肝硬化基础上肝癌的临床危险因素分析及肝癌与肝硬化微小RNA差异表达研究

【摘要】目的：1)初探新疆地区肝硬化病因特点及肝细胞性肝癌发生危险因素,以及肝硬化患者血液生化学特征；2)筛选乙肝肝硬化肝癌患者肝癌组织与肝硬化组织微小RNA(microRNA,miRNAs,miRNA)差异表达谱；3)检测差异表达最明显的miRNA在原发性肝癌(PrimaryLiverCancer,PLC)患者肝癌组织中的表达。为原发性肝癌分子机制研究提供新的思路和途径,为原发性肝癌早期诊断提供分子指标的筛选奠定基础。方法：1)回顾分析新疆医科大学第一附属医院近11年确诊的7212例肝硬化住院患者病因构成,探讨乙型肝炎病毒(hepatitisBvirusHBV)感染、丙肝病毒、饮酒、性别、年龄、民族、2型糖尿病对肝硬化人群肝细胞性肝癌发生的影响；对乙肝病毒合并酒精因素肝硬化患者与乙肝病毒不合并酒精肝硬化组、酒精性肝硬化组在年龄、性别、民族、肝硬化严重程度、血常规、生化指标的特征进行组间比较；2)在7212例肝硬化患者合并原发性肝癌的1169例患者中,选取行肝癌根治治疗的9例患者,取手术切除的肝癌标本(实验组)及距肿瘤5cm以上的肝硬化标本(对照组)。利用Trizol法提取肝癌组织和配对的肝硬化组织细胞中的总RNA,分光光度计NanoDropND-1000进行定量,变性凝胶电泳分析提取的总RNA质量。利用芯片技术对提取的RNA经microRNA芯片进行杂交,结果经扫描读数,最后用SignificanceAnalysisofMicroarrays软件version3.02(SAM)挑选差异表达基因。选择筛选出的2个差异表达明显的miRNAshsa-miR-1269和hsa-miR-199b-3p进行实时荧光定量PCR验证;3)结果采用Rral-timePCR法,进一步测定hsa-miR-1269在肝癌组织和肝硬化组织中的表达水平。结果：1)7212例肝硬化病因构成前五位分别是乙型肝炎55.10%,丙型肝炎13.42%,原发性胆汁性肝硬化9.28%,酒精性6.36%,隐源性9.01%；16.5%发生肝细胞性肝癌,住院期间死亡6.3%,合并糖尿病占总体12.1%。其中3976例乙肝肝硬化患者中24.25%合并酒精因素,合并酒精因素乙肝肝硬化患者、单纯乙肝肝硬化组和酒精性肝硬化患者相比,在白细胞计数、平均红细胞体积、γ-谷氨酰转肽酶、血清尿酸水平呈现出酒精性肝病特征,且均值水平高于单纯乙肝肝硬化组；HBV感染、HCV感染、饮酒、男性、高龄为本组肝硬化患者肝细胞性肝癌发生独立危险因素,而民族(维吾尔族、其他民族与汉族相比)、2型糖尿病未增加本组肝硬化患者肝癌的发生；2)miRNAs在肝硬化肝癌患者肝癌组织与肝硬化组织中的差异表达：实验组和对照组差异表达的miRNAs共有15个,分别为hsa-miR-1269,hsa-miR-18a,hsa-miR-1180,hsa-miR-1301,hsa-miR-182,hsa-miR-222,hsa-miR-362-5p,hsa-miR-99a,hsa-miR-10a,hsa-miR-30a,hsa-miR-30e,hsa-miR-139-5p,hsa-miR-422a,hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-199b-3p。实时荧光定量PCR验证结果：hsa-miR-1269在实验组和对照组中的平均表达丰度分别为12.058±3.954和16.678±2.352,差异具有统计学意义(P=0.0096)。hsa-miR-199b-3p在实验组和对照组中的平均表达丰度分别为5.417±1.633和3.033±0.768,差异具有统计学意义(P=0.0028)。hsa-miR-1269在肝癌组织中表达上调,hsa-miR-199b-3p在肝癌组织中表达下调,与miRNAs微阵列芯片结果一致；3)hsa-miR-1269硬化肝癌患者肝癌组织和肝硬化中的表达：实时荧光定量PCR结果：hsa-miR-1269在实验组和对照组中的平均表达丰度分别为12.634±4.004和16.963±1.832,差异具有统计学意义(P=0.0035)。结论：1)新疆地区乙型肝炎病毒感染是该地区肝硬化主要原因,但酒精因素与HBV重叠较普遍是其特征；HBV合并酒精因素肝硬化组较乙肝肝硬化组面临更高的氧化应激压力,间接提示酒精因素的参与可能增加乙肝感染者发生肝硬化的机会；HBV感染、HCV感染、酒精(包括饮酒史不详者)、男性、高龄为该组肝硬化患者HCC独立危险因素。民族及2型糖尿病并未增加肝硬化患者肝细胞肝癌的发生；2)在乙肝肝硬化肝癌患者肝癌组织与肝硬化组织中筛选出了15种差异表达的miRNAs,其中hsa-miR-1180,hsa-miR-1301在国内外文献中未见报道,而hsa-miR-1269和hsa-miR-10a与其他一些肿瘤的发生和发展有关,但未见在肝癌中的报道；3)在15种差异表达的miRNAs中,hsa-miR-1269在肝硬化肝癌患者肝癌组织中呈明显的高表达,是一种功能上类似促癌基因的miRNAs。
【作者】范晓棠；
【导师】张跃新；
【作者基本信息】新疆医科大学，内科学，2013，博士
【关键词】原发性肝癌；肝硬化；微小RNA；微阵列芯片；

【参考文献】
[1]李博通,李永丽,胡宇,李伟刚.基于故障区域识别的超高压混联线路故障测距算法[J].电力系统自动化,2013,05:93-98.
[2]赵宜欢.唐代孝亲诗研究[D].安徽大学,中国古代文学,2013,硕士.
[3]杨文彬.瑞安市农田水利建设现状分析及对策研究[D].南京农业大学,农业推广,2012,硕士.
[4]李悦.计算代数在曲面造型中的应用研究[D].北京化工大学,基础数学,2013,硕士.
[5]白立俊.厌氧流化床微生物燃料电池阴极催化剂的制备及性能研究[D].青岛科技大学,2014.
[6]刘卫国.基于项目价值的投标决策方法及辅助决策系统[D].天津大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[7]张斌.应对公民微博参与的思想政治工作研究[D].兰州大学,思想政治教育,2014,硕士.
[8]刘书香,卢才武,张志霞.数据挖掘中的客户聚类分析及其算法实现[J].信息技术,2004,01:4-6+10.
[9]唐丽玉,陈崇成,张群洪,缪海岚.地热资源管理信息系统的设计与实现[J].计算机工程与应用,2005,06:229-232.
[10]王智宏.激光诱导击穿光谱（LIBS）技术在矿物元素成份分析中的应用研究[D].北京交通大学,2007.
[11]王建.大型工程GPS变形监测数据处理关键技术研究[D].西南交通大学,大地测量学与测量工程,2012,硕士.
[12]刘敏.山西省普通高校拓展训练课程开展现状及对策研究[D].山西师范大学,体育教育训练学,2014,硕士.
[13]蔡钰.论新月派艺术主张中的唯美主义思想[D].复旦大学,文艺学,2012,硕士.
[14]刘莉.巨灾风险证券化研究[D].湖南大学,金融学,2003,硕士.
[15]李蒙蒙.纳/微米结构氧化铝复合材料的制备和性能研究[D].吉林大学,分析化学,2013,硕士.
[16]葛新红,田军.人工神经网络在试验设计中的应用研究[J].实验技术与管理,2005,09:24-28.
[17]高星.基于多Agent的港口动态供应链优化研究[D].大连海事大学,物流工程,2013,硕士.
[18]张瑞芳.初中英语课堂教学中合作学习策略的运用研究[D].信阳师范学院,学科教学,2014,硕士.
[19]丁德文.基于嵌入式平台的环境异常事件监测[D].山东师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[20]卢琴.云南撒坝猪大肠杆菌HPI主要结构基因及其致病性研究[D].云南农业大学,基础兽医学,2014,硕士.
[21]张世宁.从蒙太格语法看开来——自然语言逻辑初探[D].河南大学,逻辑学,2004,硕士.
[22]吴红英,张海英,张富海,梁鹏举,张亚军,胡中爱.SnO_2/还原氧化石墨烯/聚苯胺三元复合物的合成及电化学性能[J].材料导报,2012,22:54-58.
[23]魏威.科技信息[J].冶金自动化,1999,03:56.
[24]陈春霞.配方肥用量与种植密度对川芎生长发育和产量的影响[D].四川农业大学,作物栽培学与耕作学,2012,硕士.
[25]黄征.反Z法与横切纵缝法内眦赘皮矫正术后瘢痕的比较分析[D].南昌大学,外科学,2014,硕士.
[26]王西茜.论《大师与玛格丽特》的叙述模式[D].四川外国语大学,俄语语言文学,2013,硕士.
[27]李云柯.“营改增”政策对现代物流业的涉税影响和应对措施研究[D].华中科技大学,工商管理,2013,硕士.
[28]张治菁,曹运红.树脂传递模塑工艺的发展及其在飞行器上的应用[J].飞航导弹.2002(11)
[29]文俊浩,李立新,吴中福,吴红艳.基于邻接关系的空间趋势检测算法研究[J].计算机科学,2003,12:123-125+138.
[30]刘杨.Annexin A5基因沉默对Hep-2细胞凋亡的影响[D].川北医学院,耳鼻咽喉科学,2014,硕士.
[31]戚大波,郝之峰,王军,李洪江.MonitorProV7.2在济钢1750m~3高炉的应用[J].冶金自动化,2005,06:62-64+74.
[32]付瑶瑶.瑜伽在我国部分城市发展现状调查[D].沈阳体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[33]季湘铭.发达地区农户参与农民专业合作社的意愿及满意度的影响因素分析[D].浙江大学,2010.
[34]杨芳.在华留学生初级阶段汉字教学研究[D].沈阳师范大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[35]贾德东.α-二亚胺溴化镍配合物合成及乙烯催化性能的研究[D].齐鲁工业大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[36]丁望.国外客户关系管理理论研究综述[J].经济纵横,2005,08:77-79.
[37]孙凌.同型半胱氨酸和硫化氢的动态平衡与肺动脉高压的相关性[D].南方医科大学,内科学,2014,博士.
[38]赵苗.英语语用水平与中国国际服务贸易[D].山东大学,世界经济学,2013,硕士.
[39]叶明.肝移植受体预后多因素分析临床研究[D].浙江大学,外科学,2004,硕士.
[40]李丽桦.所有人的学校也是每个人的学校——当前法国基础教育课程改革研究[D].华东师范大学,比较教育学,2004,硕士.
[41]张琳.汽车外饰漆色彩发展规律研究[D].吉林大学,设计艺术学,2013,硕士.
[42]路正刚,刘洪臣,史真,王所亭,吴殿久,原新成,龚小燕.放疗后狗下颌种植体周围骨密度变化初探[J].口腔颌面修复学杂志.2001(01)
[43]华杰,徐盛明,徐景明,朱国才,池汝安,时文中.原子力显微镜测定力-距离曲线的原理和应用[J].金属矿山.2003(01)
[44]王雨田,李卫东.城市中雾霾的形成机理及其对策研究[J].合作经济与科技,2015,03:30-32.
[45]杨帆.天然气门站计量监控系统的设计与实现[D].西南交通大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[46]陈万俭,吕平,侯士亮.大型异步电动机的磁控软起动[J].冶金自动化,2005,05:59-61.
[47]朱泽坤.江苏省商业银行联合管理集团企业授信风险研究[D].安徽大学,工商管理,2014,硕士.
[48]武侠.论周作人的人生哲学及其对文艺观和文学创作的影响[D].青岛大学,中国现当代文学,2004,硕士.
[49]张景魁.负摩擦力作用下的桩基础[D].西南交通大学,结构工程,2003,硕士.
[50]匡瀚哲.妊娠期高糖饮食对子代学习记忆及海马神经细胞凋亡的影响[D].苏州大学,细胞生物学,2014,硕士.