核酸适配体AS1411对肿瘤细胞辐射敏感性影响研究

【摘要】目的：本课题以HeLa细胞为研究对象，研究探讨AS1411对人宫颈癌细胞HeLa的辐射敏感性的影响，通过检测不同浓度AS1411预处理联合X射线照射条件下HeLa细胞的存活率，以及观察AS1411预处理联合X射线对HeLa细胞DNA损伤修复、周期分布和凋亡的影响，研究AS1411对HeLa细胞辐射敏感性影响的作用机理。方法：采用CCK-8法测定细胞活性，研究AS1411对HeLa细胞增殖-毒性的影响；克隆形成法观测不同浓度AS1411预处理联合X射线照射对HeLa细胞存活率的影响；采用抗γ-H2AX抗体标记法来检测DNA双链断裂，研究AS1411对X射线导致的HeLa细胞DNA双链断裂的影响；利用流式细胞术测定AS1411预处理联合X射线照射对HeLa细胞周期分布、细胞阻滞和细胞凋亡的影响。结果：(1)CCK-8实验结果显示：不同浓度AS1411处理HeLa细胞24h、48h、72h，HeLa细胞存活率均大于94%，表明AS1411的细胞毒性小。克隆形成实验显示：不同浓度AS1411预处理的HeLa细胞X射线照射后细胞存活率具有显著性差异(P<0.05)。从吸收剂量-细胞存活曲线可以得出：低剂量区“肩区”同样明显缩小变窄，直线斜率部分增大，且各剂量点的存活率均低于对照组，这表明AS1411对HeLa细胞具有明显的辐射增敏作用。(2)DNA损伤实验结果得到：经AS1411预处理的HeLa细胞细胞核内DNA断裂数明显增多。经AS1411处理HeLa细胞24h，细胞核内DNA断裂数明显多于对照组；照射剂量为4Gy、8Gy时，加药+照射组核内DNA断裂数明显多于单纯照射组，其浓度为1μmol/L照射剂量为4Gy、8Gy时细胞核内DNA断裂数分别是21.024±2.25和61.052±2.68,而单纯照射组核内DNA断裂数分别是9.681±2.13和20.789±2.73。(3)细胞周期实验结果得出：经不同浓度AS1411处理HeLa细胞后，细胞周期（G0/G1期、S期、G2/M期）分布与对照组相比S期细胞增加；8GyX射线照射经不同浓度AS1411预处理HeLa细胞出现G2/M期阻滞，但AS1411预处理并不影响辐射引起的G2/M期阻滞，这表明AS1411增加HeLa细胞的辐射敏感性的机制与细胞周期无关。(4)细胞凋亡实验结果显示：AS1411可以促进辐射诱导的HeLa细胞的凋亡。经AS1411预处理，500nmol/L组和1μmol/L组细胞早期凋亡率分别是7.71±1.51%、8.91±1.04%，对照组细胞早期凋亡率是5.86±0.81%；照射剂量为4Gy、8Gy时，加药+照射组细胞凋亡率高于单纯照射组，照射剂量为4Gy时500nmol/L组和1μmol/L组的细胞早期凋亡率分别是19.67±1.90%和21.31±1.74%，单纯照射组细胞早期凋亡率是15.44±2.41%；照射剂量为8Gy时500nmol/L组和1μmol/L组的细胞早期凋亡率分别是39.02±1.91%和41.99±0.65%，单纯照射组细胞早期凋亡率是35.90±2.92%。结论：(1)AS1411对HeLa细胞没有显现出细胞毒性作用。克隆形成实验结果表明AS1411对HeLa细胞具有明显的辐射增敏作用。(2)AS1411可以阻止辐射诱导的HeLa细胞DNA损伤的修复，这表明AS1411提高HeLa细胞的辐射增敏作用与其阻止细胞DNA损伤修复的作用有关。(3)AS1411增加HeLa细胞的辐射敏感性的机制与细胞周期无关。(4)AS1411可以增加HeLa细胞的凋亡率并可以促进辐射诱导的HeLa细胞的凋亡，AS1411增加HeLa细胞的辐射敏感性的机制与细胞凋亡有关。
【作者】李东梅；
【导师】张保国；
【作者基本信息】苏州大学，放射医学，2014，硕士
【关键词】AS1411；辐射敏感性；DNA损伤；细胞周期；细胞凋亡；

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