妊娠期高血压疾病中基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1、转化生长因子-β1表达关系的研究

【摘要】目的：妊娠期高血压疾病是造成孕期女性和围生儿患病和死亡的主要原因之一，严重影响女性妊娠期各个系统的生理功能及围生儿的健康发育。经过国内外科研工作者们不懈的努力，有关胎盘或滋养细胞缺血、免疫、遗传及氧化应激等几个方面的学说被认为是导致该病的主要原因，其中人们一般认为胎盘或滋养细胞缺血在发病机制中占据关键地位。妊娠是一个极为复杂多变的生理过程，在这个过程中多种原因造成滋养细胞不能充分完成浸润过程，子宫螺旋动脉生理性重铸过程不能充分地进行，胎盘不能深入植入引起胎盘缺血。基质金属蛋白酶-9（martixmetalloproteinases-9,MMP-9）可快速有效的降解细胞外基质（extracellularmatrix,ECM），是滋养细胞充分浸润过程中的重要角色，参与了子宫螺旋动脉重建和胎盘形成。基质金属蛋白酶组织抑制物-1（tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1）是MMP-9的特异性抑制物，主要作用是可以有效的对MMP-9的含量和活性进行抑制调节，滋养细胞的侵袭行为正常进行有赖于两者含量的平衡表达。发现于1981年的转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)是一种具有多样性功能的、由多细胞合成分泌的生长因子，在细胞生长分化、细胞外基质生成、炎症反应、机体免疫、间质纤维化和肿瘤血管形成等各方面具有广泛的调节作用。本文的实验目的是通过研究MMP-9、TIMP-1和TGF-β1在正常对照组、子痫前期轻度组、子痫前期重度组胎盘组织中的表达变化情况，认真探讨三者相互联系和彼此之间的关系，仔细分析它们对滋养细胞浸润过程的影响，详细阐述它们在妊娠期高血压疾病中所发挥的作用，为该病的更深入研究和有效的防范治疗提供实验依据。方法：1在2011年12月-2013年6月期间，分别选择正常对照组、子痫前期轻度和重度患者各30例（三组研究对象均除外其他疾病）。所有组织全部在胎盘娩出后的30分钟之内采取，采取部位选择母体面中央、脐带附着处，采集标本体积约lcm×lcm×lcm，采集时注意无菌操作并避开梗死、出血及钙化的部位，放置于10%的中性福尔马林中浸泡24-48小时，包埋在石蜡中，4μm连续切片。2应用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）SP法（链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连接法）检测需要研究的标本中MMP-9、TIMP-1和TGF-β1的表达强度，根据观察到的阳性细胞百分比和细胞内染色强度分级。3应用Excel来处理所有的数据，并利用SPSS13.0进行统计分析，使用单因素方差分析对计量资料进行分析，计数资料采用Kruskal-wallisH检验、Wilcoxon秩和检验及Fisher’s精确概率计算，应用Spearman等级相关分析方法对两个变量之间的相关性进行统计分析。采用α=0.05作为检验的标准，当P≤0.05时，代表差异有统计学意义；当P≤0.01时，表示差异的统计学意义非常显著。结果：1临床一般资料比较：本实验研究的三组孕妇中，其平均年龄和平均分娩孕周的差异均没有统计学意义（P>0.05）。2MMP-9的表达2.1MMP-9集中分布在合体滋养细胞、蜕膜细胞、绒毛的间质细胞和血管内皮细胞中，主要是在这些细胞的细胞膜和细胞质中表达。MMP-9表达在子痫前期轻度组和重度组中的阳性率依次是70.00%、36.67%，与正常对照组的96.67%阳性率相比，均表现显著差异(P=0.014<0.05,P=0.001<0.05)。2.2MMP-9在对照组、轻度组和重度组中都可以表达，但表达的情况在三组中不同，三组表达率相比差异在统计学上具有显著性意义（P=0.002<0.05）。更深入的对三者进行两两比较，发现：与正常妊娠组相比，子痫前期轻度组、重度组中MMP-9的含量均减少明显（P=0.013<0.05,P=0.008<0.05），并且伴随疾病的不断进展，MMP-9的表达呈降低趋势：在子痫前期重度组中的表达程度显著低于轻度组（P=0.015<0.05）。3TIMP-1的表达3.1在所观察的组织中TIMP-1和MMP-9的分布、阳性颗粒定位基本相同。TIMP-1表达在子痫前期轻度组和重度组中的阳性率依次是73.33%、90.00%，与正常对照组的40.00%阳性率相比，均表现显著差异(P=0.011<0.05,P=0.005<0.05)。3.2TIMP-1在对照组、轻度组和重度组中都可以表达，但表达的情况在三组中不同，三组表达率相比差异在统计学上具有显著性意义（P=0.004<0.05）。更深入的对三者进行两两比较，发现：与正常妊娠组相比，子痫前期轻度组、重度组中TIMP-1的含量均增加明显（P=0.024<0.05,P=0.018<0.05），并且伴随疾病的不断进展，TIMP-1的表达呈不断增加趋势：在子痫前期重度组中的表达程度显著高于轻度组（P=0.027<0.05）。4TGF-β1的表达4.1所观察的绒毛的间质细胞、蜕膜细胞、滋养细胞的细胞膜和细胞质中都出现了TGF-β1的表达，还可以在血管的内皮细胞中观察到数目略少的表达。TGF-β1表达在子痫前期轻度组和重度组中的阳性率依次是76.67%、93.33%，与正常对照组的33.33%阳性率相比，均表现显著差异(P=0.010<0.05,P=0.002<0.05)。4.2TGF-β1在对照组、轻度组和重度组中都可以表达，但表达的情况在三组中不同，三组表达率相比差异在统计学上具有显著性意义（P=0.001<0.05）。更深入的对三者进行两两比较，发现：与正常妊娠组相比，子痫前期轻度组、重度组中TGF-β1的含量均增加明显（P=0.022<0.05,P=0.014<0.05），并且伴随疾病的不断进展，TGF-β1的表达呈不断增加趋势：在子痫前期重度组中的表达程度显著高于轻度组（P=0.036<0.05）。5MMP-9和TIMP-1呈负相关，MMP-9和TGF-β1呈负相关，TIMP-1和TGF-β1呈正相关。结论：1MMP-9、TIMP-1和TGF-β1在对照组、子痫前期轻度组和重度组的胎盘组织中均有表达，并且表达强度在三组之间存在显著性差异。2MMP-9与TIMP-1、MMP-9与TGF-β1在胎盘组织中的表达呈负相关，TIMP-1与TGF-β1呈正相关关系。在正常对照组中，MMP-9高表达，TIMP-1和TGF-β1低表达；子痫前期轻度组和重度组，MMP-9的表达随病情发展而降低，TIMP-1和TGF-β1则高表达。3体内TGF-β1的含量明显增高，可以上调TIMP-1的表达，降低MMP-9的表达并使其活性降低，使ECM的降解减少、合成增加，母体内滋养细胞的生物活性受到病理性抑制，对子宫肌层的浸润不完全，血管生理性重塑障碍、胎盘浅着床，最终导致妊娠期高血压疾病，并在疾病发展中不断作用，使病情继续加重。因此在分子生物学及药理学上对其进一步深入的研发，有望明确该病的病因和发病机制，早日实现有效的预防和治疗。
【作者】邢晓媛；
【导师】尹洁；
【作者基本信息】河北医科大学，妇产科学，2014，硕士
【关键词】基质金属蛋白酶-9；基质金属蛋白酶组织抑制物-1；转化生长因子-β1；妊娠期高血压疾病；免疫组织化学；

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