约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原在大肠杆菌和家蚕细胞中的表达与初步研究

【摘要】约氏疟是由约氏疟原虫引起的疟疾，主要发生在非洲，其宿主为鼠。由于不同疟原虫之间的表面抗原有很多同源性非常高，结构高度保守，故约氏疟原虫在实验室常用来免疫小鼠，在免疫反应中作为一种模型为其他疟疾的研究提供参考。Pys25和Pys48分别是约氏疟原虫有性生殖阶段动合子时期和配子体时期的表面抗原，其结构均高度保守，且已有的研究显示其抗体均有显著的传播阻断效应。我们选择其进行研究，通过原核表达和家蚕表面展示表达目的蛋白，单独免疫制备抗体和联合免疫（Pys25+Pys48）制备抗体，比较其传播阻断效果，目的在于验证家蚕表达系统的优越性，在于验证两种抗原同时免疫是否具有协同性，在于为后期多时期多价疫苗的构建奠定基础，在于建立一种鼠疟模型，为其他疟疾的研究提供参考。首先，我们构建原核重组表达菌BL21-pGEX-4T-1-Pys25和Rosseta-pET-32a-Pys48，分别经IPTG诱导表达后，高压破碎菌体，离心分上清沉淀，Pys25上清直接用GST柱亲和纯化；Pys48几乎都表达在沉淀，我们用洗包涵体的方法获得较纯的目的蛋白。重组蛋白经浓缩、BCA定量后，免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。同时，我们利用家蚕表面展示系统原理，改造pFastBacDual载体，在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV，构建重组病毒vBmPys25、vBmPys48，在家蚕细胞中成功表达重组蛋白，经免疫荧光检测，激光共聚焦显微镜观察目的蛋白成功展示在细胞膜表面，经超速50000rpm离心获取杆状病毒粒子，免疫Balb/c雌鼠，获得多克隆抗体。本实验为后续的传播阻断试验及多时期多价疫苗鼠疟模型的构建奠定了基础，为其他疟疾P25和P48蛋白的研究提供参考。
【作者】李伟杰；
【导师】吴祥甫；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】Pys25和Pys48；家蚕杆状病毒表面展示技术；vBmPys25和vBmPys48；CMV；

【参考文献】
[1]贺俊博.射频磁控溅射生长BN薄膜及其接触特性的研究[D].吉林大学,2013.
[2]冯春强.高速公路智能值机系统软件设计与实现[D].长安大学,智能交通与信息系统工程,2014,硕士.
[3]姜鹏程.边界态对双层石墨烯的电导和谷极化的影响[D].河北师范大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[4]于高超.黑龙江省绥化市北林区农村剩余劳动力转移问题研究[D].吉林大学,农业推广,2012,硕士.
[5]唐血梅.新疆酸马奶中高产胞外多糖乳酸菌的筛选及培养条件优化研究[D].新疆农业大学,食品科学,2012,硕士.
[6]张京.18-19世纪英国职业技术教育发展问题及对策研究[D].西南大学,职业技术教育学,2014,硕士.
[7]邓丰义,刘震宇.基于模式矩阵的FP-growth改进算法[J].厦门大学学报(自然科学版),2005,05:629-633.
[8]宋志波.油茶内参基因的筛选与油脂合成相关酶基因的表达特征分析[D].中南林业科技大学,森林培育,2014,硕士.
[9]陆建国.凡口铅锌矿分布式管理信息系统的设计与开发[D].中南大学,控制工程,2004,硕士.
[10]赵江.不同施肥制度下红壤耕作层含水量与穿透阻力的动态模拟[D].华中农业大学,水土保持与荒漠化防治,2014,硕士.
[11]田小伟.哲学与政治：尼采政治哲学研究[D].西北师范大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[12]高云,倪培根,张守著.2011年度物理科学一处科学基金项目分析综述[J].物理,2012,01:48-51.
[13]黄发明.钱塘江微污染寡碳引水脱氮示范工程试验研究[D].武汉理工大学,环境工程,2012,硕士.
[14]蔡朝阳.基于数据融合的轧机液压压下系统故障诊断[D].燕山大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[15]姜枫.基于模糊多属性的决策方法研究[D].中国科学技术大学,2013.
[16]周淼晔.论肖邦谐谑曲的旋律形态及其内涵[D].燕山大学,音乐学,2013,硕士.
[17]冯香安.槲皮素作为饲料添加剂的安全性评价[D].东北农业大学,动物营养与饲料科学,2013,硕士.
[18]崔庆龙.预镀层钛合金与铝合金电弧熔钎焊工艺及界面特征研究[D].哈尔滨工业大学,材料加工工程,2013,硕士.
[19]孙彪.西藏地区沙害对路基路面的影响及生态养护技术研究[D].重庆交通大学,建筑与土木工程,2012,硕士.
[20]黄崇福,张俊香,刘静.模糊信息优化处理技术应用简介[J].信息与控制,2004,01:61-66.
[21]周琳婷.功能导电新材料制备及分析应用[D].江南大学,2013.
[22]柳靖.新时期以来小说中情爱观念的演变[D].西北师范大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[23]王天奇.产黄青霉Penicillium chroysongenum菌丝体综合利用的研究[D].北京化工大学,生物化工,2007,博士.
[24]张永智.沧州大化5万吨TDI项目分析与评价[D].天津大学,工商管理,2004,硕士.
[25]段红云.基于系统分析的云南省委党校干部教育培训有效性研究[D].云南大学,公共管理,2012,硕士.
[26]白彬.SIPTrunk—基于SIP协议的NAT穿越[D].北京邮电大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[27]杨波.菲茨杰拉德《夜色温柔》的叙事学解读[D].哈尔滨理工大学,英语语言文学,2012,硕士.
[28]杨子柱,薛晋安,王治中.带附加燃烧炉的双预热技术在太钢4号高炉的应用[J].钢铁.2002(10)
[29]宋瑞.新课程背景下高中英语教师教学行为现状及影响因素研究[D].西南大学,课程与教学论,2013,硕士.
[30]马龙敏.北京市中学生技术素养的测评研究[D].首都师范大学,学科教学,2014,硕士.
[31]车晨娇.会计师事务所合并及其对审计质量的影响研究[D].湖北大学,会计学,2012,硕士.
[32]刘吉洋,郭少军,翟月明,李丹,汪尔康.肉豆蔻酰磷脂酰甘油保护石墨烯的制备[A].中国化学会.中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集[C].中国化学会:,2010:1.
[33]赵雪平.遗传规划在高速公路联网收费数据处理再利用的应用研究[D].长沙理工大学,2004.
[34]FazalWahab.U.S. Strategic Rebalance to Asia-pacific[D].外交学院,InternationalRelations,2014,硕士.
[35]马绍宾.川八角莲繁殖生态学初步研究[J].植物生态学报,2000,06:748-753.
[36]韩宇东.杜仲叶绿原酸的提取、分离纯化及其抗氧化和降脂研究[D].遵义医学院,药理学,2011,硕士.
[37]刘承健.我国黄金期现货价格动态关系的实证分析[D].云南财经大学,金融学,2013,硕士.
[38]郑书东.沼气中二氧化碳双相吸收分离的研究[D].浙江大学,应用化学,2014,硕士.
[39]庄蕊蕊.上海市电影院商业同业公会研究（1945-1956）[D].华中师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[40]仲伟明.宽带多媒体卫星星上IP交换技术研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[41]宋德福.攀钢方坯RH顶枪控制系统[J].冶金自动化,2005,04:44-47.
[42]孙怡,鲜本忠,林会喜.断陷湖盆陡坡带砂砾岩体沉积期次的划分技术[J].石油地球物理勘探,2007,04:468-473+488+361-362.
[43]苏立勋.再谈双工位移动工作台的电路设计[J].组合机床与自动化加工技术.1991(07)
[44]禹明延.频率副词“总（是）、老（是）”的汉韩比较研究[D].吉林大学,汉语言文字学,2014,硕士.
[45]高伟.基于MapReduce的数据聚集运算算法研究与实现[D].东北大学,计算机应用技术,2010,硕士.
[46]翟升永.RNA结合蛋白CUGBP1与结直肠癌肝转移相关机制研究[D].复旦大学,外科学,2012,硕士.
[47]高倩.指定莫尔纹的构建研究[D].北京交通大学,2015.
[48]陈传涓,刘树范.宫颈上皮细胞图象的计算机分类[J].自动化学报,1982,03:215-221.
[49]常腾飞.过失共同正犯问题研究[D].郑州大学,刑法学,2013,硕士.
[50]陈衍泰,张露嘉,汪沁,欧忠辉.基于二阶段的新能源汽车产业支持政策评价[J].科研管理,2013,S1:167-174.