IgA肾病患者外周血B淋巴细胞microRNA差异表达及临床意义研究

【摘要】目的：IgA肾病（IgAN）是导致终末期肾脏病常见的原因之一，其确切的病因和发病机制仍然不清楚。研究表明O-糖基化异常的IgA1分子可能是导致IgAN发病的关键因素，但IgA1分子O-糖基化异常的机制还不清楚。前期有限的研究提示IgAN患者外周单核细胞microRNA表达异常和C1GALT1C1基因甲基化异常，均提示表观遗传学改变在IgAN发病中可能起重要作用。但研究没有集中在产生IgA1的B淋巴细胞上。本研究的目的是通过检测人外周血B淋巴细胞microRNA的表达，筛选在正常人和IgAN患者中差异表达的microRNAs分子，进一步验证其表达差异，并分析其与IgAN临床病理特点及IgA1分子O-糖基化异常之间的关系，探索microRNA在IgAN发病中的可能机制。方法：1、收集7例IgAN患者及4例正常人外周血5ml，磁珠法分选出CD19+B淋巴细胞，然后提取RNA，采用Exiqon的miRCURYLNAarray表达谱芯片进行杂交检测，对芯片结果变化差异在2倍以上进行聚类分析。挑选出差异表达明显的microRNAs作为候选microRNAs，对它们进行靶基因预测，GO分析，Pathway分析。2、临床收集29例IgAN患者，16例正常人，5例局灶节段硬化性肾小球肾炎（FSGS）患者外周血5ml，磁珠法分选出CD19+B淋巴细胞，然后提取RNA。采用ABI基于茎-环的实时定量PCR检测筛选出来的候选microRNAs的表达量，并分析它们与临床病理的关系。3、用ELISA检测方法测定用于验证的29例IgAN患者，16例正常人，5例FSGS患者IgA1分子半乳糖缺陷（Gd-IgA1）的水平，分析其与microRNAs表达水平的关系。结果：1、ExiqonmiRCURYLNAmiRNA芯片检测正常人与IgAN患者microRNAs表达，有115个microRNAs表达差异在2倍以上。在IgAN患者中有85个上调，30个下调。5个候选microRNAs，上调的miR-3189-5p、let-7g-5p、miR-4258、miR-4695-3p及下调的miR-99b-5p。通过生物信息学方法分析候选microRNAs参与调控的生物信息功能。2、QRT-PCR结果显示5个候选microRNAs与正常组、FSGS组比较差异均无统计学意义。其中只有miR-4258在IgAN组的相对表达量与其余两组比较有略高的趋势：正常组为2.22×10-5（0-1.119×10-4），IgAN组为2.59×10-5（8.327×10-6-2.320×10-4），FSGS组为1.89×10-5（3.692×10-6-5.807×10-5）（P=0.77）。5个候选microRNAs表达量与IgAN患者的临床病理指标没有明显的相关性。3、IgAN组血清IgA1，Gd-IgA1高于正常组与FSGS组（P<0.05）,而正常组与FSGS组差异无统计学意义（P>0.05）。5个候选microRNAs的水平与IgAN患者IgA1分子O-连接半乳糖基化缺陷之间没有明显相关性。结论：1、通过microRNA芯片筛查显示IgAN患者和正常人外周血CD19+B淋巴细胞microRNA表达谱存在明显差异。2、在IgAN组和正常组的初步验证结果显示，5个候选microRNAs，miR-3189-5p、let-7g-5p、miR-4258、miR-4695-3p及下调的miR-99b-5p，表达无明显差异，且与IgAN的临床病理特点和IgA1半乳糖基缺陷之间无明显相关性，提示这5个microRNAs可能不是影响IgA1分子O-糖基化的重要分子。
【作者】王乾了；
【导师】王莉；
【作者基本信息】川北医学院，内科学，2014，硕士
【关键词】microRNA；IgA肾病；IgA1分子；半乳糖缺陷；

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