菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用

【摘要】糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)是糖尿病常见和严重的眼部并发症,是不可逆性盲的重要原因。随着人们生活方式的改变,人均寿命的延长,DR发病率呈上升趋势,患者因视网膜微血管病变和神经组织病变导致视力损害,严重影响生活质量。因此,DR的防治成为糖尿病及其并发症研究领域的重要课题。中药复方具有多靶位、多途径的治疗效应,可充分发挥中医整体调节的优势。菩人丹超微粉(Purendansuperfinepowder,PRD)是针对糖尿病病机关键“热、虚、瘀”的中药复方,具有益气养阴清热、活血化瘀通络之功效。本研究采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型,探讨PRD对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用,为中药复方治疗DR提供实验基础和理论依据。第一部分菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜VEGF和PEDF表达的影响目的：观察PRD对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor,PEDF)表达的影响,探讨PRD对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的保护作用。方法：1清洁级雄性Wistar大鼠36只,随机分为3组：正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组。正常对照组大鼠不做任何处理；糖尿病模型组、PRD治疗组大鼠均建立STZ致糖尿病大鼠模型,以血糖(bloodglucose,BG)≥16.7mmol/L作为成模标准。模型成功建立后,糖尿病模型组大鼠不再做任何处理；PRD治疗组大鼠给予PRD(1.8g/kg/d)灌胃3个月。2采用ONETOUCH血糖仪检测各组大鼠的BG。3采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠视网膜组织病理学变化。4分别采用SP免疫组织化学染色法、Westenblotting法检测各组大鼠视网膜VEGF和PEDF蛋白的表达。5采用RT-PCR法检测各组大鼠视网膜VEGF和PEDFmRNA的表达。结果：1各组大鼠的BG：糖尿病模型组大鼠的BG为(21.63±1.01)mmol/L,明显高于正常对照组大鼠(P<0.01);PRD治疗组大鼠的BG为(14.60±0.95)mmol/L,明显低于糖尿病模型组大鼠(P<0.01)。2各组大鼠视网膜组织病理学改变：正常组大鼠视网膜各层结构完整,层次清晰,内界膜表面光滑；各级神经细胞大小均匀,排列有序。模型组可见视网膜内界膜明显肿胀、增厚、表面粗糙不平,部分内界膜破裂,偶见毛细血管内皮细胞突出于内界膜,视网膜分层欠清晰,神经节细胞排列紊乱、稀疏,细胞数量减少,细胞空泡样变、核固缩,部分核溶解。PRD组视网膜内界膜轻度肿胀、增厚、表面粗糙欠平,视网膜分层清晰,神经节细胞排列轻度紊乱,数量轻度减少。3各组大鼠视网膜VEGF的表达：VEGF蛋白免疫阳性产物位于细胞浆,呈棕黄色颗粒状。免疫阳性细胞主要分布于视网膜神经节细胞层及内核层。糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜VEGF蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01);PRD治疗组与模型组比较,大鼠视网膜VEGF蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.01)。4各组大鼠视网膜PEDF的表达：PEDF蛋白免疫阳性产物位于细胞浆,呈棕黄色颗粒状。免疫阳性细胞主要分布于视网膜神经节细胞层及内核层。糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜PEDF蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.01)；PRD治疗组与模型组比较,大鼠视网膜VEGF蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01)。结论：PRD可通过上调糖尿病大鼠视网膜PEDF表达,下调VEGF表达,减少视网膜血管渗漏和抑制病理性新生血管形成,发挥对糖尿病视网膜微血管病变的保护作用。第二部分菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及相关基因表达的影响目的：通过观察PRD对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及相关基因表达的影响,探讨PRD对糖尿病视网膜神经组织损伤的保护作用。方法：1清洁级雄性Wistar大鼠36只,随机分为3组：正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组。正常对照组大鼠不做任何处理；糖尿病模型组、PRD治疗组大鼠均建立STZ(25mg/kg,连续3d)致糖尿病大鼠模型,以BG≥16.7mmol/L作为成模标准。待模型成功建立后,糖尿病模型组大鼠不再做任何处理；PRD治疗组大鼠给予PRD(1.8g/kg/d)灌胃3个月。2采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠视网膜神经细胞凋亡。3分别采用SP免疫组织化学染色法、WesternBlotting法检测各组大鼠视网膜B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(B-cellleukemia/lymphoma2,bcl-2)、B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(Bcl-associatedX,bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达。4采用RT-PCR法检测大鼠视网膜bcl-2、bax和caspase-3mRNA的表达。结果：1各组大鼠视网膜神经细胞凋亡：各组大鼠视网膜切片均可见TUNEL阳性染色。TUNEL阳性产物位于胞核,呈棕黄色颗粒状,阳性细胞主要分布于视网膜神经节细胞层及内核层,呈散在分布。模型组大鼠视网膜神经细胞凋亡指数(ApoptosisIndex,AI)较正常组明显升高(P<0.01);PRD治疗组大鼠视网膜神经细胞AI较模型组明显降低(P<0.01)。2各组大鼠视网膜bcl-2和bax的表达：bcl-2和bax蛋白免疫阳性产物均位于细胞浆,呈棕黄色颗粒状,bcl-2和bax免疫阳性细胞主要分布于视网膜神经节细胞层及内核层。糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜bcl-2蛋白及mRNA的表达、bcl-2/bax比值均明显降低(P<0.01),bax蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01);PRD治疗组与模型组比较,大鼠视网膜bcl-2蛋白及mRNA的表达、bcl-2/bax比值均明显升高(P<0.01),bax蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.01)。3各组大鼠视网膜caspase-3的表达:caspase-3蛋白免疫阳性产物位于细胞核,呈棕黄色颗粒状。免疫阳性细胞主要分布于视网膜神经节细胞层及内核层。糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜caspase-3蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01);PRD治疗组与模型组比较,大鼠视网膜caspase-3蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.01)。结论：1糖尿病大鼠视网膜存在神经细胞凋亡及相关基因表达的异常,表现为视网膜神经细胞AI升高,bcl-2表达降低、bax和caspase-3表达升高。2PRD可通过上调bcl-2的表达、下调bax和caspase-3的表达,减少糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡,发挥对糖尿病视网膜神经组织损伤的保护作用。
【作者】董志军；
【导师】张铁民；
【作者基本信息】承德医学院，肿瘤学，2011，硕士
【关键词】菩人丹超微粉；糖尿病视网膜病变；血管内皮生长因子；色素上皮衍生因子；B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2；B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3；

【参考文献】
[1]张文涛,江源,王明昌,张凌楠,董满宇,郭媛媛.芦芽山阳坡不同海拔白杄径向生长对气候变暖的响应[J].植物生态学报,2013,12:1142-1152.
[2]沈雯蕾.浅述商业秘密保护中的竞业禁止[D].苏州大学,法律,2003,硕士.
[3]赵丹.我国新农村住宅建设投融资模式及保障机制研究[D].北京交通大学,2014.
[4]郭政.二元醇和氨基酸在混合溶剂中的焓对相互作用[D].温州大学,物理化学,2012,硕士.
[5]潘礼清.胶粉改性沥青高温流变性能研究[D].内蒙古工业大学,岩土工程,2013,硕士.
[6]王九洲.水溶性炭质中间体的制备及其在电化学领域的应用研究[D].天津大学,2012.
[7]孟杰.聚合物平面波导光开关的优化设计与制备[D].吉林大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[8]陆洋.项目型组织能力构建与提升研究[D].中南大学,土木工程,2014,博士.
[9]沙水花.新课改背景下小学语文教师课堂教学评价语言的有效性探究[D].广西师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[10]黄橙橙.施万春音乐创作思想研究[D].中国音乐学院,音乐学,2012,硕士.
[11]路兰,高齐圣.基于局域网络的加权财富演化模型[J].控制与决策,2014,05:787-794.
[12]胡永杰.温州交投集团RC高速公路可行性研究[D].浙江工业大学,工商管理,2012,硕士.
[13]罗厚福.执行器故障下自适应容错控制算法研究[D].东北大学,控制理论与控制工程,2010,硕士.
[14]谢金平.起伏地表条件下变网格正演模拟[D].中国石油大学（华东）,地球探测与信息技术,2012,硕士.
[15]周京.海洋石油勘探油污损害法律规制研究[D].辽宁大学,法律,2012,硕士.
[16]张磊,田超,刘东,师途,杨甬英,沈亦兵.非球面非零位环形子孔径拼接干涉检测技术[J].光学学报,2014,08:164-172.
[17]张威威.晶振老化漂移的建模与补偿[D].西安电子科技大学,电机与电器,2012,硕士.
[18]郭柯.毛乌素沙地油蒿群落的循环演替[J].植物生态学报,2000,02:243-247.
[19]刘慧杰.员工视角的企业声誉对员工组织公民行为的影响研究[D].浙江大学,2010.
[20]罗毅.湖北省耕地生态安全评价及时空演变研究[D].华中师范大学,土地资源管理,2014,硕士.
[21]高波,张忠能,查志琴.基于文字链接比的网页分类的研究[J].计算机工程与应用,2004,27:151-153.
[22]肖澧妲.意大利留学生听力认知策略训练研究[D].北京外国语大学,语言学及应用语言学,2014,硕士.
[23]岑雪峰.呼和浩特市文化产业品牌化发展对策研究[D].内蒙古大学,公共管理,2014,硕士.
[24]何银平.电子技术课程教学中虚拟仿真技术的应用研究[J].电子制作,2015,03:171.
[25]李雪丽.绩效考核对知识型员工反生产行为影响研究[D].郑州大学,企业管理,2013,硕士.
[26]张思复.基于操作者感受的数控机床概念设计[D].东北大学,机械设计及理论,2010,硕士.
[27]万楠.湖北省高科技企业人才流失问题研究[D].华中师范大学,企业管理,2014,硕士.
[28]周珏宇.基于价值链的JNJ公司客户服务管理体系设计[D].兰州大学,工商管理,2012,硕士.
[29]杨翠英.声脉冲组织定量分析技术对肾脏疾病的研究[D].河北医科大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[30]郝琳璐.高速滚珠旋压力解析模型与工艺参数优化[D].太原科技大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[31]伍玉振.制度、技术与农家经济生活变迁[D].山东大学,中国近现代史,2014,博士.
[32]张成良.新型城域网MSTP的关键技术[J].电信网技术.2003(07)
[33]郑玉林.北京郊区初中英语作业调查研究[D].首都师范大学,学科教学,2014,硕士.
[34]吕涛.农地转出户选择流转对象的影响因素研究[D].西安建筑科技大学,工程经济与管理,2013,硕士.
[35]史定华.可修排队系统GI／G（M／G）／1的可靠性分析[J].自动化学报,1995,06:658-667.
[36]王瑶伟.窄间隙双丝GMAW焊枪优化及全位置焊接工艺研究[D].哈尔滨工业大学,材料加工工程,2014,硕士.
[37]高華娟.《毛詩正義》注釋研究[D].西南大学,漢語言文字學,2013,硕士.
[38]胡飞飞.美国《1934年证券交易法》研究[D].安徽大学,法律史,2013,硕士.
[39]于凌宇.国内外片式电容器探析[J].电子产品世界.1995(11)
[40]胡少飞.试论我国地方城市电子政务建设现状、问题及发展策略[D].苏州大学,行政管理,2012,硕士.
[41]陆璐.新时期强化工会维护职能问题分析[D].吉林大学,公共管理,2004,硕士.
[42]王卓宇.巴西“能源独立”之路:进展与问题[J].燕山大学学报(哲学社会科学版),2014,01:28-32.
[43]陈苏娜,周燕珉.北欧酒店建筑设计体验——丹麦奥胡斯RadissonBlu酒店[J].城市住宅,2014,12:48-52.
[44]杨小燕.高质量审计与债务治理关系的实证分析[D].江西财经大学,会计学,2013,硕士.
[45]吕金珉.从我国古代“亲亲相隐”制度看当代亲属拒绝作证权的确立[D].广西师范大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[46]张靖.姜黄素替代喹烯酮对育肥猪饲用效果的研究[D].安徽农业大学,食品科学,2012,硕士.
[47]蔡兰芳.小学语文“递进循环式”教学策略研究[D].华中师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[48]杨婷.混合基生物质活性炭的制备及其对染料的吸附性能研究[D].吉林大学,环境科学,2014,硕士.
[49]伊崇巍.诺基亚公司在中国的经营战略研究[D].对外经济贸易大学,企业管理,2004,硕士.
[50]陆云婷,倪明江,吴荣兵,肖刚,周慧龙,高翔,岑可法.KOH活化对焦炭孔隙结构以及导电特性影响[J].工程热物理学报,2014,07:1448-1452.