RILP与RalGDS相互作用的细胞分子机制研究

【摘要】Ras蛋白超家族,广泛存在于真核生物中,是一个蛋白大家族,在囊泡运输中起着重要的作用。RalGDS是Ras的一个下游效应蛋白,同时RalGDS也促进Ral的GDP形式转换成GTP形式。RILP是Rab7的一个重要的效应蛋白,参与Rab7调节的囊泡运输,晚期内体和溶酶体的功能具有调节作用。RalGDS独立地与其他蛋白相互作用来调节细胞生命活动目前研究还比较少。本文主要采用了PCR法构建真核表达的myc-RalGDS的质粒,通过免疫荧光显微技术和GST-pulldown实验阐明了RILP和RalGDS在细胞中的定位机制以及与蛋白的相互作用的分子机制。免疫荧光共聚焦显微实验表明,myc-RalGDS主要弥散的分布在细胞质中,在细胞核内比较少。过表达RILP,发现RILP在Hela中会募集外源的myc-RalGDS和内源RalGDS,在MCF7,MDA-MB-231和NRK中也有募集现象。构建了融合表达三个功能域REM/CDC25/RBD的质粒,在细胞中同时过表达RILP,发现RILP与RalGDS的REM和GEF共定位,而不与RalGDS的RBD功能域共定位。RILP在细胞中募集RalGDS定位在晚期内体和溶酶体上,而不在高尔基体和早期内体。Rab7不会募集RalGDS,RILP的NT和CT都会募集RalGDS。GST-pulldown实验也进一步验证了RILP可以与RalGDS相互作用,并且跟REM和CDC25结构域作用,而不是RBD结构域作用。本文研究证明了RILP与RalGDS的相互作用机制,阐明了影响RILP与RalGDS相互作用的特定功能域,确定了RILP募集RalGDS在细胞中的精细的亚定位,排除了Rab7对RILP募集RalGDS的影响。本文研究结论有助于进一步丰富RILP与RalGDS在细胞中的囊泡运输和调控机制研究,为细胞的相关信号通路提供新的理论和思路。
【作者】周运鹤；
【导师】王团老；洪万进；
【作者基本信息】厦门大学，化学生物学，2014，硕士
【关键词】Ra1GDS；RILP；溶酶体；

【参考文献】
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