裂殖酵母中Dnt1参与纺锤体组装检验点沉默的初步研究

【摘要】在细胞有丝分裂过程中,复制的染色体需要准确分离到两个子细胞中。细胞中存在一系列的检验点来监督这个过程,确保基因组准确复制,及时修复和正确分离。在后期开始之前,如果动粒和纺锤体附着不正确或者动粒受到两端微管的拉力不均衡,细胞就会激活纺锤体组装检验点,并推迟进入后期。直到细胞中染色体动粒与纺锤体正确附着,纺锤体检验点沉默,细胞周期继续进行。在裂殖酵母中,Dnt1主要定位在核仁里,在有丝分裂后期还定位在纺锤体及纺锤体极体上。目前研究发现Dnt1通过与检验点蛋白Dma1相互作用并抑制其E3泛素连接酶功能,从而抑制胞质分裂；另外Dnt1通过下调Wee1蛋白水平,调控细胞G2/M转换。我们利用nda3-KM311cdcl3-gfpark1-as3纺锤体检验点沉默筛选系统,将酵母细胞低温阻断后,释放到允许温度,每隔10分钟采样计数Cdc13蛋白(CyclinB)在SPB上的定位比例。通过这种方法我们首次发现Dntl对于纺锤体检验点的沉默是必需的。进一步研究发现Dntl调控纺锤体检验点沉默仍然依赖于SAC的关键组分Mad2,Mad3(?)Bub1;Dnt1与Dis2(?)Bub3在不同的通路上调控检验点沉默。通过细胞生物学定位研究以及生化分析,我们发现了dntl缺失引起纺锤体组装检验点沉默缺陷的机制：一方面dntl缺失导致Plol在纺锤体极体上的定位时间延迟,这一过程部分依赖于Dma1蛋白；另一方面dntl缺失后,有丝分裂检验点复合物和后期促进复合体结合紧密,使细胞不能进入后期,最终导致纺锤体检验点沉默缺陷。但是目前的研究并不能确定这两条途径之间的关系,中间机制还不是很清楚。综上所述,本研究首次发现裂殖酵母中Dnt1参与纺锤体组装检验点沉默,并初步探索了可能的调控机制,从而为纺锤体检验点沉默的研究提供重要的理论基础。
【作者】张梦汀；
【导师】靳全文；
【作者基本信息】厦门大学，细胞生物学，2014，硕士
【关键词】Dnt1；纺锤体组装检验点；Dma1；有丝分裂检验点复合物；Plo1；

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