补肾活血固齿方对成骨细胞增殖、分化，BMP-2表达及TRPV5/TRPV6通道影响的实验研究

【摘要】牙周炎是以牙周袋形成、袋壁炎症、牙槽骨吸收、牙齿松动为主要特征的口腔科常见病，多发病，牙周炎不仅导致成年人牙齿过早丧失，并可导致和诱发各种全身性疾病，严重影响健康。根治牙周炎的关键是通过成骨细胞和破骨细胞的调节作用阻止牙槽骨吸收或促进牙槽骨的再生。我科应用补肾活血固齿方治疗牙周炎，疗效显著，但其作用机理不明了。骨形成蛋白(BoneMorphogeneticProteins,BMPs)是骨修复中最主要的诱导因子，有20多种亚型，其中BMP2的诱导成骨能力较为明显，BMP2通过Smads和p38MAPK信号通路促进成骨细胞表达多种特异性基因如Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP）、骨钙素，产生相应蛋白分泌到细胞外基质中，使细胞外基质矿化，进而完成成骨。钙离子通道TRPV5/TRPV6通过调节成骨细胞内钙离子含量的变化,激活p38MAPK通路，促进成骨细胞分化过程。ALP是成骨细胞早期分化的标志酶，它的活性可以代表成骨细胞的分化活性和成骨细胞的分化水平。目的：补肾活血固齿方灌胃大鼠一周，取大鼠含药血清，作用小鼠颅顶前成骨细胞（MC3T3-E1细胞），观察药物对MC3T3-E1细胞形态、增殖、ALP活性，BMP2表达及TRPV5/TRPV6通道的影响，探讨补肾活血固齿方成骨的作用机制。方法：1MC3T3-E1细胞的培养。2补肾活血固齿方按体表面积折算等效剂量灌胃大鼠，制备含药血清；等量生理盐水灌胃大鼠，制备无药血清作为对照组，10%胎牛血清为空白对照组。3用10%含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞48h、72h，倒置显微镜下观察补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态的影响。4MTT法检测补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖的影响。10%胎牛血清组、无药血清组、含药血清组（分别含有5%、10%、15%、20%含药血清），分别培养MC3T3-E1细胞，MTT法检测12h、24h、36h、48h、60h、72h补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖的影响。5检测补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响。10%含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞，检测24h、48h、72h时MC3T3-E1细胞中ALP的含量。6RT-PCR法检测补肾活血固齿方MC3T3-E1细胞BMP-2及TRPV5/TRPV6mRNA表达影响。10%含药血清、无药血清培养MC3T3-E1细胞，RT-PCR法检测24h、48h、72h的BMP2、TRPV5/TRPV6mRNA的表达。结果：1补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态的影响结果显示补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态无明显影响2补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖的影响结果显示含药血清对细胞的增殖无明显影响（P＞0.05）3补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞中ALP活性的影响结果显示MC3T3-E1细胞经含药血清、无药血清、胎牛血清组作用后，含药血清的ALP活性较胎牛血清、无药血清增加，有统计学差异（P＜0.05），并且药物作用效果显示时间依赖效应。4补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞BMP2mRNA表达的影响。结果显示含药血清组的BMP2mRNA表达量较无药血清组增加，有统计学差异（P＜0.05），并且药物作用效果显示时间依赖效应。5补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞TRPV5/TRPV6mRNA的表达的影响结果显示含药血清组的TRPV6mRNA表达量较无药血清增加，有统计学差异（P＜0.05），并且药物作用效果显示出时间依赖效应。含药血清和无药血清中MC3T3-E1细胞均未检测到TRPV5mRNA的表达。结论：补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态无影响；对MC3T3-E1细胞增殖活性无明显影响；可时间依赖性增加MC3T3-E1细胞的ALP活性；可提高MC3T3-E1细胞BMP2，TRPV6mRNA表达水平。补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖无明显影响；补肾活血固齿方通过上调BMP-2mRNA的表达，诱导成骨细胞分化；通过钙离子通道TRPV6促进成骨细胞分化。
【作者】穆春晖；
【导师】高毅；
【作者基本信息】河北医科大学，口腔临床医学，2014，硕士
【关键词】补肾活血固齿方；MC3T3-E1细胞；TRPV5/TRPV6通道；碱性磷酸酶（ALP）；增殖；分化；骨形态发生蛋白2（BMP2）；

【参考文献】
[1]罗晨.水面舰船轴系—尾部结构耦合振动及水声特性研究[D].中国舰船研究院,船舶与海洋结构物设计制造,2014,硕士.
[2]林海彬.滚轮磨损试验机环境箱的设计及应用研究[D].南京航空航天大学,载运工具运用工程,2012,硕士.
[3]杨苗强.热作模具激光仿生耦合修复及强化研究[D].吉林大学,钢铁冶金,2014,硕士.
[4]邱雯.企业人力资源管理模式研究[D].厦门大学,2002.
[5]孙伟.考虑变压器分接头动作次数限制的综合无功优化[D].天津大学,电力系统及其自动化,2004,硕士.
[6]贾丽萍.小班化环境下初中化学合作学习实践研究[D].辽宁师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[7]钟敏富.ZigBee测控节点及其路由研发[D].广东工业大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[8]高正九.基于HDFS的云存储系统的设计与实现[D].中国科学技术大学,模式识别与智能系统,2014,硕士.
[9]周晓菊.苦参碱对阿霉素损伤足细胞的干预作用及mTOR的表达[D].兰州大学,儿科学,2013,硕士.
[10]马玉芳.基于Internet的大规模定制生产计划系统的研究[D].武汉理工大学,2003.
[11]陈银银,李育敏,高海燕,曹勇,计建炳.空化设备的研究进展[J].化工时刊,2013,11:27-31.
[12]周鹏.基于石英晶体等径向力结构压力传感器研究[D].黑龙江大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[13]沈小芳.芪黄勇安汤对断肢（指）再植和组织移植术后造血功能及免疫功能影响的临床研究[D].苏州大学,骨外科,2013,硕士.
[14]陈晓晨.CMIP5全球气候模式对中国降水模拟能力的评估[D].中国气象科学研究院,气象学,2014,硕士.
[15]曹丽丽.多模态视角下的大学英语视听说教学实验研究[D].吉林大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[16]杜波.基于小波包技术的小电流接地系统故障选线研究及其DSP实现[D].中国农业大学,电力系统及其自动化,2004,硕士.
[17]邢海英.利用小波算法建立棉纤维表面分形数学模型分析研究棉纤维的含糖量[D].天津工业大学,纺织工程,2003,硕士.
[18]吴立刚,王常虹,高会军.不确定线性2-D离散系统的鲁棒滑模控制[J].控制与决策,2007,02:148-154+159.
[19]王永青,赵满全,郝建国.饲草机械化技术与装备如何适应包头奶业发展的研究[J].中国农机化.2004(03)
[20]凌海军.对居住区均好性规划设计方法论的探讨[D].浙江大学,2005.
[21]张兴会,陈增强,袁著祉.基于内模结构的GPC鲁棒性改进与分析[J].控制与决策,2004,05:542-545.
[22]张爽.现阶段正确处理人民内部矛盾问题研究[D].沈阳师范大学,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[23]唐容.支持非数值型测试用例自动生成的抽象内存建模技术研究[D].北京邮电大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[24]许琳瑶.从“振兴中华”读书活动到全民阅读推广工作：1982-2012[D].南京大学,图书馆学,2013,硕士.
[25]袁梦觉.基于ZigBee技术的智能家居红外转发器的设计与实现[D].长安大学,交通信息工程及控制,2013,硕士.
[26]赵愉.仿射投影算法中步长和阶数的研究[D].复旦大学,电路与系统,2012,硕士.
[27]赵洪杰.75例成人支原体肺炎中医证候研究[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[28]陈雅洁.火针治疗痿证的临床进展[D].北京中医药大学,针灸推拿学,2014,硕士.
[29]陈瑜.地方政府在产业集群发展中角色定位与职能研究[D].华侨大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[30]李宁.叙事学视角下的《中国好声音2》[D].厦门大学,新闻学,2014,硕士.
[31]杜娜.文字里流淌的心声[D].首都师范大学,教育学原理,2014,硕士.
[32]唐逊.基于节点流量预测机制的Ad Hoc网络路由协议的研究[D].东北大学,通信与信息系统,2011,硕士.
[33]陈相君.廉租房法律制度研究[D].首都经济贸易大学,经济法,2013,硕士.
[34]李峣.北京市大气中颗粒相和气相多环芳烃的分布[D].北京工商大学,环境工程,2013,硕士.
[35]杨红,罗飞,李艳,许玉格.非线性离散系统的相关观测融合时变Kalman滤波[J].控制与决策,2010,05:669-675.
[36]王钦.技术范式、学习机制与集群创新能力——来自浙江玉环水暖阀门产业集群的证据[J].中国工业经济,2011,10:141-150.
[37]张滨.现代艺术与传统的剥离[D].大连理工大学,建筑设计及其理论,2004,硕士.
[38]谢启明.民族地区科技型中小企业融资政策创新研究[D].中南民族大学,行政管理,2013,硕士.
[39]王卡,杨毅,沈济黄,张景礴.绿色形态研究——宁波工程学院新校区行政楼建筑节能设计实践[J].华中建筑.2005(06)
[40]刘梦伟.随机分析在金融工程中的应用[D].中国科学技术大学,概率论与数理统计,2014,硕士.
[41]冯旭东.哈拉哈塘碳酸盐岩缝洞型油藏酸压效果评价研究[D].成都理工大学,油气田开发工程,2013,硕士.
[42]贾斐.面向服务型制造的滚齿机备件资源配置研究[D].重庆大学,工业工程,2014,硕士.
[43]周学文.浅谈本地网中汇接话务量的取定[J].邮电设计技术.1998(02)
[44]杨琳琳.封闭室内自然对流数值研究[D].辽宁工程技术大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2012,硕士.
[45]齐玉.新媒体形势下CCTV-10分众化传播策略研究[D].河北大学,新闻与传播,2014,硕士.
[46]郭玲.保洁：农民的认知与行为历程[D].华中师范大学,农业推广,2014,硕士.
[47]张芳.传承沈阳文化符号的城市品牌塑造研究[D].沈阳航空航天大学,设计艺术学,2013,硕士.
[48]虞抒沁.基于统计学习的行人检测研究[D].杭州电子科技大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[49]李盛汉,彭章池,郑毅.重磁力及土壤地球化学测量在柴达木盆地东部地区的应用效果[J].石油地球物理勘探,1994,S2:200-208+238.
[50]林家琦.对外汉语教学中的成语教学问题[D].黑龙江大学,汉语国际教育,2012,硕士.