丹参注射液联合心脏干细胞移植治疗对急性心肌梗死小鼠的影响

【摘要】目的：通过分别对体外、体内小鼠心肌细胞和心脏干细胞的研究,了解丹参注射液联合心脏干细胞移植治疗对小鼠急性心肌梗死的影响。方法：(1)给予小鼠心肌细胞缺氧培养的同时,给予不同剂量丹参注射液干预,并以空白对照,检测AnnexinV-PI、Caspase-3、CCK-8,通过Real-TimePCR检测Akt、BAD、FGF的基因表达。(2)体外小鼠心脏干细胞培养,并行Sca-1+鉴定,给予缺氧培养,同时给予不同剂量丹参注射液干预,并以空白对照,检测Caspase-3、CCK-8,Edu检测心脏干细胞DNA的合成。(3)以不同剂量丹参注射液喂养小鼠1周,并以空白对照,检测小鼠血常规和肝肾功能指标；将小鼠心脏组织切片检查,荧光检测Sca-1+细胞数量；Real-TimePCR检测VEGF、IL-6、BAD的基因表达。(4)结扎小鼠冠状动脉前降支制作小鼠急性心肌梗死模型,并在心肌梗死周围区域心肌内注射体外培养的小鼠心脏干细胞,以不同剂量的丹参注射液喂养1周,并以空白对照。取小鼠心脏组织,予CD31检测、Ki-67染色、Masson检测、TUNEL检测,采用Westernblot方法检测小鼠心脏内的Akt表达。结果：(1)小鼠心肌细胞缺氧培养后,丹参注射液高剂量组的AnnexinⅤ-PI与其它两组相比显著性降低；丹参注射液低剂量和高剂量组的Caspase-3与对照组相比显著降低；CCK-8OD值丹参注射液高剂量组最高,对照组最低,各组间有显著性差异；FGF基因表达在丹参注射液高剂量组最高,对照组最低,各组之间均有显著性差异；BAD基因表达在丹参注射液高剂量组最低,对照组最高,各组之间均有显著性差异；丹参注射液高剂量和低剂量组的Akt基因表达与对照组相比显著增高,高、低剂量组之间没有显著性差异。(2)体外小鼠心脏干细胞缺氧培养后,丹参注射液高剂量组Caspase-3的0D值与低剂量组和对照组相比显著下降,低剂量组、对照组之间没有显著性差异；丹参注射液高剂量组的CCK-8OD值与低剂量组和对照组相比显著增高,低剂量组和对照组之间没有显著性差异；丹参注射液高剂量和低剂量组的EdU阳性细胞数与对照组相比显著增高,高、低剂量组之间没有显著性差异。(3)丹参注射液喂养一周的小鼠,各组间的血细胞、肝肾功能无显著性差别；心脏组织中的Sca-1+心脏成体干细胞的数量,以丹参注射液高剂量最多,对照组最少,各组间有显著性差异；VEGF和IL-6的基因表达,均以丹参注射液高剂量组最高,对照组最低,各组间有显著性差异；丹参注射液高剂量组的Bad基因表达与低剂量组和对照组相比显著降低,低剂量组和对照组之间没有显著性差异。(4)对小鼠急性心肌梗死给予心脏干细胞移植,并喂养丹参注射液一周后,反映梗死周围区域新生毛细血管密度的CD31,以丹参注射液高剂量最多,对照组最少,各组间有显著性差异；检测细胞核增殖的Ki67染色丹参注射液高剂量组与对照组和低剂量组相比显著升高,对照组、低剂量组之间没有显著性差异:Masson检测反映的纤维化程度,丹参注射液高剂量组与对照组和低剂量组相比显著减轻,对照组、低剂量组之间没有显著性差异；TUNEL检测显示细胞凋亡,丹参注射液高剂量最少,对照组最多,各组间有显著性差异；磷酸化Akt蛋白表达水平上,以丹参注射液高剂量最多,对照组最少,各组间有显著性差异；总Akt水平上,丹参注射液高剂量和低剂量组与对照组相比显著升高,高、低剂量组之间没有显著性差异。结论：本研究通过体内、体外多层次实验证明丹参注射液可以通过Akt通路,有效提高心肌干细胞移植治疗心肌梗死的效率,促进组织血管新生,抑制细胞凋亡及组织纤维化,最终起到抑制心梗后心室重构,保护心功能的作用。
【作者】余洪松；
【导师】施广飞；
【作者基本信息】南京中医药大学，心血管内科，2013，博士
【关键词】丹参注射液；心脏干细胞；急性心肌梗死；

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