新辅助化疗后口腔颌面—头颈部鳞癌组织中Omi/HtrA2的表达及意义

【摘要】目的：头颈癌是世界范围内第六大常见癌症[1,2]，其中，鳞状细胞癌是最常见的类型。新辅助化疗是目前治疗头颈鳞癌的主要方法之一。新辅助化疗首先由Frei在1982年提出，1989年由Skarin就其临床效果做了初步报道，随后人们将其应用于头颈鳞癌的治疗，并一直探索如何使其提高头颈鳞癌的控制率及生存率。随着对肿瘤形成机制的深入研究，人们逐渐认识到肿瘤细胞对细胞凋亡的敏感性是决定化疗效果的关键因素，人们对Omi/HtrA2的发现、研究及深入，越来越多地研究指向Omi/HtrA2能够诱导细胞凋亡，并可以加强细胞对化疗药物的敏感性，同时证实通过对Omi/HtrA2的干预可能成功地阻止肿瘤的发展。本实验通过应用RT-PCR及免疫组化的方法检测经新辅助化疗药物——奈达铂干预前后头颈鳞癌组织中Omi/HtrA2的表达情况，从而为新辅助化疗的应用提供理论依据，有望为如何提高头颈鳞癌控制率及生存率的研究提供新思路。方法：收集我院2012年03月至2013年08月间头颈鳞癌患者标本45例。所有患者手术前均局部取检经病理证实，并应用奈达铂术前诱导化疗。标本均为术后立即取材，一式两份，一份固定于4%甲醛中，一份置-80℃低温冰箱中，编号保存备用。1RT-PCR检测奈达铂干预前后Omi/HtrA2基因在头颈鳞癌组织、鳞癌癌旁组织中的表达行组织研磨，应用Trizol提取总RNA，用琼脂糖凝胶电泳鉴定提取出的总RNA，用紫外分光光度计对其进行定量。按照逆转录试剂盒说明操作将提取的RNA合成cDNA第1链，而后扩增目的基因，以β-acton基因作为扩增产物的内参，用凝胶成像系统观察结果，行图像采集。2免疫组织化学检测奈达铂干预前后Omi/HtrA2在头颈鳞癌组织、鳞癌癌旁组织的表达将各组包埋组织的蜡块，脱蜡至水，按Maxvision2/HRP试剂盒操作说明操作，电镜下观察。3结果判断3.1半定量分析Omi/HtrA2基因的表达情况将目的产物和β-actin的条带行灰度扫描，并运用QuantityOne软件定量分析结果。3.2免疫组化分析Omi/HtrA2的表达情况Omi/HtrA2染色阳性表达为胞浆中找到棕黄色颗粒，用免疫组化半定量法评价结果，进行病理分级、分组，并记录。4统计学方法SPSS13.0统计软件包分析数据，采用重复测量的方差分析、χ2检验和SNK两两比较的方法进行检验，P<0.05计为差异有统计学意义。结果：1免疫组化检测Omi/HtrA2在各组中的表达情况。免疫组化检测用药前头颈鳞癌组、癌旁组织组中Omi/HtrA2阳性表达率分别为64.4%（29/45）、13.3%（6/45），两组间经卡方检验差异有统计学意义(P<0.05)；用药后头颈鳞癌组、癌旁组织组中Omi/HtrA2阳性表达率分别为80%（36/45）、42.2%（19/45），两组间经卡方检验差异有统计学意义(P<0.05)。2免疫组化检测Omi/HtrA2在不同病理分级中的表达情况。免疫组化检测用药前高分化鳞癌组、低分化鳞癌组、鳞癌癌旁组织组中Omi/HtrA2阳性表达率分别为66.7%（24/36）、55.6%(5/9)、13.3%(6/45)，SNK法两两比较表明，高分化口腔鳞癌组中的表达均高于低分化鳞癌组织、鳞癌癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。用药后高分化鳞癌组、低分化鳞癌组、鳞癌癌旁组织组中Omi/HtrA2阳性表达率分别为88.9%（32/36）、66.7%(6/9)、42.2%(19/45)，SNK法两两比较表明，高分化口腔鳞癌组中的表达均高于低分化鳞癌组织、鳞癌癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。3免疫组化检测奈达铂干预前后Omi/HtrA2在各组中的表达情况。高分化鳞癌组用药前后Omi/HtrA2的表达率分别为66.7%（24/36）、88.9%（32/36），低分化鳞癌组用药前后Omi/HtrA2的表达率分别为55.6%(5/9)、66.7%(6/9)，癌旁组织组用药前后Omi/HtrA2的表达率分别为13.3%(6/45)、42.2%(19/45)。Omi/HtrA2在三组用药前后组织内的表达率间差异有统计学意义(P<0.05)，组织间亦有统计学意义，SNK法两两比较表明，高分化鳞癌组中的表达均高于低分化鳞癌组、鳞癌癌旁组，差异有统计学意义。4PCR检测Omi/HtrA2在各组中的表达情况。用药前头颈鳞癌组、癌旁组织组中Omi/HtrA2基因的灰度值分别为0.7236±0.1353、0.3761+0.1526，两组间经卡方检验差异有统计学意义(P<0.05)；用药后头颈鳞癌组、癌旁组织组中Omi/HtrA2基因的灰度值分别为1.2032±0.1450、0.4350+0.1172，两组间经卡方检验差异有统计学意义(P<0.05)。所得结果与免疫组化结果相符。5PCR检测Omi/HtrA2在不同病理分级中的表达情况。用药前高分化鳞癌组、低分化鳞癌组、鳞癌癌旁组织组中Omi/HtrA2的灰度值依次递减，分别为0.8126+0.1249、0.4627+0.1123、0.3761+0.1526，Omi/HtrA2基因在三种组织中的表达量间差异有统计学意义(P<0.05)，SNK法两两比较表明，高分化口腔鳞癌组中的表达均高于低分化鳞癌组织、鳞癌癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)；用药后高分化鳞癌组、低分化鳞癌组、鳞癌癌旁组织组中Omi/HtrA2基因的灰度值分别为1.3553+0.1614、0.6718+0.1421、0.4350+0.1172，SNK法两两比较表明，高分化口腔鳞癌组中的表达均高于低分化鳞癌组织、鳞癌癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示，Omi/HtrA2在以上三组组织中的表达存在显著差异，呈递减趋势，与免疫组化结果相一致。6PCR检测奈达铂干预前后Omi/HtrA2在各组中的表达情况。经过奈达铂干预后，鳞癌组织中Omi/HtrA2的表达明显高于干预前Omi/HtrA2的表达情况，高分化鳞癌组用药前后的灰度值分别为0.8126+0.1249、1.3553+0.1614，低分化鳞癌组用药前后的灰度值分别为0.4627+0.1123、0.6718+0.1421，癌旁组织组用药前后的灰度值分别为0.3761+0.1526、0.4350+0.1172。Omi/HtrA2基因在三组用药前后组织内的表达量间差异有统计学意义(P<0.05)，组织间亦有统计学意义，SNK法两两比较表明，高分化鳞癌组中的表达均高于低分化鳞癌组、鳞癌癌旁组，差异有统计学意义，与免疫组化结果一致。结论：1奈达铂干预前后Omi/HtrA2在头颈鳞癌组与鳞癌癌旁组中的表达均存在显著差异，头颈鳞癌组中Omi/HtrA2的表达高于鳞癌癌旁组，2组间差异有统计学意义(P<0.05)。2Omi/HtrA2的表达与细胞分化程度有关，其在高分化鳞癌组的表达高于低分化组及癌旁组织组，差异有统计学意义(P<0.05)。3Omi/HtrA2在经奈达铂干预后的组织中表达高于经奈达铂干预前的表达(P<0.05)，推测奈达铂可能通过改变Omi/HtrA2的表达情况，促进细胞的凋亡，Omi/HtrA2的高表达可增强奈达铂的抗瘤效应。
【作者】耿乐乐；
【导师】陈彦平；
【作者基本信息】河北医科大学，口腔临床医学，2014，硕士
【关键词】细胞凋亡；Omi/HtrA2；新辅助化疗；鳞状细胞癌；

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