IL-17D基因对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响

【摘要】目的：将转染IL-17D基因的人上皮性卵巢癌细胞株种植于裸鼠皮下，观测IL-17D对裸鼠皮下移植瘤生长的影响；通过检测裸鼠体内MHCI类链相关蛋白A(MHCclassI-relatedproteinA，MICA)分子表达的变化，初步探讨IL-17D促瘤作用的相关因素，为研究上皮性卵巢癌的免疫逃逸、耐药及诊疗提供新的线索。方法：1体外培养转染IL-17D的人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞（SKOV3/17D）、OVCAR3细胞（OVCAR3/17D），各自对应的空质粒转染的SKOV3/neo细胞、OVCAR3/neo细胞（Fig.1），37℃，5%CO2的恒温培养箱中连续传代培养并冻存。2建立32只人上皮性卵巢癌细胞株裸鼠皮下移植瘤膜型，随机分成4组：（1）SKOV3/17D组：将转染IL-17D的SKOV3细胞株种植于裸鼠皮下，（2）SKOV3/neo组：将转染空质粒的SKOV3细胞株等量种植于裸鼠皮下，（3）OVCAR3/17D组：将转染IL-17D的OVCAR3细胞株种植于裸鼠皮下，（4）OVCAR3/neo组：将转染空质粒的OVCAR3细胞株等量种植于裸鼠皮下。3观察裸鼠的成瘤率、肿瘤生长情况，用游标卡尺定期测量裸鼠皮下移植瘤的大小，绘制肿瘤生长曲线。4采用qRT-PCR法检测各组裸鼠皮下移植瘤组织中IL-17D在RNA水平的表达量；ELISA法检测各组荷瘤裸鼠血清中MICA的可溶性形式（solubleMICA，sMICA）的表达水平；流式细胞术（FCM）检测肿瘤组织中MICA的膜性形式（membraneMICA，mMICA）表达水平。应用SPSS13.0统计分析软件分析实验数据，以P<0.01为差异有显著统计学意义。结果：1皮下接种4种细胞后，裸鼠成瘤率均为100%。接种SKOV3/17D细胞的裸鼠皮下移植瘤生长速度明显快于SKOV3/neo组，OVCAR3/17D组明显快于OVCAR3/neo组（P<0.01）。2各组裸鼠皮下移植瘤组织中均有IL-17D基因的表达，SKOV3/17D组IL-17D的表达明显高于SKOV3/neo组，OVCAR3/17D组高于OVCAR3/neo组（P<0.01）。3流式细胞术显示，裸鼠皮下移植瘤组织中mMICA在各组中均表达，其含量以平均荧光强度(MeanFluorescenceIntensity,MFI)表示（X±s）：3.1SKOV3/17D组中MICA蛋白的MFI值为203.02±3.03，SKOV3/neo组为285.90±1.76，可见SKOV3/17D组MICA蛋白的表达量明显低于SKOV3/neo组，差别具有统计学意义(P<0.01)。3.2OVCAR3/17D组中MICA蛋白的MFI值为177.05±3.69，OVCAR3/neo组为265.12±2.29，可见OVCAR3/17D组MICA蛋白的表达量明显低于OVCAR3/neo组，差别具有统计学意义(P<0.01)。4酶联免疫吸附试验（ELISA）测得数据用均数士标准差(X±s)表示：4.1sMICA在SKOV3/17D和SKOV3/neo组裸鼠血清中的浓度分别为(28.85±0.36)ng/ml和(23.58±0.50)ng/ml，sMICA在SKOV3/17D组裸鼠血清中浓度高于SKOV3/neo组（P<0.01）。4.2sMICA在OVCAR3/17D和OVCAR3/neo组裸鼠血清中的浓度分别为(34.05±0.42)ng/ml和(27.24±0.51)ng/ml,sMICA在OVCAR3/17D组裸鼠血清中浓度高于OVCAR3/neo组（P<0.01）。结论：IL-17D基因明显促进人上皮性卵巢癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，这种促瘤机制与NKG2D-MICA免疫杀伤通路有关，IL-17D可下调肿瘤细胞表面的活化性配体MICA的表达，增加sMICA释放，进而降低NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，使肿瘤细胞逃脱免疫监视，获得免疫逃逸，此为IL-17D在促进上皮性卵巢癌进展中扮演的重要角色。
【作者】张江利；
【导师】张辉；
【作者基本信息】河北医科大学，妇产科学，2014，硕士
【关键词】卵巢癌；IL-17D；mMICA；sMICA；促瘤作用；免疫逃逸；

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