水稻OsPP6C基因过表达及干扰的研究

【摘要】随着生产水平的日益提高，水稻不仅被作为重要的粮食作物，还被作为经济作物和饲料作物，具有巨大的开发利用价值，因此，它对我们的生活和生产越来越重要。尽管近几年水稻的产量和品质都有所提高，但是仍然受到许多不利条件的影响。当前，进一步培育新的水稻品种才是我国农业科技发展的重要工作，利用分子生物学技术和植物基因工程方法，成为解决此项工作的新的有效手段。在细胞中，有限的蛋白磷酸酶和很多蛋白激酶共同维持着蛋白磷酸化的稳态。蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(简称PSPs)可分为磷蛋白磷酸酶(简称PPPs)、金属依赖的蛋白磷酸酶(简称PPMs，其中PP2C是PPM的一种)和基于天冬氨酸的磷酸酶[例如FCP(RNA聚合酶IICTD磷酸酶的TFIIF关联组分)和SCP(小的CTD磷酸酶)]三个家族。而PPP又包括一型(PP1)、二型(PP2A、PP2B)、新型(PP4、PP5、PP6、PP7)磷酸酶。RNA干扰是通过双链RNA的介导，特异性地降解相应序列的mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后水平的基因沉默机制。大部分RNA干扰重组载体的组成是由一个被空白序列所隔断的反向重复序列组成。另外，这个空白序列要求是一个稳定的复制子，能够在大肠杆菌RNAi质粒中稳定遗传，它可以是β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因和许多内含子中的一种。然而，许多研究表明空白序列是内含子对基因的沉默的效率远远大于GUS基因和GFP基因。蛋白磷酸酶6(proteinphosphatase6,PP6)在模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)中已经被证实参与了生长素和脱落酸信号转导，并且还在拟南芥衰老进程扮演了重要角色，但在其他植物中则鲜有报道。为研究和分析水稻蛋白磷酸酶6(Oryzasativaproteinphosphatase6，简称PP6)的功能，本文采用RT-PCR技术从水稻中花11叶片cDNA中扩增OsPP6C基因全长，构建了水稻蛋白磷酸酶6催化亚基(Oryzasativaproteinphosphatase6catalyticsubunit，OsPP6C)基因的过表达载体并构建与GUS融合的pBI121-OsPP6C-GUS过表达载体，同时，构建了OsPP6CRNAi表达载体。结果克隆了水稻蛋白磷酸酶6催化亚基基因OsPP6CRNAi片段和基因全长片段，并将OsPP6C基因连接在植物PBI121载体上和被一段内含子所隔断的反向重复序列连接到pCambia2300载体上，成功构建了蛋白磷酸酶6催化亚基基因的沉默载体和过量表达载体，为进一步研究水稻OsPP6C基因功能奠定了基础。
【作者】王青云；
【导师】李雪梅；杨建平；
【作者基本信息】沈阳师范大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】水稻；蛋白磷酸酶6催化亚基；RNAi；过表达；

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