化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织TGF-β1/Smad信号传导通路影响的实验研究

【摘要】目的:采用高脂饲料饲养联合小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）腹腔注射建立糖尿病（diabetesmellitus,DM）大鼠模型，予化瘀通络中药进行干预，通过观察大鼠的一般情况、血生化指标、血流变、24小时尿蛋白定量、肾脏病理变化、肾组织中TGF-β1Smad信号传导通路的变化，来探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）大鼠肾脏的保护作用及其可能的作用机制。方法：清洁级健康雄性SD大鼠65只，体重100g±10g，适应性饲养1周。随机选取10只为正常对照组（CG）给予普通饲料饲养，剩余55只给予高脂饲料饲养。饲养4周后，从55只大鼠中随机选取10只为高脂组（HG），其余45只大鼠为造模组，造模大鼠禁食12小时以上按40mg/kg腹腔注射STZ，72小时后测血糖≥16.7mmol/L为DM造模成功，72小时内死亡4只，72小时后血糖不达标3只予以剔除，继予高脂饲料饲养。将成模大鼠随机分为模型组（MG）12只、化瘀通络中药组（ZG）13只、厄贝沙坦组（IG）13只。各组给予相应药物灌胃，每日一次，连续16周。16周末收集24小时尿液，测24小时尿量、24小时尿蛋白定量、饮水量、摄食量；大鼠禁食12小时以上，称量体重，麻醉大鼠，剖开腹腔，腹主动脉取血检测血液指标；留取肾组织用于western-blotting、Real-timePCR、免疫组化及光镜电镜的病理检测。结果：1各组大鼠一般情况的比较正常对照组及高脂组大鼠一般情况良好；造模各组大鼠均出现明显多饮、多食、多尿症状，其中以模型组表现最为突出。造模第8周末，M组、Z组、I组各有1只血糖不达标，予以剔除；实验期间M组死亡3只，I组死亡3只，Z组死亡2只。2各组大鼠体重及肾脏肥大指数的比较与正常对照组比较，模型组及两治疗组体重明显减轻，肾脏肥大指数明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，两治疗组体重明显增加，肾脏肥大指数明显下降（P＜0.05）。3各组大鼠摄食量、饮水量、尿量的比较与正常对照组比较，造模各组摄食量、饮水量、尿量均明显增多（P＜0.05），高脂组饮水量、尿量明显减少（P＜0.05）；与模型组比较，两治疗组尿量明显减少（P＜0.05），中药组比模型组饮水量明显减少（P＜0.05），厄贝沙坦组与模型组饮水量无明显差异（P＞0.05）。424小时尿蛋白定量（24hUTP）的比较与正常对照组比较，造模各组24hUTP明显增多（P＜0.05）；与模型组比较，两治疗组24hUTP均明显减少（P＜0.05）；中药组与厄贝沙坦组比较24hUTP明显减少（P＜0.05）。5各组大鼠血生化指标的比较5.1各组大鼠空腹血糖（FBG）的比较与正常对照组比较，高脂组与造模各组血糖均明显升高（P＜0.05）；与高脂组比较，造模各组血糖明显升高（P＜0.05）；造模各组之间血糖无明显差异（P＞0.05）。5.2各组大鼠胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）的比较与正常对照组比较，模型组及两治疗组TC、TG、LDL水平均明显升高（P＜0.05），高脂组比正常组TC、LDL明显升高（P＜0.05）；与高脂组比较模型组TC、TG、LDL均明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，两治疗组TG及LDL明显下降（P＜0.05），厄贝沙坦组TC明显下降（P＜0.05），中药组与模型组比较TC无明显差异（P＞0.05）；中药组与厄贝沙坦组比较，TC、LDL明显升高（P＜0.05），TG明显下降（P＜0.05）。5.3各组大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的比较与模型组比较，其余各组Scr水平均明显低于模型组（P＜0.05）；与正常组比较，模型组及两治疗组BUN明显升高（P＜0.05），中药组比模型组BUN明显下降（P＜0.05），厄贝沙坦组与模型组BUN无明显差异（P＞0.05）。6各组大鼠血流变的比较与正常对照组比较，模型组及两治疗组血浆粘度及全血粘度明显升高（P＜0.05）；与高脂组比较，模型组血浆粘度及全血粘度均明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，两治疗组血浆粘度及全血粘度明显下降（P＜0.05）；两治疗组之间比较无明显差异（P＞0.05）。7肾脏病理形态学观察7.1光镜观察正常对照组大鼠肾脏结构清晰正常；模型组大鼠肾小球肥大，肾小囊呈裂隙状，甚至出现球囊粘连，基底膜增厚，系膜基质增生；两治疗组病理改变较模型组明显减轻。7.2电镜观察正常对照组大鼠肾脏结构清晰正常；模型组大鼠肾小球毛细血管基底膜增厚，系膜基质增多，足细胞足突部分融合；与模型组相比，两治疗组病理改变明显减轻。8免疫组化检测肾组织TGF-β1的表达结果显示，TGF-β1主要表达于肾小球及肾小管上皮细胞。与正常组比较，模型组表达明显增多(P＜0.05)；与模型组比较，中药组及厄贝沙坦组表达明显减少(P＜0.05)。9Real-timePCR检测肾组织TGF-β1、Smad2、Smad7mRNA的表达与正常组比较，造模各组TGF-β1mRNA的表达明显增加(P＜0.05)，模型组及厄贝沙坦组Smad2mRNA的表达明显增加(P＜0.05)；与模型组比较，两治疗组TGF-β1、Smad2mRNA的表达明显减少(P＜0.05)。高脂组及造模各组与正常组相比Smad7mRNA的表达明显减少(P＜0.05)；两治疗组与模型组相比Smad7mRNA的表达明显增多(P＜0.05)。10Western-blotting检测肾组织TGF-β1的表达与正常组比较，模型组TGF-β1蛋白的表达显著增加(P＜0.05)；与模型组比较，中药组及厄贝沙坦组TGF-β1蛋白的表达明显减少(P＜0.05)。结论：1化瘀通络中药可以改善DN大鼠一般情况、降低24小时尿蛋白总量、改善脂质代谢紊乱、降低血肌酐及尿素氮水平、改善血液高黏状态、减轻肾脏病理改变，对DN大鼠肾脏具有保护作用。2化瘀通络中药可以下调TGF-β1、Smad2表达水平，上调Smad7表达水平，由此推测化瘀通络中药对DN大鼠肾脏的保护作用可能与该中药干预肾组织中TGF-β1/Smad信号传导通路有关。
【作者】白璐；
【导师】陈志强；
【作者基本信息】河北医科大学，中西医结合临床，2014，硕士
【关键词】化瘀通络中药；厄贝沙坦；糖尿病肾病；TGF-β1；Smad2；Smad7；

【参考文献】
[1]李高洁.厌氧膨胀颗粒污泥床（EGSB）反应器水力混合特性研究[D].合肥工业大学,环境工程,2004,硕士.
[2]杜佳.倒班、夜光暴露与女性乳腺癌关系的病例对照研究[D].华中科技大学,社会医学与卫生事业管理,2013,硕士.
[3]宋坤钰.风险收益关系和马太效应研究[D].复旦大学,理论物理,2012,硕士.
[4]廖玉海.无机阴离子P_4O_(13)~(6-)和SO_4~(2-)对零价铁降解污染物活性的影响[D].华中师范大学,物理化学,2014,硕士.
[5]杨潇潇.“组合汉语”视野下的汉语作为第二语言口语教学设计研究[D].安徽大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[6]罗维炳.检波器假频理论分析和测试实验方法[J].石油地球物理勘探,1983,06:544-553.
[7]张振富.鲜切芋艿贮藏保鲜技术研究[D].烟台大学,食品加工与安全,2014,硕士.
[8]其布日.社会主义新牧区建设研究[D].内蒙古农业大学,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[9]郑洁.昆仙胶囊治疗慢性肾小球疾病的安全性研究[D].广州中医药大学,中医学（专业学位）,2013,硕士.
[10]孙海静.相对业绩评价对上市公司高管薪酬影响的研究[D].西安工程大学,会计学,2012,硕士.
[11]陆晓光.航天计算机机箱结构动态性能分析及优化设计[D].山东大学,材料加工工程,2013,硕士.
[12]张舒辰.实物期权法在环保工程类企业价值评估中的运用[D].北京交通大学,2014.
[13]卜亚军.UML和设计模式在企业动态建模中的研究与应用[D].大连理工大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[14]蔡文琳.个性化电影推荐管理系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[15]祝诗淇.论我国独立董事的职能履行之完善[D].厦门大学,法律,2014,硕士.
[16]记者黄群.间隔三层参股“石墨烯”力合股份股价被炒高[N].上海证券报,2011-06-23F08.
[17]祝华峰.“真/假”的对称与不对称分析[D].广西师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[18]余靖.JT大学校办企业财务管理问题与对策[D].安徽大学,工商管理,2012,硕士.
[19]费佳.面向企业危机预警的竞争情报有效管理模式研究[D].南京农业大学,情报学,2011,硕士.
[20]李玉姣.新的无规则模糊逻辑系统构造及控制应用[D].广东工业大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[21]吴媚,李维新,符力耘.基于测井曲线分频分析的地震反演[J].石油地球物理勘探,2007,S1:65-71+140+8.
[22]王峥.灵活就业人员养老保险问题研究[D].山西财经大学,社会保障,2014,硕士.
[23]高哲,廖晓钟.区间分数阶系统的鲁棒稳定性判别准则:0<α<1情况[J].自动化学报,2012,02:175-182. [24]赵敬.姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响[D].重庆医科大学,病理及病理生理学,2004,硕士. [25]李海菊.氧化石墨烯与核酸染料相互作用及应用[D].大连理工大学,2013. [26]李凤坤.住宅小区宽带接入技术应用浅析[J].中国住宅设施.2003(05) [27]曾亮,周春玉,张东.相变材料导热性能强化的研究进展[J].材料科学与工程学报,2010,06:946-950+954. [28]孙莲.论声乐演唱中的二度创作[D].首都师范大学,音乐学,2004,硕士. [29]王昕.公正评论抗辩适用研究[D].杭州师范大学,民商法,2013,硕士. [30]王世娟.东滩煤矿地垒断层型矿震发生机制及监测分析[D].辽宁工程技术大学,工程力学,2012,硕士. [31]韩笑.李娜2011年法国网球公开赛技战术特点分析[D].东北师范大学,体育教育训练学,2012,硕士. [32]张春辉,李健康.网络资源开发的若干关键技术与途径研究进展[J].图书馆论坛,2004,05:167-169. [33]袁晨炜.基于工业旅游导向的工业建筑设计研究[D].湖南大学,建筑学,2012,硕士. [34]穆福强.饲养动物侵权责任研究[D].黑龙江大学,民商法学,2012,硕士. [35]吕建国.循环图C（n；1，k）的交叉数[D].大连理工大学,计算机应用技术,2004,硕士. [36]石晓飞.大型锻造操作机的机构综合与分析[D].燕山大学,机械电子工程,2014,硕士. [37]陈佳.直拉式冷轧实验轧机工艺控制过程研究[D].东北大学,材料加工工程,2010,硕士. [38]赵磊.AIS系统中SOTDMA与CSTDMA算法的优化与实现[D].大连海事大学,信息与通信工程,2013,硕士. [39]王一龙.温州饮食文化研究[D].浙江海洋学院,农村与区域发展（专业学位）,2014,硕士. [40]李英娟.当前企业职业生涯管理实践状况及对策研究[D].首都经济贸易大学,劳动经济学,2004,硕士. [41]高柳宾.DC元数据在数字图书馆中的应用[D].华东师范大学,情报学,2001,硕士. [42]于文鹏,刘东,余南华,廖怀庆.主动配电网的局部自治区域供蓄能力指标及其应用[J].电力系统自动化,2014,15:44-50. [43]李晖.全球FTTH的发展及前景预测[J].世界电信.2006(09) [44]周劲梅.信息技术和现代企业管理创新[D].广西师范大学,国民经济学,2003,硕士. [45]宋卫东,毛宇光,张玲东.数据流挖掘技术研究[J].微机发展,2005,08:139-141+144. [46]王晓瑜.余热锅炉流动与传热数值模拟及仿真平台开发[D].西南交通大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2013,硕士. [47]朱晓航.磁性核壳纳米催化剂的制备及其在有机反应中的应用[D].兰州大学,物理化学,2014,硕士. [48]王书强.自密实高性能混凝土在建筑结构方面的研究与应用[D].西安建筑科技大学,建筑与土木工程,2004,硕士. [49]李盈莹.大学生采纳移动网络购物的影响因素研究[D].吉林大学,企业管理,2014,硕士. [50]王玉龙.劣质数据上真值发现关键技术研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.