8-溴-7-甲氧基白杨素对肝癌Huh-7细胞系肿瘤球形成细胞自我更新的影响

【摘要】目的研究新型白杨素合成类似物8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)抑制源自人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)Huh-7细胞系细胞肿瘤球形成细胞即肝癌干细胞样细胞(livercancerstemcelllikecells,LCSLCs)增殖活性、自我更新能力和下调β-catenin蛋白表达作用及其机制的探讨。方法体外培养人肝癌Huh-7细胞系细胞，并用干细胞条件培养基悬浮培养法富集和扩增LCSLCs，采用肿瘤球形成法检测不同浓度的BrMC对LCSLCs自我更新能力的影响。MTT比色法测定BrMC对LCSLCs细胞活性的影响；异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记CD133抗体流式细胞术(flowcytometry,FCM)分析BrMC对LCSLCs细胞的干细胞标志物CD133表达的影响。同时，蛋白免疫印迹分析BrMC对LCSLCs细胞β-catenin蛋白表达的影响。结果采用干细胞条件培养基悬浮培养7天，在体外培养人肝癌Huh-7细胞系细胞中得到呈典型非粘附三维生长的肝癌球体细胞即LCSLCs。MTT比色法测定结果表明，不同浓度BrMC处理人肝癌Huh-7细胞系细胞和LCSLCs，细胞活性明显下降，成剂量依赖性(P＜0.05),与亲本Huh-7细胞系细胞比较，其抑制LCSLCs细胞活性作用更强(P＜0.05)。肿瘤球形成法检测结果显示，在5.0～20.0μM浓度范围内，BrMC以浓度依赖方式减少LCSLCs的肿瘤球数目(P＜0.05)。FITC-CD133标记FCM分析结果发现BrMC以浓度依赖方式降低LCSLCs的干细胞标志蛋白CD133表达(P＜0.05)。Westernblot法检测显示BrMC以浓度依赖方式降低LCSLCs细胞β-catenin蛋白表达(P＜0.05)。结论1.BrMC具有抑制LCSLCs细胞活性以及自我更新能力作用。2.BrMC可能通过下调细胞β-catenin蛋白表达抑制LCSLCs自我更新能力。
【作者】戴勇；
【导师】廖爱军；
【作者基本信息】南华大学，临床医学、内科学，2012，硕士
【关键词】肝细胞癌；肝癌干细胞样细胞；8-溴-7-甲氧基白杨素；自我更新；

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