RASGRF1在结肠癌中表达下调及其机制和功能的研究

RASGRF1在结肠癌中表达下调及其机制和功能的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-06-30 分类:期刊论文 喜欢:3828
师大云端图书馆

【摘要】第一章结肠癌组织中RASGRF1的表达和甲基化检测目的探讨RASGRF1在结肠癌组织中的表达和甲基化情况及其与临床病理的关系。方法采用免疫组织化学和甲基化特异性PCR(MSP)检测结肠癌组织及其对应的远离结肠癌的正常组织RASGRF1蛋白表达情况和甲基化状态,分析RASGRF1蛋白的表达和启动子甲基化与临床病理参数的关系。结果1.在结肠癌组织中RASGRF1蛋白阳性表达率(36.8%)明显低于其对应的远端正常组织(91.2%),其蛋白表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05);与性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05)。2.在结肠癌组织中RASGRF1基因甲基化比例(70.6%)明显高于其对应的远端正常组织(17.6%),其甲基化程度与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05);与性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05)。3.RASGRF1在结肠癌组织中的表达与基因启动子甲基化呈负相关(P<0.05)。结论1.RASGRF1在结肠癌中表达下调,其表达与该基因启动子甲基化呈负相关,DNA甲基化可能是结肠癌RASGRF1表达下调的原因之一。2.RASGRF1在结肠癌组织中的表达及甲基化与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关,其表达下调和甲基化可能参与结肠黏膜的恶性转变,在结肠癌浸润转移中起一定的作用。第二章结肠癌细胞中RASGRF1的表达和甲基化检测及其过表达细胞模型的建立目的探讨RASGRF1在人结肠癌细胞株中的表达和甲基化情况,筛选适合的细胞株建立体外RASGRF1过表达细胞模型并对其进行验证。方法采用RT-PCR、WesternBlot和MSP检测人结肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480和SW620中RASGRF1mRNA和蛋白的表达情况及甲基化状态;利用不同浓度的5-Aza-CdR处理结肠癌细胞,RT-PCR检测处理前后RASGRF1mRNA水平的表达变化;筛选出适合的细胞株建立体外RASGRF1过表达结肠癌细胞模型;将(?)IASGRF1过表达载体转染筛选出来的结肠癌细胞株,使结肠癌细胞高表达RASGRF1,并运用Real-timeqPCR和WesternBlot进行验证。结果1.RASGRF1mRNA在人结肠癌细胞株SW480中表达最高,HT29、SW620次之,而在HCT116中表达最低。2.RASGRF1蛋白在人结肠癌细胞株SW480中表达最高,而在HT29、HCT116和SW620中表达均明显下调。3.RASGRF1基因启动子在人结肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480和SW620中均存在不同程度的高甲基化,其中以HCT116甲基化程度最高。4.经过5-Aza-CdR处理后,结肠癌细胞HCT116中RASGRF1基因表达增高。5.选择HCT116细胞成功建立体外RASGRF1过表达细胞模型(pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO-RASGRF1)。结论1、RASGRF1mRNA和蛋白的表达在结肠癌细胞株HCT116中均明显下调,且RASGRF1基因启动子在结肠癌细胞株中存在高甲基化;5-Aza-CdR能上调RASGRF1的表达。2、HCT116细胞适于构建体外RASGRF1过表达细胞模型。pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO-RASGRF1能有效地转染HCT116细胞,使HCT116细胞中的RASGRF1高表达。第三章RASGRF1过表达对HCT116细胞生物学行为的影响及其机制的研究目的探讨RASGRF1过表达对人结肠癌细胞HCT116细胞生物学行为的影响及其机制。方法实验分为两组,转染pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO-RASGRF1的过表达组和转染空载体pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO的空白对照组。采用MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;WesternBlot法分析RASGRF1过表达对EMT上皮标志物E-cadherin,间质标志物fibronectin,vimentin蛋白表达的影响。结果1.MTT结果显示,与空白对照组比较,过表达组可有效抑制HCT116细胞的生长和增殖能力(P<0.05)。2.AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术结果显示,空白对照组和过表达组HCT116细胞的早期调亡率分别为3.68±0.26%和4.18±0.25%;晚期凋亡率分别为23.90±0.38%和24.68±0.82%。过表达组与空白对照组相比,其早期和晚期凋亡率均无明显差异(P>0.05)。3.Transwell细胞侵袭实验显示,过表达组HCT116细胞穿膜数显著少于空白对照组(32.2±2.3vs.48.9±2.2)(P<0.01)。4.划痕实验结果显示,与空白对照组比较,过表达组HCT116细胞愈合能力明显减低;Transwell细胞迁移实验进一步证实,过表达组HCT116细胞穿膜数显著少于空白对照组(41.1±5.3vs.66.8±5.5)(P<0.01)。5.WesternBlot结果显示,与空白对照组比较,过表达组E-cadherin蛋白的表达上调,而fibronectin,vimentin蛋白的表达下降。结论1.RASGRF1过表达可抑制HCT116细胞的生长和增殖,降低HCT116细胞的侵袭迁移能力,而对HCT116细胞的凋亡无明显影响,RASGRF1可能在调控结肠癌发生发展过程中起关键性作用。2.RASGRF1过表达可上调E-cadherin蛋白的表达,抑制fibronectin,vimentin蛋白的表达。RASGRF1可能通过阻滞EMT的发生抑制结肠癌侵袭和转移。
【作者】陈辉;
【导师】霍继荣;
【作者基本信息】中南大学,临床医学,2014,博士
【关键词】RASGRF1;结肠癌组织;免疫组化;MSP;结肠癌细胞;RT-PCR;WesternBlot;转染;结肠癌细胞HCT116;Real-timeqPCR;增殖;凋亡;侵袭;迁移;EMT;

【参考文献】
[1]李玉鹏.12Cr1MoV钢球化4~5级后力学性能与寿命评估研究[D].兰州理工大学,材料工程,2014,硕士.
[2]李立强.京津冀都市类报纸雾霾报道研究[D].河北大学,新闻与传播,2014,硕士.
[3]胡世清.中淳高科桩业股份有限公司盈利模式创新研究[D].宁波大学,工商管理(专业学位),2014,硕士.
[4]王银泉.铜陵市新桥矿区土壤重金属污染评价及源解析研究[D].合肥工业大学,环境科学,2014,硕士.
[5]李娟英.无滥用三方合同签署协议的研究[D].西安电子科技大学,信息安全,2012,硕士.
[6]谢捷,叶海燕,罗小芳,朱兴一,王平.D290阴离子交换树脂分离鲨鱼硫酸软骨素的条件优化[J].食品研究与开发,2013,16:97-99+104.
[7]徐彬.我国城市水务产业发展模式研究[D].复旦大学,环境科学,2013,博士.
[8]郑晓炜.供应链金融的模式及风险研究[D].河北经贸大学,金融学,2014,硕士.
[9]陈晓平.WWW上搜索引擎返回结果的模糊聚类研究[D].河海大学,2002.
[10]王召唤.磁性活性污泥联合电化学处理印染废水的研究[D].华中科技大学,市政工程,2013,硕士.
[11]周伍.国有独资商业银行资产负债管理研究[D].安徽大学,政治经济学,2004,硕士.
[12]李楠.粗糙集理论在决策支持系统中的应用研究[D].北京化工大学,2002.
[13]许海燕.基于CAN总线的作战车辆综合电子信息系统的研究[D].河海大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[14]李京伟.中西医治疗功能性消化不良的平行亚组化分层随机、对照试验[D].广州中医药大学,中医内科学(专业学位),2014,博士.
[15]高翔.20世纪中后期美联储货币政策走向研究[D].鲁东大学,世界史,2013,硕士.
[16]廖婧.社交网络视野下表达自由的法律界限[D].华中科技大学,民商法学,2013,硕士.
[17]萨莎(ROMANOVAALEXANDRA).俄罗斯诺沃罗西斯克港口的集装箱码头发展战略研究[D].大连海事大学,技术经济与管理,2014,硕士.
[18]刘红.上海城市公园廊的空间适宜性评价研究[D].上海交通大学,风景园林,2013,硕士.
[19]张乃文.北宋军马来源述论[D].辽宁大学,中国古代史,2012,硕士.
[20]清华大学深圳研究生院深圳市石墨烯重点实验室吕伟天津大学化工学院杨全红.全球涌动石墨烯热[N].人民日报,2015-02-26023.
[21]杜进生,区达光.UPPC梁的开裂截面惯性矩及挠度计算研究[J].工程力学,2014,02:170-176.
[22]龙梦雅.论我国融资租赁的界定[D].中国社会科学院研究生院,民法(专业学位),2014,硕士.
[23]王潇雨.微信使用者使用行为及意图探讨[D].兰州大学,新闻学,2013,硕士.
[24]丁网林,骆健,李杰.直接并网的中小型发电机定子接地保护[J].电力系统自动化,2007,15:74-78.
[25]赵卫斌.基于动态泄漏源的破舱渔船水下溢油过程研究[D].浙江海洋学院,捕捞学,2013,硕士.
[26]王春,高书涛,周欣,吴秋华,教彩娜,王志.等离子体光催化剂在有机合成中的应用研究进展[J].有机化学,2014,11:2217-2223.
[27]裴新宇.基于ArcGIS Server的特殊运营场景生成与综合展示系统的设计与实现[D].北京交通大学,软件工程(专业学位),2013,硕士.
[28]吴明亮.稻茬田免耕播种机播种技术及机具实验研究[D].湖南农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.
[29]余传文.PCS-8000过程自动化计算机控制系统[J].冶金自动化,1988,02:15-19.
[30]李励立.基于HTTP协议的流媒体播放器系统软件设计[D].浙江大学,2006.
[31]岳丽新.种植二期手术后健康牙龈愈合状况的研究[D].山东大学,口腔临床医学(专业学位),2013,硕士.
[32]费祥国.论侵犯著作权罪[D].中国政法大学,法律,2004,硕士.
[33]赵天永.乳管镜在乳腺导管内病变患者中的诊断及治疗分析[D].内蒙古大学,生物工程,2014,硕士.
[34]洪岩.吉林石化网络培训平台建设项目进度计划与控制研究[D].吉林大学,工业工程,2013,硕士.
[35]成慧敏.张爱玲《金锁记》的自译策略研究[D].天津财经大学,英语语言文学,2012,硕士.
[36]韩宏,陈鹏.以深层次信息化建设为支点提升税收执法效能[J].学习与实践,2005,07:55-57.
[37]杨玉杰,曲寿利,印兴耀.平面地震属性的去噪方法[J].石油地球物理勘探,2009,05:553-557+522+650.
[38]王坤.创业板上市公司社会责任信息披露体系研究[D].云南财经大学,会计学,2014,硕士.
[39]虞雁南,丁信法,张圣,楼敏.CT灌注预测急性缺血性卒中患者缺血半暗带和核心梗死区的最佳灌注参数阈值探讨[J].浙江大学学报(医学版),2014,01:7-13.
[40]杨志.2-甲基咪唑配位聚合物的合成、结构和性质研究[D].苏州大学,无机化学,2014,硕士.
[41]胡卓玮,刘晓旭,彭程,魏铼.基于次序权重平均法的购房选择地理空间多准则决策[J].地理研究,2013,03:476-486.
[42]韩惠孚.克罗斯(CROSS)公司的组合机床(上)[J].组合机床与自动化加工技术.1989(12)
[43]李坤秀.基于汉语拼音数据库的专有名词拼音拼写研究[D].鲁东大学,语言学及应用语言学,2014,硕士.
[44]缪丽.T型交汇/分流连接井水流数值模拟[D].河北工程大学,水利水电工程,2012,硕士.
[45]王效举,陈鸿昭.三峡地区茶园土壤化学特征与茶叶品质的关系[J].植物生态学报,1994,03:253-260.
[46]蒋成侠.中国大学生英语写作中高频动词Find的句型应用[D].西南交通大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[47]程玉霞.基于外源乳化法的植物乳杆菌微胶囊制备及性能研究[D].浙江工商大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[48]罗来鹏.基于粗糙集的频繁项集挖掘算法[J].计算机与现代化,2005,10:36-38.
[49]张晓阳.湖南双鹤价值链管理与竞争优势的探讨[D].天津大学,工商管理,2004,硕士.
[50]王凡.高校学生社团在校园文化建设中的作用研究[D].华东师范大学,思想政治教育,2013,硕士.

相关推荐
更多