体外神经元网络4-AP痫性模型建立及能量代谢特征研究

【摘要】第一部分体外培养海马神经元网络痫性电活动模型的建立目的在体外培养原代大鼠胚胎海马神经元网络中,应用4-AP(50μM)分别进行致痫,通过与经典的低镁海马神经元痫样放电(SLEs)模型进行比较,建立4-AP的致痫神经网络模型。观察两种模型上神经元痫样放电的情况,为进一步探讨癫痫的能量代谢特征提供神经网络模型。方法取孕第18-19天的胚胎SD大鼠,分离海马神经元培养,在倒置相差显微镜下观察神经元的生长情况。采用Map2免疫荧光细胞染色鉴定神经元。培养至第8天采用全细胞膜片钳技术记录神经元在无镁培养液、4-AP处理不同后30main内的放电情况。结果神经元在种植24h后大部分贴壁,突起逐渐增多,在神经元间逐渐互相连接形成网络。培养第8～10d时细胞最为丰满。第8天的神经元经无镁培养液或4-AP处理后马上进行膜片钳检测,发现两组培养细胞均出现高频与高幅度痫样放电。在5-10min时间段达到高峰后逐渐下降,在每个时间段的放电频率及平均振幅均远远高于正常对照组(p<0.001)。而低镁及4-AP两种致痫模型的比较,平均振幅及放电频率在30min内差异无统计学意义。三组间的平均振幅及放电频率在各时间变化均有显著性差异。结论体外培养的胚胎海马神经元经4-AP处理后,可诱发出与低镁处理一样的高频与高幅度痫样放电,可视为一种体外痫性神经网络模型,作为体外研究痫性网络的工具。第二部分体外培养胚胎海马神经元网络的能量代谢特征及与痫性标志变化间的关系目的在体外培养的大鼠胚胎海马神经元细胞上,建立低镁及4-AP诱发痫性神经网络模型,检测30min内线粒体膜电位的变化,及细胞能量代谢标志分子ATP,ADP浓度,及网络致痫标志分子细胞外谷氨酸(Glu)及γ氨基丁酸(GABA)的含量。观察致痫神经网络线粒体膜电位水平、与能量代谢及网络致痫状态的关系。方法分别用低镁培养液及4-AP对培养的海马神经元处理Omin,5min,1Omin,15min,20min,25min,30min后,利用荧光分光光度法检测胚胎海马神经元网络线粒体膜电位,用比色法检测海马神经元内ATP、ADP含量,用ELISA法检测海马神经网络中Glu及GABA浓度。结果大鼠胚胎海马神经元网络诱导SLEs后呈,线粒体膜电位、ADP及谷氨酸短期内升高,之后逐渐降低；而ATP及GABA则呈现相反变化。表明神经元网络诱导SLEs的事件可视为神经元网络的高电位爆发过程,并伴有高代谢特征。但相对而言,痫性标志分子的变化较电位变化迟滞。结论大鼠胚胎海马神经元网络诱导SLEs后呈现规律性时相变化。在此过程中,细胞线粒体膜电位与痫性活动标志分子Glu呈现先升后降,而ATP与GABA呈现先降后升的变化趋势。这表明神经元网络诱导SLEs的事件可视为神经元网络高电位爆发过程,并伴有高代谢特征。但相对而言,痫性标志分子的变化较电位变化迟滞。图21幅,表16个,参考文献42篇
【作者】武妍；
【导师】宋治；
【作者基本信息】中南大学，神经病学，2014，博士
【关键词】细胞培养；癫痫样放电；胚胎海马神经元；线粒体膜电位；能量代谢；化学递质传递；

【参考文献】
[1]尹梦童.舒曼声乐套曲《克尔纳十二首诗歌》（作品35）的音乐学分析[D].山东大学,音乐学,2013,硕士.
[2]王飞.基于大规模PCR生产线性DNA及重组酶介导的线性DNA环化研究[D].湖北大学,微生物,2011,硕士.
[3]江伟.Shewanella algae和Arthrobacter nicotianae中丝氨酸羟甲基转移酶酶学性质的分析、定向进化及应用[D].华中农业大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[4]周鹏程.愈肝解毒汤对CCl_4所致大鼠急性肝损伤的保护作用[D].成都中医药大学,中西医结合临床,2012,硕士.
[5]袁树锋.ZHQS研发人员薪酬体系优化研究[D].西北大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[6]安雪梅.论我国证券公司治理结构的法律规制[D].湘潭大学,法律,2003,硕士.
[7]韩建华.网络媒体与现代政党的互动研究[D].华中师范大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2013,硕士.
[8]武亚丽.整合素β3及磷酸化AKT与大鼠腹主动脉瘤发生的相关性[D].华中科技大学,老年医学,2013,硕士.
[9]石凌龙.二氧化碳与炔酮羧化/环化串联反应研究[D].大连理工大学,应用化学,2013,硕士.
[10]赵洪香.家教服务合同的性质及其责任研究[D].天津商业大学,民商法学,2013,硕士.
[11]卿笑天.康定斯基与蒙德里安比较研究[D].杭州师范大学,美术学,2007,硕士.
[12]申慧.忻州方言语汇研究[D].山西师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[13]安娜.社会主义新牧区建设视野下的移民嘎查现状研究[D].内蒙古农业大学,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[14]王芳园.中国传统“贵生”之德及其现代意义[D].湖南工业大学,伦理学,2012,硕士.
[15]李先国.高校隐性文化建设探析[D].湖南师范大学,高等教育学,2004,硕士.
[16]杨忠义.基于OPC集成的设备运行状态监测和管理系统的研究[D].广东工业大学,机械电子工程,2004,硕士.
[17]李铁克.制造执行系统模型综述与分析[J].冶金自动化,2003,04:13-17.
[18]马竹梧,刘玉昆.无料钟高炉炉顶设备自动控制[J].冶金自动化,1981,04:17-24.
[19]陈凌霄.福建省水稻机械化育插秧技术推广现状与发展对策研究[D].福建农林大学,农业推广,2012,硕士.
[20]王桂梅.自然循环铅合金冷却反应堆主换热器的热工水力优化分析研究[D].中国科学技术大学,核能科学与工程,2014,硕士.
[21]杨旸.Rz医药公司人力资源招聘与培训管理研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[22]刘嘉佳,刘俊勇,田立峰,张力,都亮.基于分位数的CVaR方法在水电多风险分析中的应用[J].电力系统自动化,2007,21:20-25.
[23]李淑丽.中国钢铁工业比较竞争力研究[D].武汉科技大学,管理科学与工程,2003,硕士.
[24]马行.不同抽吸时段对颗粒脂肪细胞活性的影响[D].华中科技大学,整形外科,2013,硕士.
[25]白亚南.基于双层规划的港口供应链运营优化研究[D].燕山大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[26]朱光宇,陈旭斌,刘艳立.基于灰熵关联分析的流水车间多目标调度优化及算法实现[J].控制与决策,2014,01:135-140.
[27]霍利.网站可达性评测分析及工具开发[D].大连海事大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[28]王悦奇.从历史数据看美国女性研究生培养及就业状况[D].中国科学技术大学,科学技术哲学,2014,硕士.
[29]资俊.社会性别视角下中国女性体育发展研究[D].天津体育学院,体育人文社会学,2013,硕士.
[30]任春颖.吉林省西部盐碱化典型区域信息图谱模型研究[D].东北师范大学,2005.
[31]闫婷.金融从业者角色外行为的影响因素调查研究[D].宁夏大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[32]李志明.我国家族上市公司大股东侵害小股东权益研究[D].西北大学,会计学,2014,硕士.
[33]吴亚丽.铜川地税局征管数据统计分析系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2012,硕士.
[34]李聪.基于下垂控制的微电网运行仿真及小信号稳定性分析[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[35]丁强.民国山东农村高利贷研究[D].山东大学,中国近现代史,2013,硕士.
[36]罗凤燕.P2X7受体在葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性结肠炎发病中的作用及机制研究[D].南昌大学,消化内科,2014,硕士.
[37]汪宝龙.1960-2009年新疆极端气温和降水事件的变化研究[D].西北师范大学,自然地理学,2013,硕士.
[38]刘珺.结晶器反向振动控制模型及铸坯质量研究[D].燕山大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[39]梁成红.电力市场下考虑预想事故的最大输电能力研究[D].浙江大学,电力系统及其自动化,2004,硕士.
[40]刘静.在初中利用“非常规”物理实验体现“生本教育”的实践[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[41]杨锡锟.地震资料数字处理中的插值法[J].石油地球物理勘探,1978,05:34-39.
[42]吴小芳.废弃印刷线路板的气化及动力特性研究[D].华北电力大学,热能工程,2012,硕士.
[43]王强.南京市中学生体育运动习惯特征及影响因素主因子分析[D].南京体育学院,体育教育训练学,2012,硕士.
[44]申崇渝,徐征,赵谡玲,黄清雨.LED蓝光泄露安全性研究[J].光谱学与光谱分析,2014,02:316-321.
[45]余金清.基于微透镜阵列的计算成像研究[D].中国科学院研究生院（光电技术研究所）,光学工程,2014,硕士.
[46]李宜海.壳聚糖酶高产菌株的筛选、产酶条件优化与降解产物分析[D].广西大学,发酵工程,2004,硕士.
[47]杨兆波.基于WinCE平台多媒体终端软件设计[D].浙江大学,2007.
[48]于萌.基于生态足迹的新城区可持续发展研究[D].辽宁师范大学,自然地理学,2014,博士.
[49]蒋宏江.网络控制系统时延在线测量及其补偿方法研究[D].浙江工业大学,2006.
[50]黄钱欣.实用艺术品纳入著作权法保护的条件[D].厦门大学,法律,2014,硕士.