清香大曲糖化酶的提取及宏蛋白质组学分析

【摘要】糖化酶是酿酒大曲的主要功能成分之一，不同大曲糖化酶活力及酶学特征都不同。一般大曲的研究多关注糖化酶的活力，而对糖化酶的来源不能确定。为了确定清香大曲糖化酶的微生物来源，进一步了解清香白酒的功能微生物，本实验利用多种方法提取清香大曲糖化酶，并用液相色谱质谱联用技术分析清香大曲蛋白质组成，为清香白酒功能微生物的确认提供可靠信息。本文采用PEG/(NH4)2SO4的双水相体系对汾酒大曲的粗酶液进行萃取，实验探讨了PEG分子量和浓度、(NH4)2SO4浓度等主要因素对糖化酶萃取的影响、并通过正交实验确定最佳的双水相体系。结果表明，在PEG2000浓度16%，(NH4)2SO4浓度18%，pH为7.5，加入5%NaCl溶液的双水相体系中，糖化酶的分配系数Ka和回收率Yt分别达到1.913和83.25%。该体系是一种高效、便捷的体系，为汾酒大曲的深入研究提供有效的理论依据。采用TCA-丙酮沉淀法、丙酮沉淀、硫酸铵等沉淀法制备汾酒大曲的宏蛋白质组样品，并用双向电泳来检测制备效果，结果表明：TCA-丙酮沉淀法制备的样品经电泳分离后，减轻了杂质干扰,2-DE图谱中竖条纹干扰较少，获得的蛋白点形状规则、清晰且无明显重叠现象，优于其它两种方法；经过两次水化液溶解的蛋白样品在等电聚焦时能保持4000伏较高电压；上样量为300ug左右的粗蛋白溶于二次水化液能得到点数更多、分辨率高的电泳图谱。最终建立了汾酒大曲宏蛋白质组的双向电泳体系。通过对清香白酒生产常用的三种大曲从蛋白质组学的角度进行质谱鉴定，共得到122个蛋白组分，其中56个蛋白组分种类包括烯醇酶、歧化酶、糖苷酶、糖化酶、各种激酶等，另外66个蛋白组分是辅酶及结构蛋白组分。糖化酶是大曲的主要生化指标，大曲蛋白质成分分析发现，所有检测到的糖化酶均为米根霉产生，由此确认米根霉为清香白酒的功能菌。据推测清香白酒的酯化机制除了胞外酯化酶外，还有酵母菌胞内完成的酰基转移酶形成，本实验检测到只有酿酒酵母合成的乙醇-O-酰基转移酶，确认其为清香白酒酯化功能菌。为清香白酒酿造功能微生物的确认提供科学的理论依据。
【作者】张武斌；
【导师】段江燕；张秀虹；
【作者基本信息】山西师范大学，植物学，2014，硕士
【关键词】汾酒大曲；双水相体系；糖化酶；宏蛋白质组；双向电泳；

【参考文献】
[1]吴得春.基于GARCH模型的人民币汇率风险的VaR方法研究[D].苏州大学,应用统计（专业学位）,2013,硕士.
[2]刘峰.海藻糖生产工艺技术研究[D].齐鲁工业大学,生物工程,2013,硕士.
[3]韩明.病毒性心肌炎患儿血清脂联素水平变化及其与细胞因子IL-6、IL-8之间的相关性研究[D].吉林大学,儿科学,2014,硕士.
[4]侯晓彬,蒋大明,单冬,冯锡生.车地无线通信中拓展窗口喷泉码不等差错保护方法改进研究[J].铁道学报,2014,12:46-49.
[5]董燕.基于Web的科研管理系统设计与实现[D].西安工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[6]欧阳全会.高速公路交通事件自动检测模拟器的设计[D].武汉理工大学,机械工程,2003,硕士.
[7]程鹏,张童,何珂,陈曦,马旭村,薛其坤.拓扑绝缘体表面态的STM研究[J].物理,2011,07:449-453.
[8]董卓超.纺织厂房建筑型式的演进及发展趋向[J].天津大学学报.1990(03)
[9]边伟.高含量GABA桑茶的制备及其品质研究[D].西南大学,食品科学,2014,硕士.
[10]张镜舒.道路沥青性能综合分析[D].长安大学,材料工程（专业学位）,2013,硕士.
[11]彭盛霖.孔洞石墨烯电子结构及其功能器件的第一性原理研究[D].中南大学,2013.
[12]雷洋.后发地区经济系统对交通运输系统的影响研究[D].重庆交通大学,技术经济及管理,2011,硕士.
[13]师佳,江青茵,曹志凯,周华,高福荣.基于2维性能参考模型的2维模型预测迭代学习控制策略[J].自动化学报,2013,05:565-573.
[14]韩金红.服务企业进入国际市场的模式选择研究[D].武汉理工大学,国际贸易学,2003,硕士.
[15]唐松涛.DX旋挖挤扩灌注桩单桩及群桩承载机理及沉降研究[D].北京交通大学,2012.
[16]董学仁.基于立体视觉的球状飞行物体的轨迹预测的研究[D].厦门大学,检测技术与自动化装置,2014,硕士.
[17]牟俊.上市公司国有股退出的理想机制[J].财经科学.2000(03)
[18]吴敏.身体的在场、声音的消抹[D].扬州大学,英语语言文学,2012,硕士.
[19]武健,刘瑜超,徐修林,徐殿国.基于双坐标系复合控制的模块化多电平换流器环流抑制方法[J].电力系统自动化,2015,11:166-172.
[20]王静.论音乐艺术的第三度创作[D].河北大学,艺术学,2003,硕士.
[21]印梅.CCM容器中拦截机制的研究[D].河海大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[22]王燕.消费者主权的社会建构[D].南京大学,社会学,2013,硕士.
[23]张翼,薛其坤.石墨烯:一种新的量子材料[J].物理与工程,2011,01:1-4.
[24]刘柱.中山市公安案件管理信息系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[25]黎群.企业价值观管理的思路与重要途径[J].当代电力文化,2014,05:52-54.
[26]曾凡仔,裘正定.一种提高非平衡数据集PSVM分类精度的方法[J].铁道学报,2004,02:124-127.
[27]李佳羽.新津机场直升机训练飞行航线优化及模拟[D].中国民用航空飞行学院,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[28]张红.初中课堂教学管理探析[D].内蒙古师范大学,教育管理（专业学位）,2012,硕士.
[29]谭诗乐.以风险管理为核心的商业银行内控体系问题研究[D].湘潭大学,会计学,2012,硕士.
[30]郑金萍.从生态翻译学角度论《道德经》译本的多样性[D].宁波大学,英语语言文学,2013,硕士.
[31]乔大伟.基于BP神经网络的隧道围岩参数反分析[D].西安工业大学,岩土工程,2014,硕士.
[32]刘娜.《环球时报》国内议题社评研究（2009.4-2014.3）[D].四川外国语大学,文艺学,2014,硕士.
[33]王利.快速消费品类中小企业现金流管理模式研究[D].山东大学,会计（专业学位）,2013,硕士.
[34]苏妍.生态批评视野中的玛格丽特·阿特伍德[D].河北师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[35]张礼军.绕弯成形防皱模挤压过程数值模拟及磨损仿真研究[D].江苏科技大学,机械工程,2013,硕士.
[36]张莎莎.夏天无注射液对缺血再灌注大鼠脑组织NF-κB信号通路影响的研究[D].遵义医学院,神经病学（专业学位）,2013,硕士.
[37]牛燕华.分析思维对决策中情绪预测偏差的影响研究[D].鲁东大学,应用心理（专业学位）,2014,硕士.
[38]蒋建业.湖南省电信公司数据通信的发展战略研究[D].湖南大学,2003.
[39]王茜.基于JavaEE的人事考核管理系统的设计与实现[D].厦门大学,软件工程,2014,硕士.
[40]陈佳.进口关税总水平下调对人民币汇率影响的研究[D].江西财经大学,世界经济,2013,硕士.
[41]郑翔.矮塔斜拉桥的施工控制方法与实践[D].西南交通大学,建筑与土木工程,2014,硕士.
[42]关丹.外来个体户个体关系网络的新建与拓展[D].复旦大学,社会学,2012,硕士.
[43]伍晶.CUBA对北京市高校校园体育文化影响的研究[D].首都体育学院,体育教学,2013,硕士.
[44]吴岳强.IT补齐管理短板[J].每周电脑报.2007(33)
[45]李丽,翟宪兰,赫荣梅,李洪革,张万福,王玉柱.南马庄潜山内幕雾迷山组雾六段隔层封堵性分析[J].石油地球物理勘探,2010,S1:202-205+240+258.
[46]彭雨哟.反求工程中基于草图轮廓的特征模型重建技术[D].南京航空航天大学,机械设计与理论,2004,硕士.
[47]张强,王昕,刘晓东.AFS理论和数据挖掘与模糊认知图[J].大连海事大学学报,2004,04:106-109.
[48]时帅.我国城市农民工养老保险问题研究[D].复旦大学,行政管理,2012,硕士.
[49]赵寰宇.基于压缩传感的集成电路关键技术研究[D].北京交通大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[50]高健华.泰国文善中学学生汉字学习偏误研究[D].西北大学,汉语国际教育（专业学位）,2014,硕士.