不同病理类型胶质瘤标本MiRNA表达谱分析及MiR-125a-5p在GBM中生物学功能的研究

【摘要】背景：高级别胶质瘤是成人最常见的原发性颅内恶性肿瘤。尽管近年来针对其手术、放疗及化疗等治疗方案均取得了长足的进展,患者的整体生存率依然较低,预后极差。世界卫生组织(WHO)依据组织病理学将其分为4级,其中胶质母细胞瘤(GBM)是其中最常见、恶性程度最高的一类。GBM患者预后极差,其中位生存期为14.6个月,中位无进展生存期为6.9个月,5年生存率为9.8%。MicroRNA(MiRNA)是一种不参与蛋白质编码的小分子RNA,通过与靶基因mRNA3’-UTR序列互补的结合,抑制其表达,实现对靶基因的负调控作用。最近的研究表明MiRNA的表达谱异常具有肿瘤特异性,并通过影响关键致癌／抑癌基因的表达参与肿瘤的发生、侵袭、抗凋亡等多种进程。有证据表明单个MiRNA可影响多个靶基因的表达。目前,已有多个针对胶质瘤与不同正常脑组织间MiRNA表达谱的差异的研究,均表现出了表达谱的差异,其在肿瘤进展中的作用机制尚不完全明了。因此,发现并对在胶质瘤中差异表达的MiRNA及其涉及的靶基因进行深入研究有助于揭示其在细胞迁移、侵袭细胞骨架重排及血管形成中的作用,最终实现在诊断、治疗中的应用。目的：针对不同病理类型胶质瘤样本MiRNA结果的筛查,筛选差异表达的MiRNA,用以发现新的胶质瘤相关MiRNA并结合其表达模式推测其在胶质瘤发生发展中的作用。深入研究MiR-125a-5p在GBM中的功能,并通过生物信息学的方式对其靶基因做出预测。方法：分析胶质瘤MiRNA数据库,筛选出与病理类型相关的MiRNA。收集各种病理类型胶质瘤标本,并用qRT-PCR方法验证其表达量。向GBM细胞株转染外源性MiR-125a-5pmimics,通过MTT法、划痕实验与transwell侵袭实验分别检测转染前后细胞增殖、迁移、侵袭能力有无改变；应用生物信息学方法,预测侵袭相关GMBMiRNAs可能的靶基因。结果：(1)在胶质瘤组织中发现42个在不同病理类型胶质瘤中特异性表达的MiRNA,其中特异性下调的有7个,特异性上调的有35个。(2)qRT-PCR实验结果与基因芯片结果相符,MiR-125a-5p在A/O等恶性程度较低的胶质瘤中无明显下调,在AA/AOA/AO/GBM等恶性程度较高的胶质瘤中下调明显。其表达与MGMT的表达有相关性。(3)与对照组相比,转染MiR-125a-5pmimics后96小时内细胞增殖力的变化无统计学意义(P>0.05)；(4)与阴性和空白对照组相比,转染MiR-125a-5pmimics的GBM8401细胞侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01);(5)MiR-125a-5p有多个靶基因,可能参与调节细胞生长、分化、凋亡、转录和信号转导等多种过程相关。结论：1.在胶质瘤组织中发现42个在不同病理类型胶质瘤中特异性表达的MiRNA,其中特异性下调的有7个,特异性上调的有35个。2.MiR-125a-5p在A/O等恶性程度较低的胶质瘤中无明显下调,在AA/AOA/AO/GBM等恶性程度较高的胶质瘤中下调明显。其表达与MGMT的表达有相关性。3.MiR-125a-5p的过表达可抑制GBM细胞的迁移及侵袭,对其生长增殖无明显影响。
【作者】陈晓宇；
【导师】袁贤瑞；李学军；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】胶质瘤；病理类型；MiRNA；MiR-125a-5p；

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