平颏海蛇的化学成分研究

【摘要】平颏海蛇(Lapemiscurtus)为眼镜蛇科平颏海蛇属的爬行动物,具有祛风除湿、舒筋活络作用,现已被广西中药材标准收载。本课题通过对平颏海蛇干体进行化学成分的提取分离、纯化与结构鉴定,希望能从中发现具有抗风湿的活性成分；对海蛇水解动物蛋白的酶法制备工艺研究,为海蛇水解动物蛋白开发功能食品等高值化和综合利用提供一定的理论基础和依据。将平颏海蛇干体(全体)粉粹后,用75%乙醇回流提取,过滤得提取液和海蛇残渣。其中提取液经减压浓缩(低于55℃)回收溶剂得浸膏,所得浸膏溶散水中,依次用石油醚、乙酸乙酯萃取,得到不同极性段：采用硅胶柱层析法、凝胶柱层析法、重结晶等手段,结合DPPH自由基清除率检测,主要对石油醚段进行了分离纯化；分离得到的单体化合物,利用NMR,MS等波谱方法、物质的理化性质以及参考文献对各单体进行结构鉴定；同时,以海蛇残渣作为蛋白质底物,采用酶法水解,通过单因素实验和正交实验,考察温度、酶量、固液比、时间这四个因素对酶水解的影响,获得木瓜蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶水解海蛇蛋白质的最佳酶解工艺参数。从平颏海蛇干体中分离得到17单体化合物,分别鉴定为胆甾醇(1),5,6β-Epoxysitosteryloleate(2),7a-甲氧基-β-谷甾醇(3),3β-Methoxy-5a-cholestane(4),Stigmasta-5,24(28)-diene,3-methoxy-,(3β,24E)(5),5a-Cholestan-3β-ol,5,6β-dibromo-,nonanoate(6),Cholestane-3,5,6-triol,3-nonanoate(7),胆甾-5-烯-3β,7β-二醇(8),胆甾-5-烯-3β,70α-二醇(9),1-甲基海因(10),Pentacosanamide,N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)-3,7-heptadecadienyl](11),棕榈酸(12),油酸甲酯(13),油酸(14),1,3-Distearoyl-2-oleoylglycerol(15),a-棕榈酸甘油酯(16),鲛肝醇(17)；其中除化合物(1),(10)外,均为首次从平颏海蛇中分得。对酶法制备海蛇水解动物蛋白的工艺进行研究,发现枯草杆菌中性蛋白酶水解海蛇蛋白的得率最高,其得率约为42%,且其自由基半数清除率SC50也相对较高,达到0.5580mg/mL,其最佳酶解条件为温度50℃,pH值7.0,固液比1:9(g/mL),酶量3000U/3g(原料),时间7h。木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶酶解得率分别为36.2%、38.8%、38.8%。
【作者】姚海萍；
【导师】邓世明；
【作者基本信息】海南大学，海洋生物学，2014，硕士
【关键词】平颏海蛇；化学成分；结构鉴定；酶解；水解动物蛋白；抗氧化性；

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