠癌中的表达与临床病理及血管生成的关系[D].兰州大学,内科学,2013,硕士.
[20]吴浩,郭瑞鹏,甘德强,韩祯祥,黄志龙,庄侃沁.发电机有效无功储备的分析和计算[J].电力系统自动化,2011,15:13-17+39.
[21]吕维.木马攻击及检测系统的研究与实现[D].内蒙古大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[22]金华.《岁寒堂诗话》的诗学研究现状[J].重庆第二师范学院学报,2014,05:84-87.
[23]柳顺,杜树新.基于数据包络分析的模糊综合评价方法[J].模糊系统与数学,2010,02:93-98.
[24]李布白,高敬东.杭州大剧院的舞台机械[J].演艺设备与科技.2006(01)
[25]冀晋.奥运报道中国家形象的建构[D].四川外国语大学,文艺学,2013,硕士.
[26]李晓乐.弗洛姆自由观的探讨[D].华中师范大学,文艺学,2014,硕士.
[27]张芙蓉.可持续发展观视野下我国非常规油气资源开发利用研究[D].成都理工大学,科学技术哲学,2013,硕士.
[28]张小君.水资源社会经济循环规律研究[D].西北师范大学,人文地理学,2013,硕士.
[29]叶浩鸣.LJ465Q可变长度进气歧管的研究[D].广西科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[30]杨隽.结构动力学鲁棒设计方法及应用[D].南京航空航天大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[31]汪伟.钙铝硼硅/氧化铝玻璃陶瓷性能研究[D].华中科技大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[32]刘涛.X服装企业市场营销精细化管理研究[D].广东工业大学,工商管理,2014,硕士.
[33]鄢海涛.基于报文节奏的Web DDoS防御技术[D].山东大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[34]汪宁宁.地理新课程主体参与课堂教学模式的研究与实践[D].河北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[35]石钢钢研所专业室测试组.电子秤(三)——第二章电子秤的显示仪表[J].冶金自动化,1977,03:84-100.
[36]康正九,胡保生.基于逆QR分解的RELS参数估计及其并行实现[J].控制与决策,1996,01:16-21.
[37]王君,樊治平.一种基于Web的企业知识管理系统的模型框架[J].东北大学学报,2003,02:182-185.
[38]李欣然,姜学皎,钱军,陈辉华,宋军英,黄良刚.基于用户日负荷曲线的用电行业分类与综合方法[J].电力系统自动化,2010,10:56-61.
[39]张琳.当代中国粮食安全问题研究[D].吉林大学,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[40]史桐.鄂尔多斯盆地安塞油田三叠系延长组低幅度构造研究[D].西北大学,构造地质学,2014,硕士.
[41]肖峻峰.HFC网络中上行带宽分配算法的研究[D].重庆大学,通信与信息系统,2003,硕士.
[42]张莎娜.长株潭地区农田土壤重金属污染状况及植物修复技术初探[D].湖南师范大学,自然地理学,2014,硕士.
[43]龙世铭.热控薄膜冲孔过程的仿真分析[D].兰州理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[44]王洁.关于一名高中生英语学习困难的个案研究[D].首都师范大学,学科教学英语,2014,硕士.
[45]简芳.基于FPGA的Σ-Δ型模数转换器的仿真研究与设计[D].广东工业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[46]王会才,赵修青,姚晓霞,马振华,王建伟,柴秀琴.铵盐功能化氧化石墨烯的制备及其吸附性能[J].天津工业大学学报,2015,02:48-52.
[47]史贵超.我国见义勇为的法律思考[D].上海大学,法律,2013,硕士.
[48]周成虎,骆剑承.遥感影象统计分析及其扩展模型[J].中国图象图形学报,2001,12:66-71.
[49]杨文红.旅行社网络化经营体系构建研究[D].青岛大学,旅游管理,2004,硕士.
[50]卢美贞,陆向红,尹立军,计建炳.乌桕梓油甲酯中2,4-癸二烯酸甲酯的分离[J].中国粮油学报,2014,01:57-60.