金福菇多糖TLH-3提取分离以及抗氧化活性片段筛选

【摘要】金福菇(TrichlomalobayenseHeim)又名大白口蘑,属担子菌亚门层菌纲伞菌属口蘑科(白蘑科)。金福菇具有很高的营养和药用价值。随着科技的进步,在细胞水平上的研究发现这些价值主要体现在于含量颇丰的多糖。在人们不断的追求健康的理念下,真菌多糖由于其药用价值一直以来备受人们关注。据分析,每公斤干品中含蛋白质27.56%、总糖38.44%、粗脂肪9.58%、粗纤维8.20%。了解这些成分如何影响细胞的生理活性,才能为我们的膳食理念和食品科学及其他领域提供药理学基础。目前为止,关于金福菇的研究极少且主要集中于其培养优化和简单的研究其营养组成。值得注意的是,至今还没有对金福菇多糖进行较系统的研究。尽管许多研究表明真菌多糖具有许多的生物化学活性,但其空间结构及其构效如何影响其功能仍不清楚。因此,我们主要在细胞模型上研究其空间结构及其构效与其相应的药理学之间的关系,从而为我们人类的日常膳食提供一定的理论参考。本实验对其进行提取分离纯化后,得到三组分,对金福菇多糖进行的抗氧化性质分析,对比三组分的抗氧化能力,筛选出最优部分,同时对其进行降解和分析,并且对多糖构象做了一些初步分析。具体如下：首先,利用传统的水提醇沉方法和sevag除蛋白的方法,得到金福菇多糖。然后联合利用阴离子交换法和凝胶过滤法得到TLH-1、TLH-2和TLH-3三种组分。通过对这三种多糖进行总糖的测定、蛋白测定、全紫外吸收分析以及红外光谱分析。结果得出TLH-1、TLH-2和TLH-3的得率分别为0.72±0.04%、0.41±0.10%和0.08±0.01%,从中可以看出,TLH-1的得率最高,而TLH-3的得率最低,说明TLH-3最难提取。在对三种多糖的蛋白和多糖含量测定中可以得出,TLH-1蛋白含量最高,为1.31±0.05%,TLH-3的蛋白含量最低,为0.68±0.01%,三种多糖的蛋白质含量都很低,说明蛋白基本全部除去。在总糖含量的测定中,三种多糖的总糖含量都高于90%,而TLH-3的多糖含量最高,为97.4±1.24%。通过全紫外吸收分析得出,三种多糖含核酸和蛋白质量甚微；在红外光谱分析结果中,三种多糖组分均呈现糖的特殊吸收峰。综上所述,提取方法可行,为后续工作提供了实验材料的保证。其次,通过研究金福菇TLH-1、TLH-2和TLH-3对DPPH自由基和O2-自由基的清除作用以及对人胚肺成纤维细胞的抗氧化能力的影响。结果表明,TLH-1、TLH-2和TLH-3对清除DPPH自由基和O2-自由基都有同样的清除效果。其中TLH-1和TLH-2的清除作用最低,而TLH-3清除效果最好,尤其是在清除DPPH自由基能力与阳性对照Vc大致一样。同样,TLH-1、TLH-2和TLH-3对人胚肺成纤维细胞都存在抗氧化能力,TLH-1和TLH-2的抗氧化作用最低,TLH-3抗氧化能力最高,与上述实验结果一致。在细胞抗肿瘤实验中,TLH-1对Hela和HepG2细胞的抑制率几乎没有,而TLH-2和TLH-3组分对Hela细胞和HepG2细胞的生长有一定的抑制作用,并与剂量和时间有关,但是对正常细胞的作用却不明显,其中TLH-3的抑制效果最好。总之,金福菇多糖TLH-2和TLH-3组分具有潜在的辅助治疗癌症的作用。最后,由于金福菇TLH-3的抗氧化能力最高,所以对其进行降解并研究其活性与构效关系。经分子量测定后得出,金福菇多糖TLH-3的分子量为5.134×103Da。对TLH-3的酸解,进行分子筛分离得到TLH-3A和TLH-3B,收集二者并进行分子量测定和DPPH自由基以及O2-自由基的清除能力检测。结果得出TLH-3A的含量和分子量都高于TLH-3B,分别为3.193×103Da和1.541×103Da。进行的DPPH自由基和O2-自由基的清除能力检测可得出：TLH-3A对DPPH自由基和O2-自由基的清除能力明显高于TLH-3B,但其清除率小于Vc。总之,金福菇TLH-3部分的活性结构都集中于TLH-3A。
【作者】郭璐璐；
【导师】陈彦；
【作者基本信息】安徽大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】金福菇；多糖；抗氧化；抗肿瘤；

【参考文献】
[1]周昊.羊绒纤维表面聚合物修饰及其性能研究[D].浙江理工大学,纺织工程,2013,硕士.
[2]黄亮,王宁,赵进慧.基于多目标优化的控制器设计方法[J].自动化学报,2008,04:472-477.
[3]黄琼.网络图书资源个性化推荐算法研究[D].西南交通大学,教育技术学,2014,硕士.
[4]刘帅帅.政治关联与上市民营企业绩效的实证分析[D].河北经贸大学,政治经济学,2013,硕士.
[5]周益明.基于无线传感器网络的温室群监测与控制系统的关键技术研究与实现[D].浙江大学,2009.
[6]马水平,王志宏,田永乐,杨军,王海荣.地震反射同相轴的地质含义[J].石油地球物理勘探,2010,03:454-457+472+319.
[7]卜翔.基于IEEE 802.15.4的实时通信系统调度研究[D].南京邮电大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[8]汪泉.CD4~+Nrp1~+调节性T细胞在脏缺血预适应中的作用及机制研究[D].华中科技大学,肾内科,2013,硕士.
[9]商报记者孙黎明　任忠君实习生龙搏腾宇.东城再造西城再战九龙坡建八大功能板块[N].重庆商报,2013-10-14A04.
[10]张波.长期乙醇摄入对大鼠胃黏膜上皮细胞免疫因子TSLP表达的研究[D].山东大学,内科学（专业学位）,2014,博士.
[11]尹冬梅.集中供暖监控系统设计与优化控制方法研究[D].沈阳理工大学,控制理论与控制工程,2012,硕士.
[12]高源.光伏电池直接向用电器直流回路供电技术研究[D].大连理工大学,电工理论与新技术,2013,硕士.
[13]陈必远,马在田.优势频率约束下的递推f-x去噪和谱均衡方法[J].石油地球物理勘探,1997,04:575-581+604.
[14]殷林森.科技型中小企业投资价值挖掘与培育评价体系研究[D].武汉理工大学,2004.
[15]江佩芳,朱涛,杨翠微,高峰,顾伟忠,袁天明,俞惠民.宫内感染致脑损伤对仔鼠认知发育和海马神经发生的影响[J].中国病理生理杂志,2014,11:1934-1940.
[16]王佳慧.呼伦贝尔市普通高中信息技术课教学现状调查研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[17]汪启红.上海某桩基工程优化设计及运用[D].天津大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[18]管伟,王晓军.决策支持系统在保险业中的应用[J].兰州工业高等专科学校学报,2003,02:56-59.
[19]林成明.快速乘加运算的一个方案[J].石油地球物理勘探,1979,06:42-47.
[20]阎磊,李小兰.实现科技期刊跨越式发展的若干思考[J].今传媒.2005(06)
[21]华燕燕,李浩君.移动学习外文期刊文献统计与定量分析研究[J].中国远程教育,2013,02:42-47.
[22]王贝贝1,2,3,施明雨1,2,3,王冬1,2,3,许骄阳2,3,刘怡2,3,杨洪江1,戴住波2,3,张学礼2,3.代谢工程改造酿酒酵母生产β-胡萝卜素[J].生物工程学报.
[23]刘立兵.缺氧通过刺激白介素8分泌促进宫颈癌细胞增殖[D].苏州大学,妇产科,2014,硕士.
[24]徐志达.基于供应链网络演化理论的供应商选择与应用[D].浙江理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[25]李哲.论我国政府对证券市场监管方式的转变[D].东北师范大学,政治学理论,2003,硕士.
[26]张东.鞍山地区农业信息化建设问题研究[D].吉林大学,农业推广,2012,硕士.
[27]李鹏.基于视频的交通流参数检测系统研究[D].西安电子科技大学,计算机系统结构,2011,硕士.
[28]李锦文,施玉海,李薰春.DRM发射机包络和相位延时分析[J].广播与电视技术.2005(11)
[29]马金星.漆包线耐电晕测试仪的试制和试验数据分析[D].西安电子科技大学,计算机技术,2012,硕士.
[30]张春安.塑料光纤技术新进展[J].世界产品与技术.2000(02)
[31]王杰.我国防治外来物种入侵的立法研究[D].石家庄经济学院,环境与资源保护法学,2013,硕士.
[32]刘英晓.元认知干预技术中情感组织者对考试焦虑治疗效果的影响[D].辽宁师范大学,应用心理学,2011,硕士.
[33]吴建宁.智能化小麦信息处理系统的研究与应用[D].太原理工大学,电路与系统,2004,硕士.
[34]金闺秀.RRM1和RRM2表达水平与宫颈癌化疗的相关性研究[D].宁波大学,外科学,2014,硕士.
[35]李梅.我国创新驱动型产业升级政策研究[D].华中科技大学,行政管理,2012,硕士.
[36]黄卫东.FNDC5的制备及对2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响[D].第四军医大学,内科学（专业学位）,2014,硕士.
[37]卢海峰.补益药及其主要成分对细菌生长代谢影响的热动力学研究[D].曲阜师范大学,物理化学,2004,硕士.
[38]冯莉.中国英语学习者的元认知要素与成绩的相关研究[D].西北工业大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[39]杨模荣.套期会计原则缺失问题研究——IASB套期会计征求意见稿评述[J].会计研究,2012,06:25-31+92.
[40]江颖.左转待行区对信号交叉口通行能力的影响研究[D].西南交通大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[41]张磊.不同植物提取物对克氏原螯虾致病菌的抑菌活性及免疫活性的影响[D].扬州大学,水生生物学,2012,硕士.
[42]姚伟.大连汉信公司乙肝疫苗营销策略研究[D].大连理工大学,EMBA（专业学位）,2012,硕士.
[43]王恬.一维ZnO纳米结构的光电特性及表面改性研究[D].河南大学,2013.
[44]董军,吴莉莉,代正伟.石墨烯复合纳米晶纤维素制备阻燃薄膜的研究[J].嘉兴学院学报,2014,06:21-25.
[45]位雪萍.锁阳和淫羊藿对训练大鼠骨骼肌自由基代谢和LDH、CK活性影响的研究[D].曲阜师范大学,运动人体科学,2013,硕士.
[46]梁明炜.M84(PC)在矿井提升机上的应用[J].冶金自动化,1990,02:34-36+29.
[47]苏婷.针刺联合二甲双胍治疗脾虚痰湿型青春期PCOS的临床观察[D].湖南中医药大学,中医妇科学（专业学位）,2014,硕士.
[48]刘慧敏.关于完善我国民间金融制度的研究[D].沈阳师范大学,西方经济学,2014,硕士.
[49]路迎峰.“中式风格”在3-6岁女童服装设计中的应用研究[D].河北大学,设计学,2014,硕士.
[50]张敏.气田开采的生态影响及生态恢复措施研究[D].长安大学,环境工程（专业学位）,2014,硕士.