SAMHD1突变体在病毒感染的肝细胞癌中的作用机制

【摘要】研究背景及目的研究背景：SAMHD1以前一直作为一个凋亡细胞中DNA/RNA的清除分子，其缺失、突变可引起细胞中核酸的积累，这些无意义核酸翻译相应的蛋白表达于细胞表面，造成自身免疫性疾病。自11年5月底，SAMHD1的抗HIV感染功能引起了人们的普遍重视，研究发现SAMHD1可与VPX相互作用，起到抗病毒作用。之前的研究表明，SAMHD1在肿瘤病人和健康人中存在mRNA水平上的变异，在肿瘤细胞中普遍存在第4外显子的插入，使SAMHD1表达提前终止，只表达一个含3个外显子的小蛋白；在健康细胞中，第12-14外显子的缺失则很常见。虽然SAMHD1在抗病毒及抗肿瘤方面受到广泛关注，但是其对病毒感染的HCC的研究还未见报道，其作用机制尚未明确。目的：SAMHD1突变体在HBV或HCV感染的HCC中的表达及意义。实验材料及方法实验材料：2011年10月-2012年12月在吉林大学第一临床医院肝胆外科接受首次肝癌根治术，术后经病例组织学证实为肝细胞癌的44例患者。男31例，女13例，年龄27~68岁，平均59岁。正常对照组10例为急诊肝破裂患者术后病理为正常肝脏，男7例，女3例，年龄28~42岁，平均35岁。组织标本分组：HBV感染组22例，HCV感染组10例，非病毒感染组12例，正常肝组织组10例。方法:采用RE-PCR技术检测44例HCC组织及癌旁组织和10例正常肝组织中SAMHD1突变体的表达，然后将SAMHD1不同的突变体进行扩增，得到表达SAMHD1不同突变体的菌株，而后从所得到的菌株中扩增出不同的SAMHD1异构体并构建真核表达质粒，将获得的质粒再转染到HepG2细胞系中，最后通过FACS技术检测表达SAMHD1突变体的HepG2细胞在顺铂处理下的细胞周期的变化。实验结果SAMHD1的自然突变体发现在HCC中表达。此外第8-9外显子和14外显子的缺失被发现在各种各样的细胞类型中，包括293T，THP-1和原始的人类CD4+T细胞中。这些突变很有可能发生缺失突变在全长的SAMHD1中。为了确定是否这些突变发生在肝细胞癌中，我们检测了44个肝癌患者的肝组织。我们发现SAMHD1的一个第四外显子发生自然的插入和第8-9,13,14外显子的发生自然缺失（图1）在肝癌患者组和健康对照组。第8-9,13,14外显子发生了一定频率的缺失在肝癌患者和对照组中，但是包含62bp的第四外显子，发生了更高频繁的突变在肝细胞癌，但这种突变很少发生在健康对照组。如表2所示，第四外显子插入的频率是36.4%和30%在HBV/HCV感染组，然而在非病毒感染组只有25%，在健康对照组只有10%。高频率的插入在病毒感染组与非病毒感染组以及健康对照组有统计学意义。然而缺失的频率没有区别在这些分组中（资料未显示）。这些结果提示SAMHD1第四外显子插入可能发生在病毒感染的肝细胞癌中。
【作者】丁雷；
【导师】张平；
【作者基本信息】吉林大学，外科学，2014，硕士
【关键词】肝细胞癌；SAMHD1；HBV；HCV；

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